新疆维吾尔自治区科技支疆项目(200991130)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区科技支疆项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 黄粉虫抗菌肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测被引量：2
- 2011年
- 昆虫抗菌肽具有广谱抗菌活性,克隆黄粉虫Tenebrio molitor抗菌肽基因,进行原核表达和活性检测,为昆虫抗菌肽推广应用奠定一定基础。根据GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物,以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因TmAMP3,将其亚克隆至pET-30a表达载体中,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,同时检测生物活性。结果表明我们成功构建了重组质粒pET-30a-TmAMP3,大部分目的蛋白呈可溶性分泌表达。经Ni2+亲和层析,获得较纯融合蛋白HIS-TmAMP3,诱导表达的融合蛋白使BL21转化菌生长受到一定程度的抑制。融合蛋白在100℃煮沸10h、与pH2～12的缓冲液混匀后,依然保持稳定的抗菌活性,具有较强的稳定性。同时检测了融合蛋白对5种菌株的最小抑菌浓度(minimun inhibitory concentration,MIC)。本研究为具有稳定活性抗菌肽进行大规模生产发酵提供了理论基础。
- 唐馨毛新芳热西力·克来木刘忠渊
- 关键词：黄粉虫抗菌肽蛋白纯化抗菌活性
