国家自然科学基金(30770936)
- 作品数：26 被引量：78H指数：5
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- 罗格列酮对PDGF-BB刺激的人气道平滑肌细胞增殖的影响
- 2008年
- 目的探讨罗格列酮对血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)刺激的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响。方法组织块贴壁法培养HASMCs鉴定后,接种于96孔板,除空白对照组外,A、B、C、D组各孔在加入PDGF-BB前30 min分别加入0、1、5、10μmol/L罗格列酮。MTS/PMS微量比色法检测各组HASMCs细胞A490吸光度,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果A组A490值高于空白对照组,B、C、D各组均高于A组(P均<0.05);与空白对照比较,单加入PDGF-BB后G0/G1期细胞比率降低,S期升高;用1、5、10μmol/L罗格列酮预处理的ASMCs在G0/G1期细胞比率逐渐升高,S期逐渐降低(P均<0.05)。结论罗格列酮呈剂量依赖性抑制PDGF-BB刺激的HASMCs增殖。
- 任敦强罗雅玲赖文岩黎振兴赵燕霞
- 关键词：罗格列酮血小板源性生长因子BB气道平滑肌细胞细胞增殖
- 巨噬细胞移动抑制因子促进肺成纤维细胞增殖和胶原合成被引量：9
- 2009年
- 目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:不同浓度的rMIF(25-100μg/L)分别作用于MRC-5细胞12 h、24 h或48 h,用CCK-8法测细胞增殖率,羟脯氨酸法检测细胞上清胶原水平,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,Western blot-ting检测成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原。结果:与对照组比,50μg/L和100μg/L的rMIF刺激24 h和48 h,显著促进MRC-5增殖(P<0.05或P<0.01)。刺激48 h后,细胞培养上清中,对照组及实验组均可检测到羟脯氨酸,100μg/L rMIF显著促进羟脯氨酸分泌(P<0.01);rMIF能够剂量依赖地刺激Ⅰ型胶原mRNA和蛋白合成(P<0.05或P<0.01)。结论:rMIF通过刺激成纤维细胞增殖及胶原合成,可能在哮喘气道重塑的发病机制中发挥关键作用。
- 陈培芬罗雅玲赖文岩邢晓雯胡斯明
- 关键词：巨噬细胞游走抑制因子成纤维细胞胶原
- PTEN基因表达改变对人气道平滑肌迁移的影响被引量：2
- 2011年
- 目的通过腺病毒载体体外转染人气道平滑肌细胞(HASMC),使肿瘤抑制基因PTEN过表达和RNA干扰表达,观察其对HASMC迁移的影响,并探讨其作用机制。方法利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN)转染HASMC细胞,并以感染空载腺病毒Ad-GFP和空白组(DMEM)作为对照,用流式细胞计数确立最佳转染复数后,通过Transwell趋化小室和细胞划痕实验检测HASMC跨膜迁移能力和横向迁移能力的变化。Western blotting检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况,并加入两通路的抑制剂作为阳性对照。结果腺病毒搭载的PTEN基因过表达和干扰载体能成功改变PTEN基因的表达。上调PTEN表达能显著抑制HASMC迁移;蛋白水平上抑制PI3K/AKT通路,而MAPK/ERK通路未见变化。下调PTEN表达不能明显促进HASMC迁移;但在蛋白水平能使PI3K/AKT通路激活,而MAPK/ERK通路却受到抑制。结论上调PTEN表达能有效抑制HASMC的迁移,可能主要是通过抑制PI3K/AKT通路起作用。
- 高杨钟浩海罗雅玲赖文岩徐健张达成蓝海兵
- 关键词：PTEN人气道平滑肌迁移PI3K/AKT
- 支气管哮喘患者诱导痰中甲壳质酶蛋白40的表达及其意义被引量：2
- 2012年
- 甲壳质（chitin）是自然界含量第二多的多糖类，并能被甲壳酶降解。CH13L1基因是一种甲壳酶类似基因，其编码的蛋白称为人类软骨糖蛋白39或者甲壳质酶蛋白40（YKL-40）。
- 张达成邵金莲肖端王春莲全国莉
- 关键词：甲壳质酶蛋白诱导痰人类软骨糖蛋白39L1基因多糖类
