国家重点基础研究发展计划(2012CB518402)
- 作品数：8 被引量：106H指数：7
- 相关作者：谭洪玲汤响林肖成荣王宇光马增春更多>>
- 相关机构：军事医学科学院安徽医科大学天津中医药大学更多>>
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- 基于人孕烷X受体调控CYP3A4转录表达的麦冬皂苷D和麦冬皂苷D'的比较研究被引量：7
- 2017年
- 目的:比较麦冬皂苷D(OP-D)和麦冬皂苷D'(OP-D')量、时、毒、效之间的差异性,明确孕烷X受体(PXR)是否参与OP-D和OP-D'对CYP3A4的转录调控,为中药毒性物质基础及机制研究提供参考。方法:不同浓度的OP-D和OP-D'处理HepG2细胞24h、48h,MTT法检测细胞存活率;瞬时共转染报告基因实验将hPXR表达质粒、CYP3A4报告基因质粒共同转染至HepG2细胞中,比较OP-D(5、10、20、40μmol/L)和OP-D'(0.1、0.25、0.5、1.0μmol/L)对PXR介导的CYP3A4转录调控作用;RT-PCR法比较OP-D和OP-D'对CYP3A4 mRNA的诱导效应差异。结果:OP-D 120μmol/L和OP-D'2μmol/L及以上浓度对细胞存活率产生抑制作用(P<0.01,P<0.001);当共转染体系hPXR表达质粒、CYP3A4报告基因质粒、p LR-TK内参质粒比例为10∶5∶1时,40μmol/L的OP-D和0.5μmol/L的OP-D'诱导CYP3A4报告基因荧光素酶活性至2.17、2.45倍(P<0.01),用空白载体质粒pcDNA3.1代替hPXR表达质粒进行检测时,OP-D和OP-D'对CYP3A4的激活效应消失,阳性对照药利福平对CYP3A4的激活倍数也由原来的4.20倍降至1.27倍(P<0.01);40μmol/L的OP-D和0.5μmol/L的OP-D'对CYP3A4 mRNA诱导效应是对照组的5.12倍和5.48倍(P<0.01)。结论:OP-D和OP-D'的量、时、毒、效差异性较大,PXR参与了OP-D和OP-D'对CYP3A4的转录调控。
- 黄小燕王宇光李晗王远马增春汤响林肖成荣谭洪玲王怡高月
- 关键词：麦冬皂苷D孕烷X受体中药安全性评价
- 人参皂苷Re对H9c2心肌细胞CYP450酶的影响被引量：16
- 2016年
- 目的观察人参皂苷Re对H9c2心肌细胞色素P450酶的影响,旨在发现人参皂苷Re对心肌细胞作用的分子机制。方法实验分对照组、人参皂苷Re各剂量组(1、5、10、50、100μmol·L^(-1))处理组,人参皂苷Re作用6、24、36、48及60 h后提取RNA或蛋白进行测定。利用实时定量PCR法检测H9c2心肌细胞CYP2C11、CYP2J3、CYP4A1、CYP4A3、CYP4F4及ANP mRNA的表达;采用Western blot法检测心肌细胞CYP4A1和CYP2J3蛋白的表达。结果人参皂苷Re明显上调心肌细胞CYP2C11、CYP2J3 mRNA的表达至正常对照的1.6、1.8倍,明显下调CYP4A1、CYP4A3及CYP4F4 mRNA的表达至正常对照的0.4、0.15、0.3倍。人参皂苷Re明显上调ANP基因表达水平至正常对照的3.2倍。随着药物浓度的增加,人参皂苷Re对CYP4A1蛋白表达产生明显的下调作用,而对CYP2J3蛋白产生明显的上调作用。结论人参皂苷Re可影响心肌细胞的CYP450酶和ANP基因的表达。
- 马增春肖勇赵佳伟王宇光谭洪玲梁乾德汤响林肖成荣杨凌高月
- 关键词：人参皂苷RE心肌细胞利钠肽细胞色素P450酶
- 附子对H9c2心肌细胞系线粒体的毒性作用机制被引量：15
- 2015年
- 目的研究附子对H9c2心肌细胞的线粒体毒性作用与机制。方法附子水提取物6.25,12.5,25,50和100 g·L-1作用于H9c2细胞24 h,荧光染色和CCK-8法检测细胞存活率;附子水提取物6.25,12.5和25 g·L-1作用于H9c2细胞24 h,流式细胞仪检测线粒体膜电位和活性氧（ROS）生成的变化;使用相应的荧光探针,结合激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内Ca2＋、线粒体内Ca2＋以及线粒体内超氧化物水平的变化;萤火虫荧光素法检测细胞内ATP浓度变化;实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖活化受体共激活因子-1α（Pgc-1α）,Bcl-2和Bax m RNA的表达;Western蛋白印迹法检测Pgc-1α蛋白的表达。