国家自然科学基金(30671181)
- 作品数：13 被引量：15H指数：2
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- 酵母胁迫应答相关基因TOS3表达质粒的构建及其表达蛋白的纯化
- 哺乳动物蛋白激酶 Akt/PKB 是细胞周期调节的核心蛋白激酶,很早就发现在 Ras-PI3K- Akt(PKB)抗细胞调亡途径中,并与肿瘤的发生发展密切相关。有研究表明,哺乳动物蛋白激酶 Akt/PKB 酵母同源物 S...
- 钟彦刘科
- 关键词：蛋白激酶酵母胁迫应答
- 酵母转录抑制因子RDR1功能的初步研究
- 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)转录抑制因子 Rdr1,是锌簇蛋 Ga14p 家族中的一员,与酵母细胞的多向耐药机制有关。多向耐药性是存在于从细菌到人类的普遍现象。目前的研究表明, Rdr1通...
- 苗敏曹红平刘科
- 关键词：耐药性胁迫应答转录因子
- 文献传递
- 酿酒酵母CMK2在氧化胁迫应答中的作用被引量：2
- 2010年
- CMK2是酵母中和哺乳动物钙调蛋白激酶CaM kinasesⅡ同源的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,具有重要调控作用.本文利用PCR方法扩增含内源启动子的CMK2基因序列,克隆到pRS316上并在C末端连接6个组氨酸标签,构建真核表达载体,转化不同酵母进行表达,并通过免疫印迹鉴定.发现氧化胁迫后细胞中CMK2发生磷酸化.生长实验结果显示cmk2缺失的细胞对氧化胁迫非常敏感,而△cmk2中转入pRS316-cmk2-HIS6可以部分恢复△cmk2细胞对双氧水的敏感性.表明CMK2参与细胞氧化胁迫应答途径,并发挥正调控作用.
- 王一慧朱珈仪刘科
- 关键词：酿酒酵母
- 出芽酵母蛋白激酶TOS3的过量表达及其在热胁迫应答中的作用
- 2009年
- 出芽酵母SNF1蛋白激酶参与葡萄糖阻遏和细胞胁迫应答.TOS3可通过磷酸化激活SNF1,参与SNF1调控的信号途径.本研究利用PCR方法扩增tos3基因的蛋白质编码序列,克隆到多拷贝表达载体pYES2/NTA上构建真核表达载体,转化酵母细胞并诱导TOS3过量表达.带HIS6标签的重组TOS3蛋白通过免疫印迹得以鉴定.进一步研究了过量表达TOS3对细胞热胁迫耐受性的影响,发现在热胁迫处理条件下,TOS3过量表达可恢复△_(sn)f1突变体细胞的生长缺陷,表明TOS3可能通过不依赖SNF1的其他信号途径参与细胞对热胁迫应答的调控.
- 钟彦黄鹏郄蓓蓓刘立永刘科Bei-BeiLi-Yong
- 关键词：出芽蛋白激酶SACCHAROMYCESSTRESSSTRESSPROTEINPROTEINGROWTHGROWTH
- 出芽酵母Saccharomyces cerevisiae转录抑制因子Rdr1负调控细胞胁迫应答被引量：5
- 2009年
- Rdr1是出芽酵母Saccharomyces cerevisiae的一个转录抑制因子,参与控制细胞的多重药物耐受性,并可能与细胞胁迫应答相关.利用PCR方法扩增RDR1基因片段,将其克隆至高拷贝表达载体pYES2/NTA上并诱导Rdr1蛋白在酵母细胞中过表达.为了揭示转录抑制因子Rdr1在胁迫应答中的作用,比较了RDR1过表达细胞、RDR1缺失突变体细胞和野生型细胞在过氧化氢处理、热胁迫和高盐处理条件下的生长状态,结果显示,RDR1过表达导致细胞对上述3种胁迫作用更敏感,而RDR1缺失则使细胞对这些胁迫作用的耐受性不受影响或有一定增强.为了揭示上述不同细胞在胁迫条件下生长状态的差异与细胞内抗氧化酶活性之间的关系,测定并比较了RDR1过表达细胞、RDR1缺失突变体细胞和野生型细胞中超氧化物岐化酶(superoxide dismutase SOD)、过氧化氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase G6PDH)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase GR)的活性.结果表明,RDR1缺失突变体细胞具高活性的SOD、过氧化氢酶、G6PDH和GR,而Rdr1过表达细胞中SOD、过氧化氢酶、G6PDH和GR的活性较低.RDR1对SOD和过氧化氢酶活性的影响要大于G6PDH和GR.细胞抗氧化酶活性的变化初步揭示,RDR1过表达细胞对胁迫的敏感和RDR1缺失突变体细胞对胁迫耐受性增加的原因.为转录抑制因子Rdr1在胁迫应答中的负调控作用及其机理提供了初步的遗传学和生物化学证据.
