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高原鼠兔脑组织中精子特异性乳酸脱氢酶的作用被引量：3: 2015年; 高原鼠兔对高原低氧环境有很强的适应性。研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)基因在高原鼠兔脑组织中表达,为阐明LDH-C4在高原鼠兔脑组织中的作用,应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定了Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中的表达水平;应用对精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)特异性的抑制剂(N-isopropyl oxamate),通过肌肉注射后,研究抑制剂对高原鼠兔脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP含量的影响。结果表明,在mRNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中均有表达,相对表达水平分别为0.38±0.05和0.74±0.13;当肌肉注射1 m L 1 mol/L的抑制剂30 min后,血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L;与对照组相比,抑制剂组脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP含量显著下降,抑制剂对LDH、乳酸和ATP的抑制率分别为30.78%、46.47%和21.04%。结果表明,精子特异性乳酸脱氢酶基因在高原鼠兔脑组织中表达。LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为其脑组织生命活动提供至少20%的ATP,可能使高原鼠兔减小在低氧环境中对氧气的依赖,增强对低氧环境的适应能力。; 许利娜魏莲汪洋李筱魏琳娜魏登邦; 关键词：高原鼠兔脑组织

高原鼠兔心脏中Ldh-c基因的表达及其对无氧糖酵解水平的影响被引量：3: 2015年; 高原鼠兔(Ochotona curzoniae)对高原低氧环境有很强的适应性。本研究组前期研究显示,精子特异性乳酸脱氢酶(sperm-specific lactate dehydrogenase,LDH-C4)基因Ldh-c在高原鼠兔心、肝、脑、肌肉等组织中都有表达。本研究为了阐明LDH-C4对高原鼠兔心肌组织无氧糖酵解水平的影响,将20只高原鼠兔随机分为抑制剂组和空白对照组,每组10只。抑制剂组注射1 m L 1 mol/L LDH-C4特异性抑制剂N-isopropyl oxamate于高原鼠兔股二头肌,双侧各注射500μL;空白对照组注射等量的生理盐水。应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定LDH-C4基因Ldh-c在高原鼠兔心肌组织中的m RNA和蛋白表达水平;比较抑制剂组和空白对照组高原鼠兔心肌组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;以及乳酸(lactate,LD)和ATP含量。结果显示,在m RNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔心肌组织中均有表达,相对表达量分别为0.47±0.06和0.68±0.08;当肌肉注射1 m L 1 mol/L的N-isopropyl oxamate时,30 min后血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L,与空白对照组相比,抑制剂组心肌组织中LDH活力[(6.18±0.48)U/mg vs(9.08±0.58)U/mg]、LD[(0.21±0.03)mmol/g vs(0.26±0.04)mmol/g]和ATP含量[(4.40±0.69)nmol/mg vs(6.18±0.73)nmol/mg]显著下降(P<0.01)。N-isopropyl oxamate对LDH活力、LD和ATP含量的抑制率分别为31.98%、20.90%和28.70%。以上结果说明:Ldh-c基因在高原鼠兔心肌组织中表达;LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为心肌组织的活动提供至少28%的ATP,这可能降低高原鼠兔在低氧环境中对氧气的依赖,增强其对低氧环境的适应。; 李筱魏莲汪洋许利娜魏琳娜魏登邦; 关键词：高原鼠兔心肌组织

