国家自然科学基金(U1204310) 作品数:5 被引量:44 H指数:2 相关作者: 姜金庆 李新朋 李艺 钱爱东 单晓峰 更多>> 相关机构: 河南科技学院 吉林农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 河南省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 农业科学 化学工程 医药卫生 更多>>
动物性食品中氟喹诺酮类药物多残留检测研究进展 被引量:19 2013年 氟喹诺酮类药物是一类人工合成的抗菌药物,在兽医领域应用广泛,但其残留对人畜危害严重。论文对动物性食品中氟喹诺酮类药物多残留检测方法进展做一综述,主要包括微生物法,高效液相色谱法,液相色谱-质谱法,薄层色谱法,毛细管电泳法,ELISA方法,免疫亲和色谱法,免疫传感器法,胶体金免疫层析法,电化学发光法,分析了不同多残留检测方法的优缺点,为生产选择检测方法提供建议,也为进一步研究氟喹诺酮类药物多残留检测提供参考。 李新朋 姜金庆 钱爱东 丁菡 李艺关键词:氟喹诺酮类药物 动物性食品 多残留检测 氯睾酮人工抗原的合成与鉴定 被引量:2 2013年 采用琥珀酸酐法将氯睾酮(CLO)衍生化,再用碳二亚胺法(EDC)将氯睾酮的半抗原与BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测抗原,紫外扫描和红外光谱鉴定表明人工抗原合成成功,CLO与BSA偶联比为16.5∶1.利用CLO-BSA免疫Balb/C小鼠制备多克隆抗血清,间接ELISA结果表明:3只小鼠抗体效价分别为1.6×104、3.2×104和1.6×104;间接竞争ELISA检测2号鼠抗血清的灵敏度为64 ng/mL.氯睾酮人工抗原的合成为开发ELISA试剂盒检测食源性动物产品中CLO残留奠定基础. 王方明 邹小娟 程亮 姜金庆关键词:人工抗原 雌二醇人工抗原的合成及间接竞争ELISA标准曲线的建立 被引量:2 2014年 琥珀酸酐法将雌二醇(E2)衍生化,再用碳二亚胺法(EDC)将半抗原与BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测抗原,紫外扫描和红外光谱鉴定表明人工抗原合成成功,E2与BSA偶联比为12.3∶1。将E2-BSA免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术筛选抗E2杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体。结果表明,筛选的3株杂交瘤细胞E2D5、E3F7和E4A6抗体效价均在8×104以上。以E3F7细胞株建立间接竞争ELISA(icELISA)标准曲线,其线性范围为0.06~66.2μg/L,检测限和IC50值分别为0.03和0.76μg/L,除与去氢甲睾酮22.9%的交叉反应率外,与其他化合物无交叉反应。本研究为开发ELISA试剂盒,检测食源性动物产品中E2残留奠定基础。 姜金庆 李新朋 李艺关键词:雌二醇 人工抗原 单克隆抗体 间接竞争ELISA 氟喹诺酮类药物多残留酶联免疫检测方法的建立 被引量:22 2014年 【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物性食品中FQs多残留检测奠定基础。【方法】环丙沙星(CPFX)羧基上引入氨基丁酸后为半抗原(CPFX-A),质谱鉴定;分别用碳二亚胺法(DDC)和混合酸干法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原(CPFX-A-BSA)和包被原(CPFX-A-OVA),紫外和红外光谱鉴定是否偶联成功;CPFX-A-BSA免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和ic ELISA方法测定多抗血清效价和敏感性,选取抗血清效价高和敏感性好的鼠用于细胞融合;NS0细胞和脾细胞按1﹕5比例在PEG-1500作用下融合,筛选抗FQs杂交瘤细胞株,并进行效价、亚型、敏感性和交叉反应率鉴定;体内诱生腹水法制备m Ab,液体石蜡作为诱导剂,每只鼠注射108个杂交瘤细胞;选敏感性和广谱特异性好的腹水m Ab,建立ic ELISA标准曲线,对ic ELISA检测方法优化,在鸡肉中添加10种FQs进行测定,将测定结果与HPLC法比较,用SPSS 17.0软件进行显著差异性分析。【结果】半抗原改造和人工抗原合成成功;3只鼠血清效价均达到1﹕1.28×104以上,2号鼠血清效价最高(1﹕2.56×104),且IC50值最低(12.92 ng·m L-1),选择2号鼠作为细胞融合用鼠;4次亚克隆筛选并鉴定后获得3株敏感广谱特异的杂交瘤细胞,分别命名为2H5、3D11、4F4,细胞上清效价分别为1﹕1 600、1﹕1 600和1﹕800,腹水效价分别为1﹕1.6×106、1﹕8.2×105和1﹕8.2×105;ic ELISA方法的包被原浓度为1μg·m L-1,5%猪阴性血清4℃包被过夜,单抗1﹕40 000稀释,山羊抗鼠酶标二抗(Ga MIg G-HRP)1﹕8 000稀释;反应温度均为37℃,标准品与单抗同时加入反应15 min,洗板后加二抗反应25 min;显色10 min,2H5细胞株腹水敏感性和广谱特异性 李新朋 姜金庆 钱爱东 王自良 范国英 单晓峰 康元环 李艺关键词:环丙沙星 氟喹诺酮类药物 杂交瘤细胞株 间接竞争ELISA Screening Testosterone Residue in the Edible Tissues of Bovine with a Polyclonal Antibody Based Heterologous Immunoassay 2013年 Testosterone(17β-hydroxyandrost-4-en-3-one)is a19-carbon steroid hormone with potent androgenic properties.It maintains testicular function and develop secondary male sex characteristics.It also has strong anabolic effects,which initiates increased protein synthesis in muscle and bone[1].In the1950s,the recognition of the growth promoting properties of such a CHANG Xin Yao JIANG Jin Qing