浙江省科技攻关计划(021102529)
- 作品数：12 被引量：305H指数：11
- 相关作者：姜平李玉峰尹秀凤汤景元王艳更多>>
- 相关机构：南京农业大学农业部动物检疫所高邮市畜牧兽医站更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划教育部“优秀青年教师资助计划”国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 中国东南部地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析被引量：17
- 2009年
- 采用肠杆菌基因间重复一致序列PCR方法,在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对分离自中国东南部发生Glasser's病的不同猪场的111株副猪嗜血杆菌进行了指纹鉴定。结果显示:111株分离株显示出23种指纹图谱,前3种最流行的指纹图谱为ERIC-PCRⅩⅩ(20/111),ⅩⅩⅢI(9/111)和Ⅳ(8/111)。且在111株分离株中,来自不同地区的分离株分别表现出不同种类的指纹图谱。该试验表明,ERIC-PCR方法可适用于对某一地区的副猪嗜血杆菌进行分子流行病学的研究和基因型的鉴定;试验结果还揭示了副猪嗜血杆菌在中国东南部地区已广泛存在并具有多样的基因型。
- 李鹏李军星李玉峰李文良王先炜姜平
- 关键词：副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱
- PMWS病猪猪圆环病毒2型全基因组序列分析被引量：12
- 2004年
- 根据GenBank中发表的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因序列,设计一对特异性引物,用PCR方法直接从5省病料中分别扩增出5个PCV2毒株的全基因组,分别命名为FujianPCV、GuangxiPCV、HainanPCV、HunanPCV和ShandongPCV。将扩增片段克隆于pMD18-T载体,进行序列测定,结果表明,除FujianPCV株核苷酸长度为1768bp,其余四株均为1767bp。应用DNAstar序列分析软件分析表明,本实验的5个PCV2分离株与世界上其它地区的PCV2分离株密切相关,核苷酸序列同源性达93%～98.8%,与PCV1毒株的序列同源性只有68.4%～70%。其中ORF1和ORF2所编码的氨基酸序列与国内外PCV2毒株比较,同源性也很高,分别为98.1%～99.4%和88%～99.1%。
- 冯志新范伟兴李晓成姜平李玉峰
- 关键词：PMWS猪圆环病毒2型
- 不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究被引量：23
- 2006年
- 用3对分别针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7、ORF5和ORF5的PCR引物N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2进行RT-PCR,检测PRRSV,从其敏感性、特异性和临床样品检出率等方面进行比较,在此基础上进一步建立一步法RT-PCR检测方法。结果显示:3对引物对PRRSV均有很高的特异性;应用N1/N2引物病毒最低检测量为7.9 TC ID50,而AdGP5.1/AdGP5.2引物和RFLP5.1/RFLP5.2引物PCR最低检测量为79 TC ID50;运用N1/N2、AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物分别进行RT-PCR扩增检测临床样品,PRRSV检出率分别为28/48、27/48和25/48,且用AdGP5.1/AdGP5.2和RFLP5.1/RFLP5.2引物检测的阳性样品,用N1/N2引物检测也都呈阳性。运用N1/N2引物,通过一步法RT-PCR成功地从PRRSV S1株中扩增出374 bp的目的基因片段。结果表明,用N1/N2引物扩增PRRSV目的基因,其敏感性和临床样品检出率更高,更适合临床样品PRRSV的检测。
- 邓雨修李玉峰姜平蒋文明汤景元
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR一步法RT-PCR
- 我国部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查被引量：25
- 2007年
- 采用细菌分离鉴定、结合PCR方法,对江苏、上海、安徽、广西、浙江、江西、山东、河南、湖北等省市2003年11月～2005年4月送检的159个患病猪场仔猪肺脏进行了副猪嗜血杆菌检测,结果阳性猪场为76个,阳性率48%,临床症状主要为呼吸困难和体温升高;病理变化主要有肺炎病变和淋巴结肿大或出血。通过数据统计分析,发现该病已在我国不同地区广泛流行,且多发于秋、冬季节。该研究为副猪嗜血杆菌的流行病学研究奠定了基础,也为该病的临床预防提供了理论依据。