高原鼢鼠组织中透明质酸提取工艺及分子表征被引量：1: 2017年; 旨在建立高原鼢鼠组织中透明质酸(Hyaluronic acid,HA)提取工艺。采用单因素试验确定粗提、酶解和除杂等工艺的最佳条件,通过响应面法进一步优化粗提和酶解工艺条件。通过红外分光光度法确定HA的分子结构,Bitter-Muir法确定其葡萄糖醛酸的含量,黏度法和体积排阻色谱法确定透明质酸的分子量。高原鼢鼠最佳粗取工艺∶液料比4 m L/g(水/动物组织,V/W),提取温度26℃,提取时间1.6 h;最佳酶解工艺:酶解温度37℃,p H8.7,加酶量0.7%(1∶250胰蛋白酶/动物组织,W/W);最佳除杂工艺为:氯苯体积20%(氯苯/HA水溶液,V/V),以3倍体积95%乙醇沉淀,以7%活性碳(活性碳/HA水溶液,W/V)除杂,透析时间3 h。在此工艺条件下,每500 g高原鼢鼠组织可得到(144±3.61)mg HA粉末。平均回收率为72.73%。红外图谱显示提取物具有与Sigma公司的HA标准品一致的吸收峰,葡萄糖醛酸的质量分数为45.60%,蛋白质含量为0.11%,其分子量达到3×106 Da。本工艺提取的高原鼢鼠组织来源的HA回收率好,纯度高;高原鼢鼠组织中HA分子量大,含量高。; 魏琳娜汪洋魏登邦魏莲王宁索有瑞; 关键词：高原鼢鼠

腹腔注射腺病毒pMultiRNAi-Ldhc对高原鼠兔骨骼肌Ldhc基因的沉默效果: 2018年; 腹腔注射是一种简单且方便给药的方式,为了验证腹腔注射腺病毒pMultiRNAi-Ldhc对高原鼠兔(Ochotonacurzoniac)骨骼肌Ldhc基因沉默的可行性,将27只高原鼠兔分为干扰组、空壳组和空白对照组,每组各9只个体,干扰组和空壳组分别注射0.65ml腺病毒pMultiRNAi-Ldhc和腺病毒pMultiRNAi-NS,空白对照组注射等量生理盐水,注射后7d检测骨骼肌中Ldhc基因mRNA和蛋白的表达水平,测定了乳酸脱氢酶(LDH)活性和乳酸(LD)及三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果表明,与空白对照组相比,干扰组在mRNA和蛋白水平上,Ldhc基因表达分别降低了41.73%和15.76%;乳酸脱氢酶(LDH)活性、乳酸(LD)和ATP含量分别降低了23.98%、51.08%和19.29%。结果说明,腹腔注射腺病毒pMultiRNAi-Ldhc能有效沉默骨骼肌中Ldhc基因表达。; 王志洁汪洋安志芳魏琳娜魏莲魏登邦; 关键词：腹腔注射高原鼠兔乳酸脱氢酶三磷酸腺苷

高原鼢鼠的学习记忆能力与其脑组织中foxP2基因的高表达有关(英文)被引量：3: 2014年; 高原鼢鼠(Myospalax baileyi)终生营地下洞道生活,具有较强的学习记忆能力和定位洞道中障碍物的能力。叉头框蛋白P2(forkhead box p2,FOXP2)是一种与口面部协调、运动协调功能有关,并且与学习记忆、以及定位功能有密切联系的转录因子。为了研究和探讨foxP2基因与高原鼢鼠发达的学习记忆能力之间的关系,我们克隆了高原鼢鼠foxP2基因的编码区序列;以地面动物高原鼠兔为对照,应用real-time PCR和Western blot分别测定高原鼢鼠脑组织中foxP2 mRNA和FOXP2蛋白的表达水平;应用免疫组织化学法检测FOXP2蛋白在高原鼢鼠脑组织不同区域中的表达。结果显示:(1)与其它哺乳类动物相比,高原鼢鼠foxP2编码区序列相对保守,但其编码的氨基酸序列显示存在两个特殊的氨基酸残基突变;(2)高原鼢鼠foxP2mRNA的表达量极显著高于高原鼠兔(P<0.01);(3)高原鼢鼠FOXP2蛋白的表达量极显著高于高原鼠兔(P<0.01);(4)FOXP2蛋白在高原鼢鼠脑组织不同区域均有表达,其中以大脑皮层、丘脑和纹状体区域表达量较高。本研究结果提示,高原鼢鼠发达的学习记忆能力与foxp2基因在脑组织中的高表达有着密切的联系。; 马本园魏莲孙生祯王多伟魏登邦; 关键词：高原鼢鼠学习记忆

