温州市科技局资助项目(Y20090028)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：陈必成白永恒王本泉陈宗静刘彪更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院温州医科大学更多>>
- 发文基金：温州市科技局资助项目浙江省卫生厅资助项目更多>>
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- 曲古霉素A联合环巴胺对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的本实验旨在研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)联合Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺(CYA)干预对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法采用CCK8方法检测曲古霉素A、环巴胺作用24 h对PANC-1细胞50%抑制浓度(IC50)。用Hochest 33258荧光染色观察曲古霉素A、环巴胺单独及联合处理PANC-1细胞24 h后凋亡;荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测Hedgehog信号通路关键分子及凋亡相关基因mRNA表达的变化;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、活化胱天蛋白酶-3,活化胱天蛋白酶-8,活化胱天蛋白酶-9)及Hedgehog通路关键分子蛋白(Gli1、Smo、Ptc-1)表达的改变;细胞免疫荧光标记法检测Gli1蛋白表达的变化。结果 Hochest 33258染色显示,曲古霉素A及环巴胺均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,24 h IC50分别为(0.51±0.07)μmol·L-1和(33.6±2.3)μmol·L-1,两者联合指数为0.835,具有低度协同作用。曲古霉素A及环巴胺干预后Bcl-2 mRNA表达下降,Bax mRNA表达上调,尤以联合组明显。曲古霉素A 0.5μmol·L-1干预可抑制Gli1 mRNA的表达,联合环巴胺20μmol·L-1后对Hedgehog通路的抑制效应进一步增强,降低Gli1、Smo mRNA表达量,上调Gli3 mRNA的表达。Western印迹结果显示,曲古霉素A 0.5μmol·L-1、环巴胺20μmol·L-1单独及联合处理PANC-1后,凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9活化程度进一步上升,凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降,Hedgehog信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均明显下降,以联合组最为明显。细胞免疫荧光结果也显示Gli1表达明显下降。结论曲古霉素A、环巴胺可协同抑制Hh通路,诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡。
- 尤和谊刘彪王本泉邹乾张玲白永恒周蒙滔陈必成陈宗静
- 关键词：胰腺癌曲古霉素AHEDGEHOG环巴胺
- 曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响
- 目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol·L培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC。TSA 0.4μmol·LPANC-1培养...
- 杨云秀胡孙宽叶星照白永恒王斯璐刘彪王本泉陈必成陈宗静
- 关键词：曲古抑菌素A胰腺癌NOTCH通路
- 文献传递
- JNK通路参与曲古抑菌素A诱导的胰腺癌PANC-1细胞凋亡被引量：2
- 2013年
- 目的研究JNK通路在曲古抑菌素A(TSA)诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡过程中的激活情况,并探讨其机制。方法 PANC-1细胞经TSA 1.0μmol·L-1与JNK抑制剂(SP600125)20μmol·L-1单独或联合处理24h后,分别用CCK-8法和Hoechst33258染色法检测对PANC-1细胞的生长和细胞凋亡的作用;荧光定量PCR检测c-Jun,c-fos,Elk1,bax和bcl-2 mRNA表达;Western蛋白质印迹法检测p-c-Jun、p-JNK、bax、活性胱天蛋白酶8、bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达。结果 CCK-8结果显示,TSA单独处理,PANC-1细胞的存活率随着TSA浓度的增加而降低,并具有一定的量效关系(r=0.9564,P<0.05)。TSA+SP600125组细胞存活率较TSA单独处理明显增加(P<0.05)。Hoechst33258染色显示,正常对照组、TSA组和TSA+SP600125组凋亡率分别为(1.8±0.4)%,(6.2±1.4)%和(3.9±0.9)%,组间差异具有明显的统计学意义(P<0.05,24h)。与TSA组比较,TSA+SP600125组促凋亡基因bax以及JNK通路相关基因c-Jun和c-fos mRNA表达明显降低,Elk1mRNA表达降低,差异显著(P<0.05);而抗凋亡基因bcl-2mRNA表达明显升高(P<0.05)。TSA作用PANC-1细胞1h后激活JNK通路的相关蛋白c-Jun和JNK,并在2h达到最高峰。与TSA组比较,TSA+SP600125组bax及活性胱天蛋白酶8蛋白的表达明显降低(P<0.05),bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白的表达明显升高(P<0.05)。结论激活JNK通路是TSA诱导PANC细胞凋亡的重要机制之一,可能是通过影响线粒体凋亡途径发挥作用。