- 尹秀凤王艳姜平
- 关键词：副猪嗜血杆菌流行病学细菌分离PCR
- 副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与应用被引量：25
- 2007年
- 通过反应条件的优化、特异性和敏感性的测定,建立了一种快速、简便、准确的PCR方法,用于检测副猪嗜血杆菌(HPs)。PCR扩增片段大小为822bp,最小检测量为1080个HPs。与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌无特异性反应。用该法检测人工感染猪的肺脏、心脏和肾脏抽提的DNA,结果为阳性;检测肝脏、脾脏、脑组织样品抽提的DNA,结果为阴性。用该法检测人工感染发病仔猪及自然感染仔猪肺组织,并结合细菌分离培养,证明以肺脏组织为病料,通过细菌分离培养,再用PCR法鉴定分离菌体,可有效地用于HPs的诊断。检测110份来自发病猪场的患病仔猪肺脏病料,其中有53份为阳性,表明HPs所致发的Glasser′s病已在我国部分地区发生和流行。
- 尹秀凤王艳姜平李玉峰蒋文明
- 关键词：副猪嗜血杆菌PCR
- 副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察被引量：21
- 2007年
- 用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏器含有大量的中性粒细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎。结果表明,此分离株为一高致病潜力的菌株。
- 尹秀凤张书霞王艳姜平汤景元
- 关键词：副猪嗜血杆菌病理学仔猪
- 副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：58
- 2006年
- 采用福尔马林灭活的副猪嗜血杆菌全菌体作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。经试验确定副猪嗜血杆菌全菌体的包被浓度为2·24×107CFU/孔、检测血清为1∶200稀释,同时确立了间接ELISA的最佳反应条件。该方法有很高的特异性和重复性,14个发病猪场100份血清检测结果Hps抗体阳性检出率为94%,明显高于细菌分离鉴定检测结果。
- 王艳夏万田柏坤桃尹秀凤姜平
- 关键词：副猪嗜血杆菌ELISA抗体
- 猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究被引量：24
- 2008年
- 猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下:①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著(P<0.05)。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。
- 董信田李玉峰姜平王先炜冯志新俞俐莉
- 关键词：猪圆环病毒2型油佐剂灭活苗
- PMWS患病猪群中PCV2与CSFV、PPV、PRRSV混合感染的调查被引量：29
- 2007年
- 应用套式PCR方法对采自辽宁、河北、河南、湖北、湖南、山东、浙江、福建和广西9个省份的733份临床发病猪肺脏和淋巴结样品进行了PCV2的检测,然后对鉴定为PCV2阳性的283份病料再分别进行PRRSV、PPV和CSFV的检测,以确定猪群中PCV2与CSFV、PRRSV和PPV双重感染情况,结果表明:CSFV、PRRSV和PPV阳性样品分别为74份、94份和46份,阳性率分别为26.1%、33.2%和16.3%。表明这些地区发病猪群中PCV2与这三种病毒的双重感染普遍存在,其中以PCV2和PRRSV的双重感染较为突出;但在河北和湖北两省,则以PCV2与CSFV的双重感染为主。
- 赵浩军王先炜姜平范伟兴李晓成黄保续
- 关键词：猪细小病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的检测被引量：8
- 2006年
- 2005年3月,江苏某猪场仔猪发生体温升高,呼吸困难,四肢末端、耳尖发绀,站立不稳和淋巴结出血为主要症状的疾病。4头发病仔猪的淋巴结、脾、肺脏组织用RT-PCR方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒为阳性,用猪瘟ELISA试剂盒检测猪瘟病毒野毒为阳性。结合本病的临床症状和病理剖检,病例确诊为猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟野毒的混合感染。
- 董信田李玉峰姜平许家荣
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒
