四川省重点科技攻关项目(05NG020-016)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
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- 猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立
- 2010年
- 根据已经发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(App)dsbE-like基因的序列,设计了一对可扩增374bp目的片段的特异性引物。经PCR扩增,App1-4和6-10型标准菌株均能扩出约374bp的片段,而对大肠埃希菌(K88)、巴氏杆菌(5:A)和链球菌(Ⅱ)的扩增结果均为阴性。用建立的方法来检测分离菌株MC、ME和MH,结果表明,该方法能用于临床分离株的检测。灵敏性试验表明本方法对App菌液最低检出浓度为71cfu/mL。建立的PCR检测App的方法可用于临床上对App的检测。
- 马晓平曹三杰文心田肖国生杨利陈华美张雪峰
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌PCR
- 四种血清型胸膜肺炎放线杆菌多重PCR检测方法的建立被引量：2
- 2008年
- 根据胸膜肺炎放线杆菌（APP）外膜蛋白OmlA序列设计种特异性引物，根据血清型1、2、6、7荚膜多糖（CPS）序列分别设计型特异性引物，通过优化PCR扩增条件，分别扩增出OralA（952bp）、CPS1（630bp）、CPS2（504bp）、CPS6（720bp）、CPS7（389bp）特异性片段，建立了既可对APP进行定性检测又可对APP1、2、6、7进行定型检测的多重PCR。特异性试验表明，此多重PCR能从APP1～4、6～10标准株中扩增出与引物相应的特异性片段；对猪副嗜血杆菌、猪肺炎霉形体、多杀性巴氏杆菌、肠炎沙门菌、猪链球菌、大肠杆菌和猪丹毒杆菌进行扩增，均未扩增出片段。敏感性试验表明，此多重PCR能够检测到DNA的量为10pg。45头疑似病猪病料的细菌分离鉴定结果与此多重PCR的鉴定结果一致。上述结果表明，建立的多重PCR适合于APP1、2、6、7的鉴别诊断及流行病学调查。
- 陈华美曹三杰文心田肖国生
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因多重PCR
- 猪传染性胃肠炎病毒SC-H株M基因的克隆与序列分析
- 2008年
- 参照Genbank已发表的TGEV的核酸序列设计一对扩增M基因的引物,经RT-PCR扩增了SC-H株的M基因cDNA片段,插入pMD18-T构建重组质粒pMD-M,对pMD-M进行了酶切鉴定及核苷酸测序,将M基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列与参考毒株进行了比较分析。结果表明SC-H株M基因扩增片段长度为852bp,包含789bp的M基因编码区,编码262个氨基酸;SC-H株与TS、96-1933、FS772/70、HN2002、TFI、Purdue及TO14株的M基因核苷酸序列同源性为97.8%、94.2%、97.2%、97.8%、99.7%、96.8%及98.2%,氨基酸同源性为96.6%、92.0%、95.4%、96.6%、99.2%、95.8%及97.7%,表明不同毒株的M基因高度保守,系统进化分析显示SC-H株与Prudue株有较近的亲缘关系。
- 黄小波曹三杰文心田杨恒秦学远杨利
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒M基因
- 氧化应激环境下猪胸膜肺炎放线杆菌ohr基因转录活性的变化
- 2009年
- 使用异丙苯化过氧氢(Cumene hydroperoxide,CHP)模拟体内氧化应激环境,给予猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillμspleuropneμmoniae,APP)血清1型菌不同浓度CHP或相同浓度CHP不同时间的刺激,使细胞处于氧化应激状态,采用半定量RT-PCR方法,以看家基因recF为内参对照,观察ohr基因的转录活性,并进一步分析刺激强度、刺激时间与ohr基因转录活性的关系。结果表明,模拟的氧化应激环境明显增加了ohr基因的转录活性,该基因在转录水平上受到氧化应激调控。ohr mRNA的转录在一定范围内(CHP浓度不大于300μmol/L时)与氧化物刺激的强度具有时间依赖和浓度依赖关系。模拟的氧化应激促进了ohr基因的转录活性,由此可推知ohr基因可能是APP潜在的毒力基因,在APP致病过程中具有潜在的促进作用。
- 段丽丽文心田曹三杰黄小波
- 关键词：半定量RT-PCR猪胸膜肺炎放线杆菌氧化应激
- 美洲型PRRSV N基因毕赤酵母表达载体的构建及表达研究
- 本研究通过RT-PCR方法扩增获得了美洲型PRRSV N基因,分别构建了克隆载体pMD19-T-N和毕赤酵母表达栽体pPIC9K-N,并进行了PCR和双酶切鉴定。PCR和双酶切鉴定结果均得到预期大小的片段,结果表明成功建...
- 钱洪喜文心田曹三杰黄小波
- 关键词：PRRSVN基因毕赤酵母
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立
- 本试验根据已经发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌dsbE-like基因的序列,设计了一对可扩增374bp目的片段的特异性引物.经PCR扩增,APP1-4和6-10型标准菌株均能扩出大约374bp的片段,而大肠杆菌（K88）、...
- 马晓平曹三杰文心田肖国生杨利陈华美张雪峰
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌PCR
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒SC-H株的分离与鉴定被引量：12
- 2008年
- 黄小波曹三杰文心田杨恒秦学远
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒H株VIRUS肠道传染病寒冷季节
- 间接ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的研究被引量：1
- 2007年
- 进行了胸膜肺炎放线杆菌血清1型荚膜多糖的提取制备实验,并以该抗原作为诊断抗原建立了检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的间接ELISA方法。此抗原与猪巴氏杆菌病、猪布氏杆菌病、仔猪副伤寒等阳性血清无交叉反应;与胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型、4型、6型、7型、8型、9型、10型标准阳性血清也无交叉反应。可用于猪群感染血清1型胸膜肺炎放线杆菌的诊断和监测。
- 王斌文心田曹三杰黄小波杨利汤君胡成名
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌ELISA荚膜多糖特异性
- 插入CpG序列的猪细小病毒DNA疫苗的构建与体外表达
- 将猪细小病毒VP2基因主要抗原表位克隆到PCDNA3.1(+)真核表达载体中构建PCDNA3.1(+)-VP2。设计含数个CPG基元的引物,通过重叠延伸PCR法扩增出CPG免疫刺激序列,将其插入真核表达载体PCDNA3....
- 田焱曹三杰黄小波文心田
- 关键词：猪细小病毒CPG-ODNDNA疫苗真核表达
- 文献传递