- 肿瘤抑制基因PTEN对人气道平滑肌细胞迁移和增殖的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察肿瘤抑制基因PTEN对人气道平滑肌细胞(HASMCs)迁移和增殖的影响机制。方法用重组PTEN腺病毒转染体外培养的HASMCs(Ad-PTEN组),并与携带绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒空载体(Ad-GFP组)和空白对照(MOCK)组对比,采用MTS测定细胞增殖、Transwell法观察细胞迁移、共聚焦显微镜观测细胞骨架的变化、免疫印迹法检测PTEN、p-Akt、Akt、p-FAK、FAK蛋白的表达。结果 Ad-PTEN组的吸光度(A)值和每单位面积迁移的细胞数显著低于Ad-GFP及MOCK组(均P<0.05),Ad-GFP和MOCK两对照组间差异无统计学意义(P>0.05),提示过表达PTEN基因能抑制HASMCs的增殖和迁移的作用。Ad-PTEN组细胞轮廓变细,伪足及应力纤维明显变少,而Ad-GFP、MOCK组细胞有少量短而细的应力纤维,很少丝状伪足形成。与AdGFP及MOCK组比较,Ad-PTEN组p-Akt表达水平和FAK蛋白的磷酸化水平显著下调(均P<0.05),Ad-GFP及MOCK两对照组间差异无统计学意义(P>0.05),说明过表达PTEN能下调Akt蛋白和FAK蛋白的磷酸化水平。结论过表达PTEN可能通过下调p-Akt及p-FAK的表达,抑制HASMCs的增殖和迁移,参与哮喘气道重塑的调控。
- 蓝海兵罗雅玲赖文岩龚园其
- 关键词：肿瘤抑制基因PTEN气道平滑肌细胞迁移增殖
- 巨噬细胞移动抑制因子经Rho激酶途径促进人胚肺成纤维细胞表型转化
- 目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)表型转换的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:不同浓度的rMIF(25～100μg/L)分别作用于MRC-5细胞24 h或48 h,RT-...
- 陈培芬邱智辉张香梅黎振兴罗雅玲赖文岩孙秀才
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子成纤维细胞肌成纤维细胞RHO相关激酶类
- 文献传递
- 改变PTEN基因表达影响支气管平滑肌细胞增殖被引量：1
- 2010年
- 目的:通过基因过表达和RNA干扰(RNAi)技术改变PTEN基因的表达并观察其对人支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖和相关信号通路的影响。方法:利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN),转染BSMC细胞,建立PTEN基因过表达细胞模型Ad-GFP-PTEN-BSMC和PTEN基因沉默细胞模型Ad-GFP-shPTEN-BSMC,并以感染Ad-GFP和空白组作为对照。通过荧光倒置显微镜检测转染效率;Westernblot法检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况;MTS/PMS法检测细胞生长的变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:腺病毒介导的过表达载体和shRNA载体都能有效改变PTEN基因的表达。PTEN基因表达上调后,BSMC细胞生长受到抑制,G0-G1期细胞增多,S期细胞和G2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路受到抑制,而MAPK/ERK通路未见变化;PTEN基因表达下调后,BSMC细胞生长受到促进,S期细胞增多,G0-G1期细胞和G2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路激活,但MAPK/ERK通路却受到抑制。结论:PTEN基因可能主要通过调节PI3K/AKT通路影响人支气管平滑肌细胞的生长。
- 张达成罗雅玲赖文岩钟浩海陈丽丽
- 关键词：腺病毒载体细胞增殖AKTERK1/2
- 地塞米松对哮喘小鼠肺组织IL-21及其受体表达的干预作用被引量：6
- 2013年
