国家自然科学基金(30770912)
- 作品数：15 被引量：48H指数：5
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- 慢病毒转染脐血CD34^+造血干细胞方法的优化被引量：1
- 2013年
- 目的探讨慢病毒载体系统转染人脐血CD34+造血干细胞优化的转染方法。方法采用第二代、第三代慢病毒载体系统,通过改变病毒浓度、感染体积、感染复数(MOI)值、感染方式、感染时间和感染后培养基等各方面条件,将表达绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pTRIPdU3-RNAiTALh-EF1a-GFP转染CD34+干细胞,于37℃、5%CO2的孵箱中培养14d后,在光学显微镜下进行集落计数和分类,并与未转染的CD34+干细胞进行比较,从而筛选出优化的转染方法。结果三质粒系统的第二代慢病毒载体转染率高于四质粒系统的第三代慢病毒载体。优化的转染条件为:新鲜分选的CD34+细胞于当日(0d),在含病毒滴度107 TU、Polybrene 2μg/mL的opti-MEM培养液中,细胞和病毒混合液于平底12孔板孔中,200×g离心1h,离心后继续共培养8h,再换新的病毒液200×g离心1h,共培养8h。按照含细胞因子的液体培养基∶半固体培养基=1∶1的比例配置转染后培养基,继续培养,可以获得较高感染率。感染病毒后的CD34+干细胞培养14d后,与未感染的CD34+细胞相似,可以形成各类血细胞集落。结论优化的慢病毒转染方法可以有效感染CD34+造血干细胞,而不影响干细胞的分化功能。
- 周睿卿龚玉萍林娟何茜万永凤
- 关键词：慢病毒载体CD34+造血干细胞基因转染
- 丹参酮ⅡA对白血病细胞株K562增殖抑制及机制研究被引量：4
- 2014年
- 目的探讨丹参酮ⅡA（TAT）对人白血病细胞株K562的生长抑制作用及其可能机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测TAT（终浓度1、10、15、30、50μmol／L）对K562细胞的增殖抑制作用，光学显微镜观察TAT（30μmol／L）作用24h后K562细胞的形态变化，流式细胞术检测细胞凋亡率，Westernblot法检测凋亡蛋白BCL-2、BAX的表达和蛋白激酶AKT／mTOR信号通路的变化。结果终浓度为10～50μmol／L的TAT对K562细胞的生长具有抑制作用，与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05），TAT作用K562细胞96h的半数抑制浓度（IC50）值为（7．75±2．47）μmol／L。30μmol／LTAT作用K562细胞24h后显微镜下显示细胞破坏明显，部分细胞裂解成碎片。流式细胞仪检测发现30μmol／L TAT作用组凋亡细胞明显增多（P〈0．05）。Western blot结果提示，30μmol／LTAT作用K562细胞后AKT、mTOR、p70S6K、4-EBP1等信号通路关键点蛋白磷酸化表达水平减低，凋亡抑制蛋白BCL-2下调，而促凋亡蛋白BAX上调。结论TAT通过抑制AKT／m—TOR信号通路，下调BCL-2和上调BAx的表达，促进细胞凋亡，抑制白血病细胞株K562的生长。
- 单卿卿郭勇龚玉萍
- 关键词：白血病细胞株K562凋亡AKTMTOR信号通路
- 冬凌草甲素抗Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病效应的实验研究被引量：10
- 2012年
- 目的探讨冬凌草甲素对Ph染色体阳性（Pb＋）急性淋巴细胞白血病（ALL）的抗白血病效应及其机制。方法以Ph＋ALL细胞株SUP—B15为研究对象，应用改良MTT法测定冬凌草甲素对SUP—B15细胞增殖的影响，计算72h的半数抑制浓度（IC50）；光学显微镜下观察冬凌草甲素处理后SUP—B15细胞的形态学变化；用流式细胞术检测药物作用前后SUP—B15细胞的凋亡率；以K562细胞为对照，应用Westernblot法比较药物作用前后SUP—B15细胞Akt／mTOR、Raf／MEK／ERK、STAT5信号转导通路活化水平，以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果①冬凌草甲素呈浓度及时间依赖地抑制SUP—B15细胞增殖，作用72h的IC50值为（7．08±1．