- 王本泉张玲黄雪陈宗静白永恒吴存造周蒙滔陈必成
- 关键词：胰腺癌曲古抑菌素AJNK通路细胞凋亡
- ARMS法检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变及临床意义被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨应用突变特异性扩增系统法(ARMS)检测非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的特点。方法:收集220例浙江南部地区NSCLC患者肿瘤样本,分别采用ARMS法和测序法检测EGFR基因18、19、20、21号外显子突变情况,并分析EGFR突变与病理类型、突变种类、患者年龄和性别的关系。结果:两方法比较,相符率为86.81%(158/182,Kappa=0.732,P<0.01)。总突变率为47.27%(104/220),其中腺癌的突变率明显高于鳞癌(52.46%vs 17.14%;P<0.01)。肺腺癌中,女性患者EGFR突变率明显高于男性(65.56%vs 39.78%;P<0.01)。突变样本中,21外显子错义突变(L858R)所占比例最高(62.5%,65/104),19外显子缺失(19Del)其次(43.27%,45/104),其中两者同时突变占5.77%(6/104);但腺癌女性与男性患者L858R突变率(64.41%vs 56.76%)不存在显著性差别。结论:采用ARMS法检测EGFR基因突变较测序法敏感,突变主要发生在女性肺腺癌患者,以L858R突变为主。
- 徐慧英洪炜龙谢双双潘晓东白永恒林向阳陈必成
- 关键词：非小细胞肺癌EGFR基因突变ARMS
- 胰腺癌曲古霉素A耐药细胞株转移相关基因表达的研究
- 2013年
- 该实验旨在探讨曲古霉素A（trichostatin A,TSA）对胰腺癌PANC-1细胞株侵袭转移力的影响。分别通过短时间低浓度TSA（0.1~0.2μmol/L）处理胰腺癌细胞株PANC-1 24 h,以及长期低浓度递增法建立TSA耐药株（PANC-1-TSA）。采用CCK8（cell counting kit-8）测得PANC-1、PANC-1-TSA的IC50分别为（0.51±0.09）μmol/L、（78±5）μmol/L,耐药株耐药指数为153。Transwell侵袭小室实验显示,0.1μmol/LTSA处理后,胰腺癌PANC-1细胞侵袭力未见明显改变,而耐药株PANC-1-TSA侵袭力较亲本株明显增强。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）结果显示,耐药株PANC-1-TSA转移相关基因MMP1/2/7/9/14/15及TIMP1/2 mRNA的表达均明显上升,尤以MMPs mRNA明显。在倒置显微镜观察到耐药细胞形态上发生上皮型向间叶型转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）,进一步通过RT-qPCR及蛋白免疫印迹（Western blot）实验证实耐药株发生EMT,其中上皮型标志物表达下降及间叶型标志物表达上升。该实验显示,耐药细胞株PANC-1-TSA侵袭力增强,侵袭、转移相关基因表达明显增加。耐药株形成的过程中,发生上皮–间叶转化（EMT）,EMT可能参与了胰腺癌PANC-1-TSA细胞株侵袭能力的增强。
- 刘彪陈孝倩张翠王本泉白永恒王斯璐金嵘周蒙滔陈必成
- 关键词：胰腺癌
- 曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol.L-1培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC50。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～48 h,Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～12 h,检测胱天蛋白酶3活性。TSA 0.4μmol.L-1与PANC-1培养24 h,实时定量PCR检测c-myc,p53,Bcl-2,Bax,存活素,基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)和Notch-1基因的表达。TSA 0.4和0.6μmol.L-1与PANC-1培养24 h,细胞免疫化学方法检测Notch-1蛋白的胞内活性形式NICD表达。结果TSA可以明显抑制PANC-1细胞增殖,12,24和48 h的IC50值分别为0.42,0.32和0.19μmol.L-1,具有量效(r=0.640,P=0.01)和时效(r=0.768,P=0.002)关系。Hoechst 33258染色结果表明,TSA 0.4μmol.L-1增加PANC-1细胞核的蓝色荧光并出现凋亡特征。TSA 0.4μmol.L-1作用4,8和12 h后,胱天蛋白酶3的活性分别为正常对照组的1.62±0.12,2.68±0.17和(3.92±0.23)倍。PCR结果显示,TSA 0.4μmol.L-1作用24 h后,p53,c-myc和存活素mRNA表达下降,分别为对照组的(18.3±5.1)%,(24.2±0.9)%和(15.8±1.0)%,Bcl-2和Notch-1 mRNA未见明显变化,而Bax,MMP1和TIMP-1 mRNA升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低到正常对照组的(13.0±2.8)%。Notch-1活性分子NICD明显升高(P<0.05)。结论TSA可通过线粒体途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,而且使Notch-1激活,促进转移相关基因表达。
- 杨云秀胡孙宽叶星照白永恒王斯璐刘彪王本泉陈必成陈宗静
- 关键词：曲古抑菌素A胰腺癌NOTCH通路
