国家自然科学基金(30770946)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：熊盛道熊维宁胡琼洁徐国鹏邵冰更多>>
- 相关机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院华中科技大学南京医科大学更多>>
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- 环丙沙星联合乳铁蛋白多肽嵌合体对铜绿假单胞菌毒力因子的影响被引量：4
- 2013年
- 目的研究环丙沙星(CIP)、乳铁蛋白多肽嵌合体(LFchimera)单用及二者联合对铜绿假单胞菌毒力因子生成的影响。方法以铜绿假单胞菌野生菌株PAO1为实验菌株,分为对照组(无任何干预的铜绿假单胞菌野生菌株PAO1),CIP(0.04μg/mL)组,LFchimera(0.25μmol/L)组,LFchimera(1μmol/L)组,CIP(0.04μg/mL)+LFchimera(1μmol/L)组,分别测定毒力因子绿脓菌素的浓度(氯仿萃取法)、弹性蛋白酶(弹性蛋白-刚果红法)、胞外蛋白水解酶(偶氮酪蛋白法)。结果和对照组比较,CIP组,LFchimera(0.25μmol/L)组,LFchimera(1μmol/L)组,CIP(0.04μg/mL)联合LFchimera(1μmol/L)组的绿脓菌素浓度下降,弹性蛋白酶和蛋白水解酶活性降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);CIP组和LFchimera(0.25μmol/L)组比较,绿脓菌素浓度、弹性蛋白酶和蛋白水解酶活性的差异均无统计学意义(均P>0.05);LFchimera(1μmol/L)组绿脓菌素浓度、弹性蛋白酶和蛋白水解酶活性较CIP组和LFchimera(0.25μmol/L)组降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);CIP(0.04μg/mL)联合LFchimera(1μmol/L)组和各单独用药组比较,绿脓菌素浓度下降,弹性蛋白酶和蛋白水解酶活性降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论亚抑菌浓度的CIP和LFchimera都对铜绿假单胞菌毒力因子(绿脓菌素、弹性蛋白酶和蛋白水解酶)的生成有抑制作用,随着LFchime-ra浓度的提高这种抑制作用加强,而CIP联合LFchimera能进一步增强这种抑制作用,说明两者在抗铜绿假单胞菌毒力因子方面有协同作用。
- 左鹏王正云徐国鹏胡琼洁邵冰熊维宁熊盛道
- 关键词：铜绿假单胞菌环丙沙星乳铁蛋白多肽毒力因子
- AiiA蛋白对铜绿假单胞菌毒力因子生成的影响
- 2008年
- 目的构建苏云金杆菌AiiA基因的真核表达载体并转染A549细胞，观测真核细胞表达的AiiA蛋白对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,pa）密度感应（quorum sensing）系统酰基高丝氨酸内酯（N-acylhomoserine lactone，AHL）信号分子及毒力因子合成的影响。方法质粒pET-AiiA经Nhe Ⅰ与Xho Ⅰ酶切后，将AiiA基因片段连接入真核表达质粒pEGFP-N2，脂质体转染A549细胞，提取细胞蛋白，Western blot检测AiiA蛋白表达。将蛋白提取物加入凡培养物中，观察Pa AHL信号分子及毒力因子绿脓素、弹性蛋白酶的生成情况。结果AiiA基因片段成功克隆入真核表达质粒pEGFP-N2，转染该质粒后的A549细胞能够表达AiiA蛋白，且该蛋白能够降低凡培养物中AHL信号分子水平，且绿脓素和弹性蛋白酶的生成减少。结论本研究成功构建了真核表达质粒pEGFP-N2-AiiA，转染细胞后表达的AiiA蛋白能够水解AHL信号分子，减少凡毒力因子的生成，故具有抗Pa感染的潜在价值。
- 杨硕熊盛道熊维宁许淑云兰芬史雪梅徐国鹏陆小霞胡琼洁
- 关键词：铜绿假单胞菌密度感应毒力因子
- 乳铁蛋白多肽嵌合体对铜绿假单胞菌PAO1及PAO-JP2型菌株QS毒力因子的作用被引量：3
- 2013年