21）μmol／L；②冬凌草甲素处理24h后光学显微镜下SUP—B15细胞边界不清晰，部分细胞崩解；③0、5、10μmol／L冬凌草甲素作用24h后，SUP—B15细胞凋亡百分率分别为（6．67±0．83）％、（18．30±1．79）％、（37．63±7．12）％；④冬凌草甲素明显抑制SUP-B15细胞ABL酪氨酸激酶及其下游Akt／mTOR、Raf／MEK／ERK、STAT5多条信号转导通路的活化；下调SUP．B15细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论冬凌草甲素通过抑制ABL酪氨酸激酶及其下游Akt／mTOR、Raf／MEK／ERK、STAT5信号转导，以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗Ph＋ALL作用。
- 郭勇单卿卿龚玉萍林娟杨曦周睿卿
- 关键词：淋巴细胞急性费城染色体冬凌草素细胞内信号肽和蛋白质类
- 雷帕霉素单药及联合硼替佐米、柔红霉素对白血病细胞株抗肿瘤效应的研究被引量：7
- 2010年
- 雷帕霉素是大环内酯类抗生素，因其强效的免疫抑制和抗细胞增殖活性，主要用于器官移植后急性排斥反应的防治。近年来研究发现血液肿瘤细胞存在P13K／AKT／mTOR信号通路的激活，而雷帕霉素能特异性结合并抑制rnrrOR的活性，导致肿瘤细胞周期阻滞和细胞凋亡，
- 杨曦龚玉萍杨雷周睿卿邢宏运郑波慧
- 关键词：抗肿瘤效应雷帕霉素白血病细胞株硼替佐米柔红霉素P13K/AKT
- SCL／TAL-1基因沉默对EPO诱导的K562细胞红系分化的影响被引量：2
- 2012年
- 目的通过RNA干扰技术降低SCL／TAL-1mRNA的表达，探讨SCL／TAL-1在K562细胞红系分化中的作用。方法以EPO诱导白血病细胞系K562细胞向红系分化为模型，将靶向SCL／TAL-1基因的特异性短发夹RNA（shRNA）慢病毒质粒pTRIP—dU3-RNAiTALh—EF1a—GFP转染K562细胞，RT—PCR检测其SCL／TAL—l和红系相关基因RhD、血型糖蛋白A（GPA，即CD253a）、CD47mRNA表达水平变化，流式细胞术分析红系分化抗原CD71、CD253a的表达，并以空载体质粒pTRIP—dU3-RNAi—luc—EF1-GFP转染的K652细胞为对照。结果①通过慢病毒转染系统将含SCL／TAL．1shRNA的质粒及空载体质粒转染K562细胞48h，绿色荧光蛋白（GFP）＋细胞占总细胞的95％以上，表明感染率达到95％以上。②RT—PCR结果显示转染特异性shRNA的K562细胞SCL／TAL-1mRNA表达水平比空载体对照明显下调（P〈0．05），红系抗原CIM7和RhDmRNA水平也比对照组明显下调（P〈0．05），GPA有所下降，但没有CIM7和RhD下降程度大。③流式细胞术检测到SCL／TAL-1低表达组红系分化抗原CD71、CD235a表达降低，表达率分别是10．4％、76．5％，而在对照组的表达率分别为94．3％、83．6％。结论研究结果提示转录因子SCL／TAL．1参与了红系定向分化。
- 周睿卿龚玉萍郭勇单卿卿杨曦
- 关键词：细胞分化RNA干扰
- 硼替佐米联合柔红霉素对T系急性淋巴细胞白血病细胞株CEM细胞增殖、凋亡的影响
- 2009年
- 我们以T系急性淋巴细胞白血病（T—ALL）细胞株CEM为研究对象，研究硼替佐米单药和联合柔红霉素对T—ALL细胞株CEM增殖和凋亡的影响，以期为难治性急性白血病的治疗开辟新途径。
- 郑波慧廖小梅龚玉萍朱焕玲邢宏运孟文彤张永刚苟继龙黄巧蓉
- 关键词：白血病细胞株柔红霉素硼替佐米CEM难治性急性白血病
- 柔红霉素联合雷帕霉素对急性白血病原代细胞增殖作用的影响被引量：1
- 2011年
- 雷帕霉素（Rapamycin，RPM）是一类从吸水性链霉菌中分离的大环内酯类抗生素，是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的特异性抑制剂，因其强效的免疫抑制和抗细胞增殖活性已广泛用于器官移植后急性排异反应的防治。
- 何光翠龚玉萍林娟杨曦周睿卿郭勇
- 关键词：雷帕霉素靶蛋白细胞增殖作用急性白血柔红霉素特异性抑制剂急性排异反应
- 人胚胎干细胞HuES17向造血干细胞的分化
- 2012年