高原鼠兔肝中Ldh-c基因的表达及其对无氧糖酵解水平的影响被引量：4: 2015年; 高原鼠兔(Ochotona curzoniac)对高原低氧环境有很强的适应性。我们研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在高原鼠兔肝组织中表达。为了阐明LDH-C4对高原鼠兔肝组织无氧糖酵解水平的影响,将20只高原鼠兔随机分为抑制剂组和空白对照组,每组10只。抑制剂组注射1 mol/L LDH-C4特异性抑制剂N-异丙基草氨酸盐(N-isopropyl oxamate)于高原鼠兔股二头肌,双侧各注射500μl,空白对照组注射等剂量的0.9%生理盐水。应用荧光定量PCR和western blot方法,测定了精子特异性乳酸脱氢酶基因(Ldh-c)在高原鼠兔肝组织中的表达水平,应用高压液相色谱法测定了血液中抑制剂的浓度,用生物化学方法测定了抑制剂组和空白对照组高原鼠兔肝组织中乳酸脱氢酶(LDH)比活力以及乳酸(LD)和ATP含量。结果表明,在m RNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔肝组织中均有表达,m RNA相对表达水平为0.22±0.04,蛋白相对表达水平为0.97±0.20;当肌肉注射1 mol/L的抑制剂30 min后,血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L,肝组织中乳酸脱氢酶比活力抑制剂组和空白对照组分别为(4 990±290)U/g和(7 360±420)U/g,抑制剂组和空白对照组乳酸含量分别为(0.38±0.05)mmol/g和(0.53±0.03)mmol/g,抑制剂组和空白对照组ATP含量分别为(5.84±0.83)μmol/g和(7.78±1.06)μmol/g,经单因素方差分析,抑制剂组的乳酸脱氢酶比活力和乳酸及ATP含量均显著下降(P<0.01);抑制剂对乳酸脱氢酶比活力和乳酸及ATP含量的抑制率分别为30.19%±3.90%、32.22%±8.70%和24.94%±7.80%。以上结果说明,Ldh-c在高原鼠兔肝组织中表达,LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为其肝组织生命活动提供至少24%的ATP,这可能使高原鼠兔减小了在低氧环境中对氧气的依赖,增强了对低氧环境的适应力。; 魏琳娜魏莲汪洋李筱许利娜魏登邦; 关键词：高原鼠兔肝组织

高原鼢鼠和高原鼠兔骨骼肌糖酵解和肝脏乳酸代谢的差异(英文)被引量：6: 2013年; 高原鼠兔(Ochotona curzoniac)和高原鼢鼠(Myospalax baileyi)是青藏高原地区特有的土著动物。本文旨在探讨高原鼠兔和高原鼢鼠骨骼肌糖酵解和肝脏乳酸代谢的不同生理机制。我们克隆出两种动物肝脏中的丙酮酸羧化酶(pytuvate carboxy-lase,PC)基因的部分序列;应用real-timePCR法测定两种动物肝脏和骨骼肌中PC、LDH-A和LDH-BmRNA的表达水平;使用苹果酸偶联法测定肝脏中PC酶活力,并测定两种动物骨骼肌和肝脏中乳酸含量、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察肝脏和骨骼肌LDH同工酶谱。结果显示:(1)高原鼢鼠骨骼肌LDH-BmRNA的表达量极显著高于高原鼠兔(P<0.01),而LDH-AmRNA的表达量没有差异(P>0.05);(2)高原鼠兔肝脏中PC、LDH-A和LDH-BmRNA的表达量都极显著高于高原鼢鼠(P<0.01);(3)高原鼠兔肝脏和骨骼肌中LDH和乳酸含量以及肝脏中PC活力均极显著高于高原鼢鼠(P<0.01);(4)LDH同工酶谱显示,高原鼠兔骨骼肌以LDH-A4、LDH-A3B、LDH-A2B2为主,而高原鼢鼠骨骼肌以LDH-AB3、LDH-B4为主;在高原鼠兔肝脏中LDH以LDH-A3B,LDH-A2B2,LDH-AB3和LDH-B4为主,而高原鼢鼠肝脏只有LDH-A4。以上结果表明,高原鼠兔通过提高骨骼肌无氧糖酵解的水平为其快速奔跑提供能量,通过提高肝脏中糖异生水平快速将骨骼肌运动所产生的乳酸转化为葡萄糖和糖原,所以减少了在低氧环境中对氧的依赖,而高原鼢鼠尽管生活在低氧的地下洞道,它通过提高骨骼肌有氧糖酵解的水平,为其持续的挖掘活动提供能量。; 孙生祯魏莲魏登邦王多伟马本园; 关键词：高原鼠兔高原鼢鼠乳酸代谢丙酮酸羧化酶乳酸脱氢酶

