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烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金(2003)

作品数：6 被引量：24H指数：3
相关作者：艾国平粟永萍徐辉彭贤贵孔佩艳更多>>
相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学第三军医大学大坪医院更多>>
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文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 4篇基因
  • 3篇人骨髓
  • 3篇人骨髓间充质...
  • 3篇间充质干细胞
  • 3篇骨髓间充质
  • 3篇骨髓间充质干...
  • 3篇干细胞
  • 3篇充质干细胞
  • 2篇细胞
  • 2篇酵母
  • 2篇基因表达
  • 2篇巴斯德毕赤酵...
  • 2篇毕赤酵母
  • 2篇SDF-1
  • 1篇多聚
  • 1篇多聚酶
  • 1篇多聚酶链反应
  • 1篇胰高血糖素
  • 1篇胰高血糖素样...
  • 1篇增殖

机构

  • 4篇第三军医大学
  • 4篇第三军医大学...
  • 2篇第三军医大学...
  • 2篇重庆医科大学

作者

  • 4篇粟永萍
  • 4篇艾国平
  • 3篇梁雪
  • 3篇陈幸华
  • 3篇孔佩艳
  • 3篇彭贤贵
  • 3篇徐辉
  • 2篇康格非
  • 2篇朱佩芳
  • 2篇蒋建新
  • 2篇吴丽娟
  • 1篇刘晓宏
  • 1篇曾东风
  • 1篇杨天德
  • 1篇谭虎
  • 1篇常城
  • 1篇楼淑芬
  • 1篇黄岚
  • 1篇陶军

传媒

  • 3篇第三军医大学...
  • 1篇重庆医学
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇中国实验血液...