- 背景:人类胚胎干细胞是来源于着床前囊胚的内细胞团,能在长期培养中无限增殖并保持未分化状态,且具有分化成人体组织各种细胞类型能力的细胞。目的:进一步验证人胚胎干细胞HuES17细胞株向造血干细胞分化的能力。方法:人胚胎干细胞HuES17采用与人包皮成纤维细胞二维共培养的方式培养,采用人胚胎干细胞与小鼠骨髓基质细胞(OP9)二维共培养的方法诱导胚胎干细胞向造血干细胞分化。结果与结论:人胚胎干细胞与小鼠骨髓基质细胞(OP9)二维共培养诱导造血分化的第四五天即开始出现OP9细胞逐渐老化,很快死亡;可以观察到人胚胎干细胞分化,然而,随着OP9细胞死亡,分化的人胚胎干细胞亦死亡,不能诱导人胚胎干细胞向造血干细胞分化。提示人胚胎干细胞HuES17细胞株可能不能向造血干细胞分化,或向造血干细胞分化的能力较低。
- 邢宏运卞铁荣刘霆龚玉萍
- 关键词：人胚胎干细胞造血干细胞诱导分化包皮成纤维细胞骨髓基质细胞干细胞
- 六种中药提取物对白血病细胞株的体外抑制作用研究被引量：7
- 2012年
- 目的研究中药有效成分丹参酮ⅡA、粉防己碱、和厚朴酚、姜黄素、冬凌草甲素和丹皮酚对白血病细胞株SUP-B15、K562、CEM、HL-60、NB4的抗增殖作用。方法采用改良MTT法测定6种中药有效成分作用于上述5种白血病细胞株96h后细胞增殖活性的变化,利用线性回归方法计算药物对细胞作用的半数抑制浓度(IC50)值。结果丹参酮ⅡA对SUP-B15、K562、CEM、HL-60、NB4均有一定的增殖抑制作用,但是对HL-60细胞株的抑制作用明显低于其它白血病细胞株。粉防己碱、和厚朴酚、姜黄素、冬凌草甲素对5种细胞株均有增殖抑制作用,且作用相似,抑制作用差异无统计学意义。丹皮酚对5种肿瘤细胞株的增殖有一定的影响,但作用最弱。结论粉防己碱、和厚朴酚、姜黄素、冬凌草甲素对5种白血病细胞株SUP-B15、K562、CEM、HL-60、NB4均有增殖抑制作用,且差异并无统计学意义,证明它们抗白血病作用具有广谱性。丹参酮ⅡA对SUP-B15、K562、CEM、NB4的增殖抑制作用明显优于HL-60细胞株,说明它的抗白血病作用在不同细胞株中有差异性。丹皮酚对5种白血病细胞株的作用最弱。
- 单卿卿龚玉萍郭勇林娟周睿卿杨曦
- 关键词：粉防己碱和厚朴酚冬凌草甲素丹皮酚白血病细胞株
- 冬凌草甲素抗T细胞急性淋巴细胞白血病效应的实验研究被引量：5
- 2014年
- 目的探讨冬凌草甲素对T细胞急性淋巴细胞白血病的抗白血病效应及其机制。方法以T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株CEM为研究对象,应用改良MTT法测定不同浓度及不同时间冬凌草甲素对CEM细胞增殖和生存率的影响,计算72h的半数抑制浓度(IC50);显微镜下观察5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素处理24h后CEM细胞的形态学变化;流式细胞术检测0.5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素作用24h后CEM细胞的凋亡百分率;应用Western blot法检测7.5μmol/L冬凌草甲素作用后细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白水平,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 1冬凌草甲素呈浓度及时间依赖性抑制CEM细胞增殖,作用72h的IC50值为(7.37±1.99)μmol/L;2 5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素作用24h后CEM细胞边界不清晰,部分细胞崩解,且浓度越高,细胞形态改变越明显;3 0、5、7.5、10μmol/L冬凌草甲素作用24h后,细胞凋亡百分率分别为(4.8±2.11)%、(19.03±2.54)%、(40.27±3.31)%;(57.23±6.69)%;4冬凌草甲素明显抑制CEM细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白的活化;下调CEM细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论冬凌草甲素可能通过抑制mTOR/P70(4EBP1)、RAF/ERK、STAT5信号蛋白的活化,以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗白血病作用。
- 郭勇单卿卿龚玉萍林娟杨曦
- 关键词：抗白血病效应冬凌草甲素AKT/MTORSTAT5