- 目的观察乳铁蛋白多肽嵌合体(LFchimera)对铜绿假单胞菌PAO1及PAO-JP2型菌株QS毒力因子的影响。方法以PAO1和PAO-JP2为试验菌株,分为A、B、C、D四组。A组:未作任何干预的铜绿假单胞菌PAO1;B组:LFchimera(1μmol/L)干预的铜绿假单胞菌PAO1;C组:未作任何干预的铜绿假单胞菌PAO-JP2;D组:LFchimera(1μmol/L)干预的铜绿假单胞菌PAO-JP2。分别测定毒力因子绿脓菌素(氯仿萃取法)、弹性蛋白酶(弹性蛋白-刚果红法)、胞外蛋白水解酶(偶氮酪蛋白法)。结果和A组各毒力因子(绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶)的活性表达(7.03±0.14、0.149±0.009、0.808±0.038)比较,B组铜绿假单胞菌PAO1菌株的表达(3.07±0.13、0.046±0.004、0.325±0.022)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。C组铜绿假单胞菌PAO-JP2菌株各毒力因子(绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶)的活性表达(0.76±0.04、0.015±0.003、0.054±0.006)和D组(0.74±0.05、0.014±0.002、0.053±0.005)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LFchimera可能通过抑制铜绿假单胞菌QS系统减弱其相关毒力因子的活性,从而发挥抗感染作用。
- 左鹏王爱利王正云胡琼洁邵冰熊维宁熊盛道
- 关键词：乳铁蛋白肽类
- 环丙沙星与乳铁蛋白多肽嵌合体联用对铜绿假单胞菌生物膜及密度感知系统信号分子生成的抑制作用被引量：2
- 2015年
- 目的比较环丙沙星(CIP)、乳铁蛋白多肽嵌合体(LFchimera)单用及二者联用对铜绿假单胞菌生物膜及密度感知(QS)系统信号分子(AHL)生成的抑制作用。方法以铜绿假单胞菌野生菌株PAO1为实验菌株,分为对照组(未干预的铜绿假单胞菌野生菌株PAO1)、CIP(0.04μg·m L-1)组、LFchimera(0.25μmol·L-1)组、LFchimera(1.00μmol·L-1)组、CIP(0.04μg·m L-1)+LFchimera(1.00μmol·L-1)组,分别定量测定并比较各组PAO1生物被膜和QS系统信号分子表达。结果与对照组PAO1生物膜定量表达(A590)(1.511 3±0.031 8)及QS系统信号分子表达(A420)(0.502 5±0.028 3)比较,CIP(0.04μg·m L-1)组(1.073 3±0.010 9,0.245 3±0.014 0)、LFchimera(0.25μmol·L-1)组(1.065 5±0.011 4,0.235 9±0.010 7)、LFchimera(1.00μmol·L-1)组(0.665 3±0.012 9,0.108 6±0.007 0)和CIP(0.04μg·m L-1)+LFchimera(1.00μmol·L-1)组(0.122 1±0.013 0,0.048 2±0.005 4)均下降(均P<0.05);CIP(0.04μg·m L-1)组和LFchimera(0.25μmol·L-1)组比较,PAO1生物膜定量表达和QS系统信号分子表达差异无统计学意义(P>0.05);LFchimera(1.00μmol·L-1)组PAO1的生物膜定量表达和QS系统信号分子表达较LFchimera(0.25μmol·L-1)组和CIP(0.04μg·m L-1)组均降低(均P<0.05);CIP(0.04μg·m L-1)+LFchimera(1.00μmol·L-1)组和各单独用药组比较,PAO1生物膜的定量表达和QS系统信号分子表达均下降(均P<0.05)。结论亚抑菌浓度的CIP和LFchimera都对铜绿假单胞菌生物膜的形成和QS系统信号分子的生成有抑制作用,且提高LFchimera浓度可加强抑制作用;CIP与LFchimera联用能增强抑制作用,这种作用可能是通过抑制QS系统信号分子的生成实现。
- 左鹏王爱利王正云徐国鹏胡琼洁邵冰徐西琳熊维宁熊盛道