年份

  • 1篇2009
  • 1篇2008
  • 1篇2007
  • 2篇2006
  • 1篇2005
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
SDF-1 cDNA转染人骨髓间充质干细胞的实验研究被引量：1
2008年
本研究旨在探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)cDNA瞬时转染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)前后hBMSCs中SDF-1mRNA表达的情况。在分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)和构建SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体的基础上,通过脂质体介导法将SDF-1真核表达质粒转染至hBMSCs,观测绿色荧光蛋白的表达并用RT-PCR方法检测瞬时转染效率。结果发现:SDF-1-pIRES2-EGFP瞬时转染后hBMSCs的SDF-1mRNA表达增高约20%左右。结论:阳离子脂质体可以将SDF-1cDNA真核表达质粒瞬时转染入hBMSCs,但转染效率低下,不能获得足够数量的稳定转染细胞供后续实验,因此需对转染方法作进一步的探讨。
梁雪粟永萍孔佩艳陈幸华彭贤贵徐辉艾国平
关键词：骨髓间充质干细胞基因转染
人骨髓间充质干细胞的分离培养及表型分析被引量：11
2005年
目的体外分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性,为进一步实验研究打下基础。方法通过密度梯度离心法及贴壁培养分离纯化人骨髓中的单个核细胞、体外培养传代、倒置相差显微镜观察细胞生长情况、瑞氏染色及透射电镜观察细胞形态及结构、绘制生长曲线、流式细胞仪检测细胞表面标记及增殖周期、免疫细胞化学及细胞化学染色对分离培养细胞进行鉴定。结果原代和传代培养的细胞以成纤维样为主,有较强的生长增殖能力;流式细胞仪检测细胞表面标记:CD29、CD105阳性,CD34阴性;细胞周期分析:90%以上的细胞处于G0/G1期;细胞CD106、纤维连接蛋白表达阳性,CD45、CD14及层连蛋白、胶原蛋白Ⅱ表达阴性,细胞糖原(PAS)染色强阳性,细胞碱性磷酸酶(ALP)染色阴性。表明细胞不是造血细胞且未向成纤维细胞、成骨细胞、软骨细胞分化,而是处于未分化阶段的间充质干细胞。结论通过密度梯度离心法及贴壁传代培养可以分离纯化MSCs以满足下一步实验研究,该细胞具有特殊的生物学特性。
梁雪粟永萍孔佩艳陈幸华彭贤贵徐辉常城艾国平
关键词：间充质干细胞骨髓细胞培养
巴斯德毕赤酵母基因组外源基因整合数的高通量定量分析被引量：5
2006年
目的探索一种巴斯德毕赤酵母表达体系外源基因整合数的高通量定量分析方法.方法采用基因工程技术构建pPIC9K-HG质粒作为定量标准品,建立毕赤酵母基因组外源基因整合的高通量定量PCR分析方法,用灵敏度、特异性等对方法进行评价,将之初步用于hA20基因毕赤酵母转化子外源基因整合数的分析.同时对3种酵母基因组制备方法进行了比较.结果方法灵敏度达10^3拷贝,线性范围在10^4～10^9,平均变异系数6.62%,特异性100%.14株hA20基因毕赤酵母转化子外源基因整合数分析显示,成功收获外源基因整合数为单拷贝、3拷贝、10拷贝、13拷贝、17拷贝、50拷贝的阳性转化子.酵母基因组制备经典法、煮沸法和酶法阳性率分别为85.71%、28.57%和85.71%,经χ^2检验证实,酶法与经典法相比提取酵母基因组的效率一致（P＞0.05）;煮沸法与经典法相比提取酵母基因组的效率存在显著性差异（P＜0.05）.结论成功建立了巴斯德毕赤酵母基因组外源基因整合数高通量定量分析方法,方法学评价指标满意,可广泛用于不同外源基因整合之阳性菌株的大批量分析.酶法制备酵母基因组具有可靠、简单、迅速等优点,适合大规模提取酵母基因组.
吴丽娟蒋建新朱佩芳康格非
关键词：基因表达多聚酶链反应基因整合
SDF-1慢病毒表达载体的构建和鉴定被引量：3
2009年
梁雪粟永萍孔佩艳陈幸华彭贤贵曾东风徐辉艾国平
关键词：基质细胞衍生因子-1人骨髓间充质干细胞慢病毒
修饰GLP2分泌性表达载体的构建及促增殖活性测定的实验研究被引量：3
2007年
目的对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2,GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性。方法通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)突变为编码甘氨酸的序列(GGT);将其插入真核表达质粒pVITRO3,转染至肠上皮细胞(Caco-2),观察其对细胞增殖活性的影响。结果克隆的修饰GLP2基因与国外报道的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列完全一致,并成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽;且加入pVITRO3-GLP2-Caco-2培养上清的细胞生长明显快于对照组。结论PCR重叠延伸技术适用于分泌性载体构建。构建的修饰GLP2表达系统所表达的蛋白具有促进肠上皮细胞增殖的作用。
谭虎杨天德粟永萍艾国平黄岚陶军刘晓宏楼淑芬
关键词：胰高血糖素样肽-2基因克隆肠上皮
重组人A20蛋白在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达被引量：1
2006年
目的利用酵母表达技术制备重组人A20蛋白(rhA20),为进一步研究其在脓毒血症中的治疗作用奠定基础。方法利用基因工程技术构建rhA20毕赤酵母表达载体yevCFP-hA20,电转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,筛选高拷贝阳性菌株,甲醇诱导表达rhA20。产物用SDS-PAGE和W estern B lot鉴定。同时对诱导表达培养基的pH值和配方,以及培养环境温度等条件进行了优化研究。结果表达产物分子量约93×103,表达条件的优化研究提示:降低诱导培养基pH值、添加低剂量EDTA、蛋白酶水解物和降低培养温度,可以使全长表达产物提高11倍,占总蛋白的18.24%,达到(254.10±24.52)μg/m l水平。结论我们成功在巴斯德毕赤酵母GS115中表达了rhA20,通过对诱导培养基成分及诱导温度的优化,使全长rhA20表达得到明显提高,探索了人A20的生物合成途径,也为巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白遭遇降解时的处理提供了新的方法。
吴丽娟蒋建新朱佩芳康格非
关键词：基因表达巴斯德毕赤酵母基因工程
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