结果附子水提取物12.5~100 g·L-1作用于H9c2细胞,可显著抑制细胞活性（P〈0.05）,IC50值为47.4669 g·L-1,95%的可信限32.5997~69.1145 g·L-1。附子水提取物25 g·L-1处理后,ROS的荧光强度由正常对照组的204±67升高到454±78（P〈0.05）,线粒体超氧化物的荧光强度由5.4±1.8升高到26.8±8.5（P〈0.01）,线粒体膜电位由1.7±0.5下降到0.8±0.4（P〈0.05）,线粒体内Ca2＋的荧光强度由38.0±4.3下降到9.2±1.6（P〈0.01）,细胞内Ca2＋的荧光强度由7.8±0.8升高到22.1±0.5（P〈0.05）,细胞内ATP浓度由（10.6±0.4）μmol·g-1下降到（5.3±1.1）μmol·g-1蛋白（P〈0.05）。实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹检测结果显示,与正常对照组相比,附子水提取物25 g·L-1组Pgc-1α和Bcl-2的m RNA表达分别由正常对照组的1.00±0.10和1.00±0.10下降到0.09±0.06（P〈0.01）和0.43±0.06（P〈0.01）,Bax m RNA表达由1.00±0.03升高到1.17±0.06（P〈0.05）;Pgc-1α蛋白表达由正常对照组的0.906±0.034下降到0.541±0.003（P〈0.01）。结论附子对心肌细胞具有一定的线粒体毒性,其作用是多种途径共同作用的结果。附子的心肌线粒体毒性可能是附子造成心肌毒性的原因。
- 赵佳伟何家乐马增春梁乾德王宇光谭洪玲肖成荣汤响林高月
- 关键词：附子线粒体毒性肌细胞
- 基于UPLC-TOF-MS研究冰片对丹参酮ⅡA在大鼠体内药代动力学的影响被引量：13
- 2014年
- 目的：运用超高效液相色谱/四级杆飞行时间质谱（ ultra performance liquid chromatography time-of-flight mass spectrometer）技术,研究口服不同剂量的冰片对丹参酮ⅡA大鼠体内药代动力学的影响。方法大鼠分别口服丹参酮IIA及丹参酮IIA加冰片混悬液,用UPLC-TOF-MS方法检测丹参酮IIA的血药浓度,用DAS软件拟合,计算相关药动学参数。结果检测丹参酮IIA在血浆中0.6-0.01 mg·L-1线性良好（r=0.999,n=7）。不同剂量的冰片与丹参酮ⅡA联合使用可明显增大丹参酮ⅡA的血药浓度（ Cmax ）,同时药时曲线下面积（AUC）明显增加,特别是15 mg·kg-1冰片对丹参酮ⅡA药代动力学产生明显影响。结论冰片与丹参酮ⅡA的配伍合用可以明显提高丹参酮ⅡA的吸收,增加丹参酮ⅡA的口服生物利用度,表明复方丹参中丹参和冰片配伍的科学性,显示二者相须相使的配伍关系。
- 张璠璠王宇光梁乾德马增春汤响林谭洪玲肖成荣赵永红高月
- 关键词：丹参冰片药动学配伍作用液质联用
- 丹参酮ⅡA(TanⅡA)对内皮细胞的氧化损伤及凋亡的影响被引量：5
- 2017年
- 目的:观察丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人脐静脉内皮细胞氧化损伤所致凋亡的保护作用机制研究。方法:不同浓度的丹参酮ⅡA预处理细胞24 h再给与4×10-4mol/L H_2O_2处理3 h。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测凋亡,ROS和线粒体膜电位值;高内涵筛选技术检测AIF;Cell Death Detection ELISA试剂盒检测DNA fragment。结果:丹参酮ⅡA(5、10、20×10-6mol/L)可以浓度依赖性的抑制H_2O_2诱导的内皮细胞损伤,TanI IA抑制H_2O_2引起的细胞凋亡降低被升高的ROS值,升高H_2O_2抑制的线粒体膜电位。同时可以抑制H_2O_2诱导的AIF的核转移并且H_2O_2引起的DNA fragment具有减轻作用。结论:丹参酮ⅡA可以减轻H_2O_2诱导的内皮细胞氧化损伤及凋亡,并且主要是通过抑制AIF核内转移实现的。
- 朱海燕王宇光马增春汤响林谭洪玲肖成荣陈志武高月