高原鼠兔血清中N-isopropyl oxamate的RP-HPLC检测方法的建立: 2015年; 目的：探索N-isopropyl oxamate和血清蛋白结合水平,建立高原鼠兔血液中精子型乳酸脱氢酶（LDH-C4）特异性抑制剂N-isopropyl oxamate的高效液相色谱（HPLC）检测方法。方法：取体重150-200 g高原鼠兔20只,随机分为对照组和抑制剂组（n=10）。通过外源性加入不同浓度的N-isopropyl oxamate,检测其与血清蛋白的结合水平。采用将血清先用胰蛋白酶酶解,再加入三氯乙酸的前处理法进行HPLC检测。结果：当空白高原鼠兔血清加入抑制剂标准品达到血清中浓度为0.05 mmol/L、0.1 mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L、16.7 mmol/L、33.3 mmol/L、100 mmol/L时,抑制剂与血清蛋白的结合率分别为100%、100%、100%、86.84%、54.11%、40.10%、20.18%。在本文建立的方法下,回收率、精密度、稳定性均良好。N-isopropyl oxamate在0.0125-0.25 mmol/L内浓度与峰面积线性关系好。空白血清加入标准品达到终浓度为0.15 mmol/L、0.3 mmol/L和1 mmol/L时,平均回收率分别为98.05%、98.98%、98.12%;精密度相对标准偏差（RSD）分别为1.17%、0.92%、0.83%;稳定性RSD分别为1.38%、1.40%、0.88%。方法的重复性RSD为1.76%,最低定量限为0.0125 mmol/L。结论：N-isopropyl oxamate与高原鼠兔血清具有很强的亲和力,直接用三氯乙酸沉淀蛋白的前处理方法无法准确检测其浓度,而先用胰蛋白酶消化血清,再用三氯乙酸沉淀蛋白的方法可实现血液中HPLC的精确检测。; 汪洋魏莲魏琳娜李筱许利娜魏登邦; 关键词：高原鼠兔高效液相色谱

高原鼢鼠prestin基因的组织特异性表达与适应地下生活的关系被引量：1: 2016年; 高原鼢鼠是青藏高原特有的地下鼠,地下鼠具有准确的空间定位能力。Prestin蛋白是在耳蜗特异性表达且与回声定位有关的蛋白分子。为了探讨prestin基因与高原鼢鼠地下空间定位之间的关系,我们克隆了高原鼢鼠prestin基因的编码区序列,并与其他物种的prestin基因进行序列比对;运用PAML软件对高原鼢鼠的prestin基因进行进化分析;根据已克隆的序列,应用实时荧光定量的方法测定高原鼢鼠耳蜗、尾部、足垫和鼻垫组织中prestin基因mRNA的表达水平。研究结果表明,与人、大鼠、小鼠、裸鼢鼠、家兔和牛6种哺乳类动物相比,高原鼢鼠prestin基因编码的氨基酸序列显示存在9个氨基酸残基突变;Test 2模型未检测到统计上显著的正选择位点;高原鼢鼠耳蜗prestin基因mRNA的表达水平显著高于高原鼠兔(P<0.05),高原鼢鼠耳蜗和尾部prestin基因mRNA的表达水平显著高于足垫和鼻垫(P<0.01)。以上结果说明,prestin基因不仅在高原鼢鼠耳蜗中表达,而且在尾部、足垫和鼻垫组织中也有表达。高原鼢鼠在地下洞道生活过程中,可能利用尾巴、前后足和鼻子辅助感知低频声波,从而准确地进行空间定位。; 许利娜魏琳娜汪洋李筱魏莲魏登邦; 关键词：高原鼢鼠组织特异性表达

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国家自然科学基金(31260512)

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