- 目的研究慢性哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21受体(IL-21R)表达的变化,探讨地塞米松(Dex)对小鼠肺组织IL-21与IL-21R表达的影响。方法 SPF级BALB/c雌性小鼠33只,随机分为对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组,每组11只。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠支气管哮喘模型;HE染色观察气道炎症程度;测量支气管壁厚度及平滑肌厚度;免疫组织化学和免疫印迹法分析小鼠支气管肺组织中IL-21蛋白与IL-21R蛋白的表达。结果哮喘组小鼠支气管壁厚度及平滑肌厚度较对照组增加(P<0.01),地塞米松组支气管壁厚度与平滑肌厚度低于哮喘组(P<0.01)。哮喘组小鼠肺组织IL-21蛋白与IL-21R蛋白的表达高于对照组(P<0.05),地塞米松组IL-21蛋白与IL-21R蛋白表达低于哮喘组(P<0.05)。结论哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21R的表达增强,地塞米松抑制哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21R的表达。
- 宫静任敦强罗雅玲赖文岩李俊红王慰盈
- 关键词：IL-21哮喘地塞米松小鼠
- PTEN重组腺病毒载体的构建及其在气道平滑肌细胞的表达被引量：1
- 2009年
- 目的应用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体。方法将PTENcDNA自载体pcDNA3-PTEN中切出,克隆至穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdxsi在化学感受态细胞DH5α菌株内同源重组,经Pac-Ⅰ线性化后,重组子通过脂质体2000介导转染HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒,并测定其滴度,通过荧光显微镜能观察HEK293细胞内绿色荧光的表达;PCR检测腺病毒载体PTEN mRNA的表达,Western blotting检测PTEN蛋白在气道平滑肌细胞的表达。结果感染腺病毒载体的HEK293细胞表达GFP随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增后病毒达到合适的滴度,构建的Ad-PTEN腺病毒滴度为2×1010pfu/ml,PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳证实其表达,Western blotting检测到腺病毒感染的气道平滑肌细胞内PTEN蛋白表达明显增高。结论成功构建了携带野生型PTEN腺病毒载体,为进一步研究PTEN基因应用于哮喘治疗提供了实验基础。
- 钟浩海罗雅玲赖文岩徐健陈丽丽叶涵
- 关键词：PTEN腺病毒载体气道平滑肌细胞哮喘
- IL-22对人气道细胞的作用被引量：5
- 2011年
- 目的探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用。方法用实时定量PCR检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化。不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和气道成纤维细胞后,用MTT法检测细胞的增殖,用流式细胞技术(FACS)检测细胞的凋亡和坏死。结果哮喘血清刺激后气道上皮细胞IL-22R1 mRNA表达降至正常对照组的9%,气道平滑肌细胞IL-22R1 mRNA表达升高至正常对照组的345倍,而气道成纤维细胞IL-22R1 mRNA表达无明显变化。高剂量(1 000 ng/ml)的IL-22刺激气道上皮细胞和气道成纤维细胞12、24 h可显著降低细胞增殖(P<0.05,P<0.01)。三种不同浓度的IL-22刺激气道上皮细胞24 h后均导致细胞凋亡显著下降(P<0.05),低浓度的IL-22(10 ng/ml)导致细胞坏死增加(P<0.01)。不同浓度的IL-22刺激气道平滑肌细胞后,细胞凋亡和坏死无显著性变化。中、高浓度IL-22(100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道成纤维细胞后,细胞坏死率显著下降(P<0.05)。结论 IL-22在支气管哮喘中对气道上皮的作用具有双重性,并与支气管哮喘的病程相关;而对气道平滑肌细胞的作用则可能与浓度及病程相关。支气管哮喘后续阶段,IL-22对气道成纤维细胞作用轻微。
- 张旃蓝海兵周丽丽赖文岩徐建黎振兴任敦强叶涵钟浩海罗雅玲
- 关键词：白细胞介素-22气道上皮细胞气道平滑肌细胞
