国家自然科学基金(30770900)
- 作品数：5 被引量：23H指数：3
- 相关作者：李小鹰辛伟蔡吉梅牛堃鲁晓春更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生天文地球更多>>
- 肌浆网钙ATP酶基因转导治疗心力衰竭——从基础到临床被引量：1
- 2011年
- 心力衰竭（heart failure，HF）是多种心血管疾病晚期共同的临床综合征，严重危害着人类的健康。近年来，尽管药物治疗以及植入性机械装置治疗方面取得了长足的进步，但其发生率和致死致残率依旧居高不下。
- 辛伟李小鹰
- 关键词：心力衰竭心血管疾病基因转导肌浆网钙ATP酶
- 重组5型腺病毒高效扩增的研究
- 2010年
- 目的探讨高效扩增腺病毒载体的方法。方法采用人胚肾293细胞株扩增合有SERCA2a基因的重组5型腺病素(Ad-SERCA2a),采用半组织定量法测定病毒滴度,PCR和Western blot法检测SERCA2a基因表达。结果扩增纯化后腺病毒滴度为1.0×10^(12) PFU/ml,扩增病毒SERCA2a基因表达。结论采用人胚肾293细胞扩增重组腺病毒,经纯化后可获得高滴度病毒。
- 曹洁玮李小鹰
- 关键词：腺病毒科聚合酶链反应基因扩增
- HEK293T细胞扩增重组腺病毒研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨HEK293T细胞扩增重组腺病毒的可行性。方法重组腺病毒保存液稀释后感染HEK293T细胞,观察细胞病变效应,半数组织培养感染量测定扩增病毒的滴度,通过体外感染心肌细胞,成纤维细胞验证其感染活性。结果HEK293T细胞可以扩增带有绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒,病毒滴度为5×106PFU/mL,扩增后的腺病毒可以感染体外培养的心肌细胞和成纤维细胞。结论HEK293T细胞可有效扩增带有绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒。
- 曹洁玮李小鹰
- 关键词：重组腺病毒绿色荧光蛋白质
- 过表达肌浆网钙ATP酶治疗实验性慢性缺血性心力衰竭被引量：3
- 2011年
- 目的 研究肌浆网钙ATP酶2a（SERCA2a）基因过表达对慢性缺血性心力衰竭（心衰）心功能及心肌内质网应激（ERS）相关凋亡的影响.方法采用ameroid环束扎小型猪前降支制备慢性缺血性心衰模型.开胸心肌内注射重组腺相关病毒以过表达SERCA2a或对照报告基因绿色荧光蛋白.60 d后检测血流动力学、SERCA2a的表达和活性、心肌凋亡及ERS标志蛋白-分子伴侣GRp78、凋亡蛋白caspase-12的表达.结果基因转导后60 d,与心衰对照及报告基因组相比,转基因组SERCA2a蛋白表达和活性显著增高,心功能参数改善,心肌凋亡指数降低,伴GRP78和活化caspase12表达下降.结论过表达SERCA2a可改善慢性缺血性心衰的心脏功能,其机制可能涉及减轻ERS相关的心肌细胞凋亡.
- 辛伟鲁晓春李小鹰牛堃蔡吉梅
- 关键词：基因疗法
- 心肌肌浆网Ca^2＋-ATP酶过表达对慢性缺血性心力衰竭小型猪心功能的改善作用被引量：15
- 2011年
- 目的研究心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)基因过表达对慢性缺血性心力衰竭(HF)小型猪心功能的改善作用。方法使用Ameroid缩窄环束扎小型猪前降支起始段,4周后行超声心动和血流动力学检查确认心功能下降,放免法测定血清炎性因子(TNF-α、IL-6)和神经体液因子(BNP、AngII、ET-1)的变化。将动物模型随机分为HF组、HF+EGFP组、HF+SERCA2a组,并设假手术组作为对照,每组各4只。HF+EGFP组和HF+SERCA2a组再次开胸,心肌组织内注射包含报告基因的rAAV1-EGFP和包含靶基因的rAAV1-SERCA2a各1ml(1×1012v.g/ml)。基因转导60d后,处死各组动物,行免疫组化和Western blotting检测SERCA2a在心肌中的表达情况;超声心动和血流动力学检测转导SERCA2a对心功能的影响,并用放免法检测上述炎性因子和神经体液因子的变化。结果成功建立小型猪慢性心肌缺血HF模型12只,Ameroid环植入4周后,超声心动和血流动力学数据提示模型组心脏舒缩功能显著下降(P<0.05),并伴有外周血上述炎性因子和神经体液因子的激活。基因转导后60d,SERCA2a蛋白在HF+SERCA2a组的表达量显著高于HF及HF+EGFP组(P<0.05),但与对照组比较无显著差异;其心功能参数LVEF、Ev/Av、±dp/dtmax较HF及HF+EGFP组显著增高(P<0.05),并伴随血清炎性因子和神经体液因子浓度的明显下降(P<0.05),提示心功能好转,心衰严重程度下降。结论过表达SERCA2a可改善慢性缺血性心力衰竭的心脏功能,可能成为慢性心肌缺血、心力衰竭治疗的潜在手段。
- 辛伟李小鹰鲁晓春牛堃蔡吉梅
- 关键词：心力衰竭基因疗法心肌缺血