- 关键词：环丙沙星乳铁蛋白铜绿假单胞菌生物膜
- 大鼠对氧磷酶1真核表达载体的构建及在体外的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建大鼠对氧磷酶1(paraoxonase1,PON1)真核表达载体,并检测其在体外培养细胞中的表达及功能,为进一步探索运用其进行基因防治肺部感染奠定基础。方法利用RT-PCR扩增大鼠PON1编码区全长序列,克隆入pcDNA3.1(+),鉴定无误后,脂质体转染A549细胞及293细胞,Western印迹检测蛋白表达,并检测其芳香酯酶活性及对铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能。结果分别从大鼠肝组织中扩增出1153bp片段,克隆入表达载体后进行酶切鉴定和测序结果正确。转染细胞后能够表达目的蛋白,该蛋白具有芳香酯酶和AHLs内酯酶活性。结论成功构建了含有大鼠PON1真核表达载体,质粒能够在真核细胞中表达,能够有效地水解铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子。
- 杨硕熊盛道熊维宁许淑云史雪梅徐国鹏兰芬陆小霞胡琼洁
- 关键词：铜绿假单胞菌对氧磷酶
- 对氧磷酶1对铜绿假单胞菌绿脓素生成及其细胞氧化损伤的影响被引量：2
- 2009年
- 目的研究对氧磷酶1(PON1)在铜绿假单胞菌绿脓素生成及绿脓素所致细胞损伤中的作用,探讨其在防治肺部铜绿假单胞菌感染方面的可能作用。方法①以293细胞为表达细胞,分为pcDNA 3.1(+)-PON1转染组、pcD-NA3.1(+)-EGFP转染组及生理盐水组,转染细胞后,将细胞蛋白提取物或生理盐水混入铜绿假单胞菌培养物中,过夜培养后检测培养物中密度感知系统信号分子——酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactone,AHL)及绿脓素水平。②以A549细胞为效应细胞,分为转染组、未转染组及生理盐水组。转染组采用pcDNA3.1(+)-PON1转染A549细胞后并经G418筛选的阳性克隆细胞,未转染组采用普通A549细胞,培养液中加入绿脓素(30μg/ml),生理盐水组为培养液中加入生理盐水的普通A549细胞,观察细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性。结果①pcDNA3.1(+)-PON1转染组铜绿假单胞菌培养物中AHL信号分子水平和绿脓素水平较生理盐水组和pcDNA3.1(+)-EGFP转染组均明显降低;②绿脓素作用后,未转染组细胞内氧化应激水平较生理盐水组明显升高,而转染组较未转染组有所下降。结论PON1不仅能够减少铜绿假单胞菌绿脓素的生成,而且可以减轻绿脓素所致的细胞氧化损伤,可能具有防治铜绿假单胞菌感染的潜在价值。
- 杨硕熊盛道熊维宁许淑云兰芬史雪梅徐国鹏陆小霞胡琼洁
- 关键词：铜绿假单胞菌对氧磷酶
- 沙美特罗/氟替卡松对支气管哮喘患者血清IL-21与总IgE水平的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨沙美特罗/氟替卡松干粉吸入剂对哮喘患者血清白细胞介素21(interleukin-21I,L-21)和总免疫球蛋白E(immunoglobulin EI,gE)水平的影响,以及哮喘患者血清IL-21和总IgE水平的相关性。方法收集哮喘急性发作期患者45例(哮喘组),哮喘缓解期患者(急性发作期患者控制急性发作后经沙美特罗/氟替卡松规范吸入治疗3个月达到缓解期后复查)30例(治疗组)和健康志愿者20例(对照组)血清,双抗体夹心法酶联免疫吸附实验检测各组血清IL-21和总IgE蛋白水平。结果哮喘组患者血清IL-21水平明显高于对照组(P<0.05),治疗组IL-21水平明显低于哮喘组(P<0.05),且治疗组和对照组差异无统计学意义。哮喘组和治疗组血清总IgE水平均明显高于对照组(P<0.05),哮喘组和治疗组差异无统计学意义。哮喘组血清IL-21水平和总IgE水平显著负相关(r=-0.32,P<0.05)。结论沙美特罗/氟替卡松规范吸入治疗能降低哮喘患者炎症因子IL-21的水平,可能是其治疗哮喘的重要机制之一。
- 李开艳熊盛道朱晶曹勇熊维宁
- 关键词：白细胞介素21免疫球蛋白E
