国家自然科学基金(81001123)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院更多>>
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- 基于Gateway^(TM)系统Dec1慢病毒表达载体的构建被引量：2
- 2013年
- 目的利用GatewayTM技术构建分化型胚胎软骨发育基因1(Dec1)的慢病毒表达载体并建立稳定表达该目的基因的人胶质瘤U87细胞株。方法从人脑胶质瘤组织中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA。设计含有特异性酶切位点的引物,通过逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR),获得用于重组的Dec1目的基因全长。将目的片段克隆至入门载体(pENTRTM3C)中产生入门克隆。利用GatewayTM技术,将入门克隆中的目的片段转接于目的载体(pLenti6.3/V5-DEST)中产生表达克隆pLenti6.3-Dec1。在293T细胞中包装慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1并转染U87细胞,通过灭瘟素筛选、Western blot鉴定,获得稳定表达Dec1的U87细胞株。结果 Dec1基因全长的获取与慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1的构建经PCR和测序得到证实。用pLenti6.3-Dec1转染U87细胞后,通过灭瘟素筛选,获得稳定表达Dec1的U87细胞株。结论成功构建了pLenti6.3-Dec1慢病毒表达载体并建立稳定表达Dec1的人胶质瘤U87细胞株,为深入研究Dec1分子机制奠定了基础。
- 李晓明林伟章翔王江张璟张健韩腾龙药立波
- 关键词：慢病毒表达载体神经胶质瘤
- 神经电生理监测对面肌痉挛微血管减压术疗效的影响被引量：13
- 2014年
- 目的评价电生理监测结果对面肌痉挛微血管减压术疗效的影响。方法采用电生理监测术中面神经侧方扩散反应(LSR)的方法,对87例面肌痉挛的患者进行术中监测,根据监测结果对术中面神经减压效果进行评判,并将结果与81例未作监测的患者进行近期和远期疗效的对比。结果术后近期治愈率:监测组:87.4%,未监测组:74.1%,两组间比较有显著差异(P<0.05)。术后随访12个月治愈率:监测组:96.6%,未监测组:93.8%,两组间比较无显著差异(P>0.05)。结论根据监测结果对面神经减压术进行术中减压效果预判能够提高近期治愈率,降低术后延迟治愈的发生率。神经电生理监测对面肌痉挛微血管减压术的近期疗效具有明确影响。
- 林伟罗小楠李娜蒋晓帆鲁维山梁景文李晓明程光费舟
- 关键词：面肌痉挛微血管减压术
- MSP58基因表达水平与人脑胶质瘤恶性度的关系
- 2012年
- 目的:观察MSP58基因表达水平与人脑胶质瘤恶性度的关系。方法:在41例按WHO分类和分级标准为Ⅰ-Ⅳ级的人脑胶质瘤标本、4株人脑胶质瘤细胞系(U251,U87,BT325和SHG44)以及6例正常脑组织标本中,运用半定量RT-PCR及蛋白质印迹法检测MSP58 mRNA和蛋白的表达水平。结果:MSP58 mR-NA和蛋白在人脑胶质瘤组织中存在表达,其表达水平随人脑胶质瘤恶性度的增加而升高。在正常脑组织和恶性脑胶质瘤之间,以及脑胶质瘤Ⅰ-Ⅳ级病理级别间比较均有显著差异。MSP58 mRNA和蛋白在U251、U87、BT325和SHG44细胞中均有高表达。结论:MSP58 mRNA和蛋白在人脑胶质瘤中高表达,其表达水平与脑胶质瘤的恶性度有关,提示MSP58在脑胶质瘤的形成和恶性演进中具有重要作用。
- 林伟罗小楠蒋晓帆王江李晓明章翔费舟
- 关键词：胶质瘤
- MSP58基因RNA干涉后对人脑胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的影响
- 2012年
- 目的观察RNA干涉法(RNA interference,RNAi)抑制人脑胶质瘤U251细胞的MSP58基因表达后,对其在裸鼠体内成瘤性及增殖、侵袭性的影响。方法将特异性的MSP58干涉表达载体pSilencer3.1-MSP58转染人脑胶质瘤细胞系U251(U251-S),同时构建相应的阴性对照组U251-NC,以及空载体组U251-H1 neo。运用逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Westernblot)检测各组细胞的MSP58mRNA和蛋白表达水平。用各组U251细胞建立人脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型。结果成功建立了具有稳定下调MSP58基因表达的U251-S细胞。U251-S细胞MSP58的表达无论在mRNA水平还是在蛋白质水平均较U251组、U251-H1 neo组及U251-NC组细胞显著降低(P<0.01)。与接种U251、U251-H1neo和U251-NC细胞的裸鼠相比,接种U251-S细胞的裸鼠肿瘤形成时间延迟,肿瘤生长缓慢,肿瘤体积及瘤重均明显减小(P<0.01)。结论 MSP58基因RNAi后抑制了移植瘤细胞MSP58mRNA及蛋白的表达,进而明显抑制移植瘤的增殖和侵袭能力。
- 林伟罗小楠张璟张健王江李晓明章翔费舟
- 关键词：RNA干涉胶质瘤裸鼠
