国家自然科学基金(30770976)
- 作品数：3 被引量：11H指数：3
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- 补体应答基因-32过表达对SW480细胞骨架的影响被引量：4
- 2011年
- 目的通过基因重组技术构建pcDNA3.0-RGC32重组质粒,并检测其对细胞骨架的影响。方法扩增RGC32的全长并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.0,获得重组质粒pcDNA3.0-RGC32,转染SW480细胞,采用G418筛选单克隆,Westernblot检测转染前后SW480细胞中RGC32的表达水平,并制作转染前后SW480细胞骨架标本,并采用划痕实验观察细胞的迁移能力。结果 pcDNA3.0-RGC32真核表达载体构建成功,转染重组载体后细胞中RGC32的表达量明显增多。转染重组质粒前,SW480细胞骨架中微丝纤维束少而短、极性不明显;转染重组载体后的细胞微丝纤维束数量增多,变长,有了明显的极性,并且可见细胞膜向前伸出丝状结构的伪足或者是片状结构的伪足,细胞骨架发生了重组,并且过表达后细胞的迁移能力增强。结论通过过表达RGC32,促进细胞骨架重组,有利于细胞运动,推测细胞骨架重组是RGC32促进肿瘤转移的重要机制。
- 田杰徐川徐川李祖国
- 关键词：细胞骨架结直肠癌
- 非编码基因MALAT1功能性序列真核表达载体的构建及其在SW620细胞中的表达被引量：4
- 2010年
- 目的构建人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)功能性序列重组真核荧光表达载体,并在人大肠癌SW620细胞株中表达。方法采用RT-touchdown PCR方法,从人正常大肠黏膜组织中提取总RNA,扩增MALAT1功能性序列,将扩增产物克隆至pTA2载体,测序证实后,克隆至pEGFP-C1质粒中,构建重组真核荧光表达载体;阳离子脂质体介导下转染人大肠癌SW620细胞,荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。通过Real-time PCR检测质粒转染前后MALAT1/fgf mRNA表达水平的变化。结果经pTA2载体和pEGFP-C1载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实人MALAT1功能性序列重组真核荧光表达载体构建成功。在荧光显微下观察到带绿色荧光的SW620细胞。pEGFP-C1-MALAT1/fgf转染前后SW620细胞MALAT1/fgf mRNA表达水平倍比关系为2.376±0.573,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了人MALAT1功能性序列真核荧光表达载体pEGFP-C1-MALAT1/fgf,转染SW620细胞后可引起MALAT1/fgf mRNA表达上调,为进一步研究MALAT1的结构、功能及其与人大肠癌的关联奠定了基础。
- 杨敏慧王双双王晓燕徐川李祖国
- 关键词：真核表达载体
- MALAT-1基因种属同源序列重组质粒的构建及其与人鼻咽癌细胞株C666-1侵袭转移的关系被引量：4
- 2011年
- 目的：运用基因重组技术构建人MAL-AT-1基因种属同源序列（Species homologous frag-ments/shf）重组真核荧光表达载体,并探讨其在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中的表达和对其侵袭转移的影响。方法：应用RT-touchdown PCR的方法,从鼻咽癌患者正常切缘组织中扩增出MALAT-1基因的种属同源序列,将所得的cDNA序列定向克隆至真核表达载体pEGFP-C1质粒中,构建出重组真核荧光表达载体;采用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒pEGFP-C1-MALAT-1/shf瞬时转染MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1;通过实时荧光定量PCR方法检测MALAT-1基因种属同源序列转染组和空载体转染组细胞中MALAT-1/shf的表达水平;细胞基质胶侵袭实验研究转染组细胞侵袭能力的变化。结果：经酶切鉴定及测序分析,证实成功构建人MALAT-1/shf重组真核荧光表达载体。pEGFP-C1-MALAT-1/shf（6 918~8 441 bp）转染组平均侵袭细胞数（51.20±5.933）显著高于MALAT-1/mock组（13.40±3.847）,差异具有统计学意义（P=0.000）。这说明转染pEGFP-C1-MALAT-1/shf（6 918~8 441 bp）重组质粒后,细胞的侵袭能力明显增强。结论：成功构建了人MALAT-1基因种属同源序列真核荧光表达载体pEGFP-C1-MALAT-1/shf,并成功在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中表达,MALAT-1/shf（6 918~8 441 bp）与人鼻咽癌C666-1细胞株的侵袭转移密切相关。
- 徐川杨敏慧田杰王晓燕李祖国
- 关键词：真核表达载体鼻咽肿瘤