- 苗敏曹红平钟彦刘军王一慧刘昕张年辉刘科
- 关键词：胁迫应答抗氧化酶
- 重组GST-Crosstide蛋白的表达纯化及其在AGC型蛋白激酶活性检测中的应用
- 2014年
- AGC型蛋白激酶在信号通路中占据着极为重要的地位,通过对各种信号通路的调控来影响细胞的生长、增殖和凋亡进程.为方便检测AGC型蛋白激酶的活性,设计并构建了新型AGC型蛋白激酶特异底物GST-Crosstide.通过同位素标记体外磷酸化的方法研究了酵母表达的Pkh1、Ypk1和大肠杆菌表达的Akt1三种AGC型蛋白激酶磷酸化GSTCrosstide的能力.结果显示,酵母表达的有活性的Pkh1和Ypk1均可有效磷酸化GST-Crosstide,并且由于Pkh1对Ypk1的进一步激活,二者共同作用可显著增加GST-Crosstide磷酸化.而仅采用大肠杆菌表达的没有被活化的Akt1则无法磷酸化GST-Crosstide,但Akt1可以被Pkh1或Ypk1激活,从而获得磷酸化GST-Crosstide的能力.研究表明,GST-Crosstide可以作为AGC蛋白激酶活性检测的有效工具,并将有效促进真核生物蛋白激酶调控的细胞信号转导通路的研究.
- 吕逢春杨一杜林方刘科
- 关键词：AKT1
- SCH9基因对酿酒酵母中H_2S代谢的影响被引量：1
- 2018年
- H2S作为胞内气体信号分子,在心血管和神经系统方面的治疗显著效果引起了人们的关注.首先,为了探究酿酒酵母中SCH9基因缺失对其H2S生成的影响,我们以酿酒酵母SCH9基因缺失型菌株RCD398、RCD399和TS120-2d为研究对象,用醋酸铅试纸检测反应体系中H2S含量.非热量限制条件,WT(BY4741)培养48h产生了4(mm)/A600nm H2S,而Sch9Δ(RCD398)只产生0.4(mm)/A600nm.热量限制条件下,WT(BY4742)培养48h产生了10(mm)/A600nm的H2S,而Sch9Δ(RCD399)未检测到H2S.其次,为了探究SCH9基因缺失菌株对外源H2S分解的影响.用GYY4137和NaHS作为H2S的供体.WT(BY4742)培养72h之后未检测到H2S,而Sch9Δ(RCD399)仍可持续检测到大量H2S.结果表明SCH9缺失既可以下调酿酒酵母中H2S的生成,也可以下调酿酒酵母对外源H2S的分解.
- 高雪洁刘冰花刘冰花王为岩曹莎莎刘科
- 关键词：硫化氢
- 酿酒酵母钙调蛋白依赖性激酶-2的过量表达及其在氧化胁迫应答中的作用初探被引量：1
- 2009年
- 利用PCR方法扩增钙调蛋白依赖性激酶(CaM-dependent kinase 2)基因的蛋白质编码序列,经限制性内切酶KpnI和BamH I酶切后连接入空载体pYES2/NTA构建真核表达载体,构建的pYES2/NTA-cmk2转化酿酒酵母菌株BY4741进行真核表达.经诱导和收集细胞后,对酵母细胞用玻璃珠震荡破壁,收集上清液进行镍离子亲和层析,并纯化CMK2,纯化的蛋白通过免疫杂交检测.并且初步研究了CMK2在酵母细胞氧化胁迫应答中的作用.
- 薛薇孙毅钟彦朱德燕刘科
- 关键词：酿酒酵母
- 酵母(Saccharomyces cerevisiae)蛋白激酶SCH9激活环磷酸化调控胁迫应答被引量：6
- 2010年
- 通过比较野生型、△sch9和△sch9(SCH9-3HA)三种酵母菌种在葡萄糖、半乳糖、蔗糖和麦芽糖作碳源培养基上的生长表型研究SCH9是否参与酵母不同碳源代谢利用调控.结果显示,△sch9细胞菌落大小较野生型细胞小且有明显的生长缺陷,但这种生长缺陷在重新获得sch-3HA基因后得到恢复.通过比较野生型、△sch9和△sch9(SCH9-3HA)三种酵母菌种在渗透压胁迫和热胁迫条件下的生长表型发现sch9可能参与了酵母胁迫应答.利用抗SCH9570位磷酸化苏氨酸特异性抗体(anti-T570-P),通过变性免疫沉淀和免疫印迹方法,研究了生理条件下的△sch9(SCH9-3HA)细胞裂解液中SCH9激活环的磷酸化状态.结果显示,在生理条件下SCH9激活环T570位点发生了明显磷酸化.进一步研究了渗透压胁迫条件下SCH9激活环T570位点的磷酸化水平.结果表明,渗透压胁迫条件下SCH9激活环T570位点磷酸化水平较生理条件下显著增强.结果显示SCH9可能通过增强激活环磷酸化水平来参与调控酵母不同碳源代谢和胁迫应答.
- 刘军闾磊朱德燕苗敏曹红平钟彦刘科
- 关键词：酵母胁迫蛋白激酶信号传导
- 酵母蛋白激酶Sch9激活环磷酸化状态参与热胁迫应答调控被引量：2
- 2012年
- 在酵母(Saccharomyces cerevisiae)中,蛋白激酶Sch9已经被证明与细胞大小、胁迫应答、自噬以及寿命的调控有关.通过不同基因型酵母在固体培养基上的热敏感性研究,发现Sch9的激酶功能与热胁迫相关,进一步通过Sch9特异磷酸化位点抗体的免疫印迹,检测了细胞内Sch9关键的激活环T570位点(PDK1位点)在热胁迫条下的磷酸化状态,发现半乳糖诱导表达的Sch9在热胁迫条件下T570位点去磷酸化,首次证明了Sch9通过调控激酶活性参与细胞热胁迫应答.研究结果揭示了Sch9在胁迫应答中的部分功能,并为生理条件下Sch9调控功能的研究提供了生物化学证据.
- 闾磊郄蓓蓓黄鹏刘科杜林方
- 关键词：热胁迫磷酸化酵母
