中央高校基本科研业务费专项资金(XDJK2013A017)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：王进军豆威申光茂杨文佳许抗抗更多>>
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- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金重庆市自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- 橘小实蝇半胱氨酸蛋白酶基因克隆及表达模式被引量：1
- 2017年
- 为了深入了解半胱氨酸蛋白酶基因的作用和寻求害虫防治新的分子靶标,利用RT-PCR和RACE技术,从橘小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)体内克隆获得半胱氨酸蛋白酶基因Bdcyp的c DNA全长序列(Gen Bank登录号:KU904503),采用生物信息学软件分析了Bdcyp编码蛋白的特性,利用实时定量PCR技术检测其在不同发育阶段和不同组织的表达量。橘小实蝇Bdcyp的c DNA全长为1 955 bp,开放阅读框为1 653 bp,编码551个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量和等电点分别为62 900和6.11。Bdcyp具有半胱氨酸蛋白酶的典型特征,即信号肽、3个催化活性区域(Cys-His-Asn)以及2个保守的ERFNIN和GNFD特征基序。系统发育分析表明Bdcyp编码的蛋白质与橄榄实蝇半胱氨酸蛋白酶亲缘关系最近。Bdcyp在三龄幼虫、蛹和成虫期均有表达,其在蛹中期的表达量最高;表达部位主要在幼虫脂肪体,其次为气管和表皮,而在中肠的表达量最低。这些结果为进一步研究Bdcyp基因功能提供了依据。
- 杨文佳许抗抗王进军李灿
- 关键词：橘小实蝇半胱氨酸蛋白酶克隆
- 橘小实蝇谷氨酸脱羧酶的生化及分子特性被引量：1
- 2014年
- 【目的】在测定橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)γ-氨基丁酸(GABA)含量和谷氨酸脱羧酶(GAD)活性的基础上,克隆获得橘小实蝇GAD基因(BdGAD1)全长序列,进一步解析GABA、GAD以及BdGAD1在橘小实蝇各发育阶段、成虫不同体段以及经阿维菌素刺激后的表达模式,分析橘小实蝇GAD对阿维菌素作用的应激反应,为系统解析GABA介导的阿维菌素抗药性机制提供基础数据。【方法】采用高效液相色谱法测定橘小实蝇体内GABA含量,分析阿维菌素刺激对GABA含量的剂量和时间效应;以谷氨酸为底物,采用微量滴度酶标板法测定橘小实蝇经阿维菌素刺激后GAD活力的变化;通过同源序列比对的方法,从橘小实蝇转录组数据中筛选出1条GAD基因片段,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得该基因的全长cDNA序列;应用生物信息学分析软件对该基因的开放阅读框、编码的氨基酸序列、分子量等信息进行预测,并基于最大似然法构建该基因与其他昆虫相关基因序列的系统发育树,明确其系统进化关系。此外,分别提取橘小实蝇各发育阶段和成虫不同体段的RNA,以表达稳定的α-Tubulin为内参基因,应用qPCR技术,解析BdGAD1在橘小实蝇各发育阶段(卵、幼虫、蛹和成虫)和成虫不同体段(头、胸、腹)以及经阿维菌素刺激后的表达模式。【结果】经阿维菌素刺激后,橘小实蝇体内GABA含量升高,且与阿维菌素剂量及处理时间呈正相关,暗示橘小实蝇可能通过调节GABA含量以抵御阿维菌素的毒害。同时,橘小实蝇体内GAD的比活力也随药剂剂量增加而升高。通过RACE扩增,获得了橘小实蝇BdGAD1的cDNA全序列,长度1 755 bp,开放阅读框1 197 bp,编码398个氨基酸,GenBank登录号为KC763804。基于最大似然法构建的系统发育树显示,该基因编码的蛋白质与冈比亚按蚊的GAD亲缘关系最近,序列一致性高达97%。qPCR分析结果表明,BdGAD1在幼虫期表达量最高,不同
- 魏冬王涛豆威王进军
- 关键词：橘小实蝇谷氨酸脱羧酶Γ-氨基丁酸阿维菌素
- 橘小实蝇羧酸酯酶基因BdCAREB1的克隆及其表达模式解析被引量：5
- 2014年
- 【目的】在克隆获得橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)1条羧酸酯酶基因全长序列的基础上,解析该基因在橘小实蝇不同发育阶段和组织以及经高效氯氰菊酯饲喂后的表达模式。同时结合之前完成的有关橘小实蝇羧酸酯酶生化特性以及增效剂处理研究结果,综合分析橘小实蝇羧酸酯酶对高效氯氰菊酯作用的应激反应,为明确羧酸酯酶对菊酯类杀虫剂的解毒代谢机制奠定基础。【方法】通过同源序列比对的方法,从橘小实蝇转录组数据中筛选出1条羧酸酯酶基因序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增得到该基因的全长cDNA序列;应用生物信息学分析软件对该基因的开放阅读框、编码的氨基酸序列、分子量等信息进行预测,并基于最大似然法构建该基因与其他昆虫相关基因序列的系统发育树,阐明其分子生物学特征。此外,分别提取橘小实蝇不同发育阶段以及3龄幼虫的中肠、脂肪体、马氏管和气管等组织的RNA,在内参基因稳定性评估筛选的基础上,运用qPCR的方法解析该基因在不同发育阶段和组织间以及药剂处理后的表达模式。【结果】从橘小实蝇转录组数据库中筛选出1条长度为1 028 bp的羧酸酯酶基因片段,通过对5′端和3′端进行RACE扩增分别得到长度为1 073和625 bp的目的片段,经序列拼接和验证后,确定该基因全长为1 872 bp,完整开放阅读框1 710 bp,编码569个氨基酸,推测其蛋白质分子量为63.3 kD,理论等电点6.38。该基因经序列比对命名为BdCAREB1,GenBank登录号为KF539980。基于最大似然法构建的系统发育树显示,该基因编码的蛋白质与双翅目昆虫的羧酸酯酶具有高度的同源性。分析其在不同发育阶段的表达模式发现,BdCAREB1在3龄幼虫期的表达量最高,其次为成虫期,而在卵期的表达量最低。在橘小实蝇3龄幼虫不同组织间的定量分析结果表明,BdCAREB1在脂肪体中表达水平最高,
- 申光茂豆威王进军
- 关键词：橘小实蝇羧酸酯酶基因表达脂肪体
