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黄粉虫抗菌肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测被引量：2: 2011年; 昆虫抗菌肽具有广谱抗菌活性,克隆黄粉虫Tenebrio molitor抗菌肽基因,进行原核表达和活性检测,为昆虫抗菌肽推广应用奠定一定基础。根据GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物,以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因TmAMP3,将其亚克隆至pET-30a表达载体中,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,同时检测生物活性。结果表明我们成功构建了重组质粒pET-30a-TmAMP3,大部分目的蛋白呈可溶性分泌表达。经Ni2+亲和层析,获得较纯融合蛋白HIS-TmAMP3,诱导表达的融合蛋白使BL21转化菌生长受到一定程度的抑制。融合蛋白在100℃煮沸10h、与pH2～12的缓冲液混匀后,依然保持稳定的抗菌活性,具有较强的稳定性。同时检测了融合蛋白对5种菌株的最小抑菌浓度(minimun inhibitory concentration,MIC)。本研究为具有稳定活性抗菌肽进行大规模生产发酵提供了理论基础。; 唐馨毛新芳热西力·克来木刘忠渊; 关键词：黄粉虫抗菌肽蛋白纯化抗菌活性

新疆家蚕抗菌肽基因突变及其抗菌活性的研究被引量：2: 2011年; 为了改变抗菌肽的结构参数,探讨其结构与活性的关系,采用PCR扩增和人工合成基因的方法,对新疆家蚕抗菌肽基因进行改造及原核表达蛋白的抑菌活性研究。结果表明,α-螺旋、两亲性、疏水性、净正电荷数和关键氨基酸的替换等参数是相互依赖、相互影响,协同发挥作用,任何一个参数的改变都会影响抗菌肽整体的活性。α-螺旋是抗菌肽功能有效性的结构基础,但其所处的位置可能并不影响抗菌活性;两亲性结构是抗菌肽与生物膜相互作用的重要结构;疏水性程度必须保持在一定的范围内;在一定范围内增加多肽的阳离子能够增加抗菌活性,但正电荷数和抗菌活性之间无绝对正相关性;色氨酸的存在及抗菌肽的C-末端酰胺化能增强抗菌活性。; 刘忠渊毛新芳张兰廷张富春; 关键词：新疆家蚕抗菌肽结构参数基因突变

两种温度下异长足漠甲(鞘翅目：长足漠甲族)幼期生长发育比较: 2013年; 本研究首次报道温度对异长足漠甲Adesima anomala dejeani Gebl生长发育的影响。异长足漠甲的整个变态过程饲养使用矿泉水瓶法,并优化了此方法,避免过度失水,进行加水并同时观察。随着温度的升高,发育历期缩短,30℃饲养条件下异长足漠甲的总发育历期为117.4 d,33℃的总发育历期为90.99 d;2龄期、5龄期幼虫的头壳长和宽,前胸长和宽,体长,在33℃饲养条件下显著高于30℃;7龄期幼虫的头壳长和宽,前胸宽,体长,在33℃饲养条件下显著高于30℃;5龄期幼虫,温度30℃时的体重为(0.0634±0.021)g,33℃时的体重为(0.0906±0.0313)g,差异显著;6龄期幼虫,蛹期、孵化成虫在温度30℃时存活率高于33℃。; 热西力·克来木阿则古丽·哈木提刘忠渊; 关键词：温度生长发育

新疆家蚕抗菌肽在毕赤酵母中表达及活性研究被引量：3: 2011年; 目的:在毕赤酵母中表达新疆家蚕抗菌肽基因(Cecropin-XJ)并检测其活性。方法:根据作者实验室已克隆获得的新疆家蚕抗菌肽Cecropin-XJ基因设计引物,通过PCR方法扩增Cecropin-XJ,将PCR产物和表达载体pPIC9K用EcoRⅠ及NotⅠ双酶切,构建重组表达质粒pPIC9K-Cecropin-XJ,酶切及测序正确后,电转化到毕赤酵母GS115,对分泌表达的重组蛋白进行活性检测。结果:PCR扩增获得192 bp Cecropin-XJ,成功构建pPIC9K-Cecropin-XJ,优化诱导条件证明在pH 6的BMMY培养液中,0.5%甲醇诱导约48h后,获得的表达产物活性较强,对多种革兰氏阴性菌和阳性菌具有抗菌活性,在100℃条件下,其活性可维持100min以上。结论:新疆家蚕抗菌肽在毕赤酵母中分泌表达,为大规模发酵生产奠定了基础。; 唐馨王慧热西力.克来木毛新芳刘忠渊; 关键词：新疆家蚕抗菌肽毕赤酵母分泌表达抑菌活性

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博士科研启动基金(BS090126)