- 关键词：凋亡AIF
- 复方丹参滴丸对大鼠肝细胞色素P450酶的影响被引量：18
- 2013年
- 目的观察复方丹参滴丸及其单味药对大鼠肝细胞色素P450酶(CYP)主要亚型的影响。方法 SD大鼠分别ig给予复方丹参滴丸0.3258 g.kg-1,丹参0.27 g.kg-1,三七0.0528 g.kg-1和冰片0.003 g.kg-1,每天1次,连续28 d,取大鼠肝微粒体,与CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1特异性底物探针共孵育,用高效液相色谱-质谱联用仪(HPLC-MS/MS)测定底物的代谢产物,分析CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1酶活性,同时用PCR方法检测cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA表达的变化。结果与正常对照组相比,苯巴比妥(阳性对照)对CYP2D2和CYP3A1活性有明显抑制作用,对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12和CYP2C13有明显诱导作用(P<0.05,P<0.01);复方丹参滴丸对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用,对CYP2D2有诱导作用(P<0.05);丹参对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用(P<0.05);三七对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C13和CYP2D2活性有明显抑制作用(P<0.05);冰片明显抑制CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13和CYP2D2活性(P<0.01),且抑制强度高于复方丹参滴丸。与正常对照组相比,苯巴比妥对cyp1a2和cyp2b1/2 mRNA水平有明显诱导作用(P<0.05);复方丹参滴丸、丹参和三七对cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA水平无明显影响;冰片对cyp1a2,cyp2b1/2和cyp2c11 mRNA水平有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹参滴丸中各单味药对CYP酶的影响强于全方对CYP酶的影响,其中以冰片对药物代谢酶的影响最为显著。
- 胡东华王宇光陈志武马增春梁乾德肖成荣谭洪玲汤响林李桦沈国林张伯礼高月
- 关键词：复方丹参滴丸丹参冰片细胞色素P450酶系统
- 麦冬皂苷D通过降低自噬抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大被引量：22
- 2016年
- 目的麦冬皂苷D是否抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所引起的心肌肥大及其可能机制。方法体外培养大鼠心肌细胞系H9c2,MTS法检测麦冬皂苷D的细胞毒性;其次将1μmol·L^(-1)的AngⅡ作用于H9c2细胞24h后引起心肌肥大,用不同浓度的麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)共处理,BCA法检测总蛋白含量;实时荧光定量PCR技术检测标志性肥大基因BNP和β-MHC的mRNA表达;Western blot法检测自噬蛋白LC3B的表达,同时运用高内涵筛选技术检测心肌细胞自噬蛋白LC3B的表达以及线粒体膜电位的改变。结果细胞活力的检测结果显示,与对照组相比,AngⅡ不同浓度作用24 h后,对细胞活力无明显影响,而麦冬皂苷D的高浓度(50~100μmol·L^(-1))可明显抑制细胞的活性;AngⅡ作用于心肌细胞24h后,可引起心肌肥大,导致特异性肥大基因mRNA表达上调,并且明显增加细胞总蛋白含量;同时使心肌细胞自噬增强;线粒体膜电位降低,而麦冬皂苷D共处理能明显逆转上述指标。结论麦冬皂苷D对AngⅡ所诱导的心肌肥大有抑制作用。
- 王远王宇光马增春汤响林梁乾德谭洪玲肖成荣赵永红高月
- 关键词：麦冬皂苷DH9C2细胞心肌肥大自噬线粒体膜电位
