国家教育部博士点基金(20050558062)
- 作品数：1 被引量：13H指数：1
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- 沉默survivin基因介导口腔表皮癌细胞KB及KBv200凋亡的比较研究被引量：13
- 2006年
- 背景与目的:Survivin是IAPs家族的重要成员之一,研究表明可结合凋亡途径中的Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9抑制其活性,引起肿瘤细胞的抗凋亡作用,尤其使肿瘤细胞耐受化疗药物诱导的凋亡,与化疗耐药密切相关。survivin在人口腔表皮癌细胞KB及其耐药株KBv200均有表达,本实验拟通过RNAi方法沉默survivin基因比较研究它介导KB和KBv200细胞的凋亡作用。方法:RT-PCR法检测细胞中survivinmRNA水平,流式细胞仪检测细胞中survivin蛋白水平,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态,PI染色结合流式细胞仪法检测细胞凋亡率,以及Caspase-3活性测定试剂盒检测Caspase-3的活性,MTT法测定肿瘤细胞生长情况。结果:KBv200细胞中survivinmRNA和蛋白表达量较高。转染mu6/survivin质粒后48h,KB和KBv200细胞中survivinmRNA表达抑制率分别为(61.98±8.12)%和(59.29±6.32)%,蛋白表达抑制率分别为(44.25±5.26)%和(38.76±4.31)%。转染mu6/survivin质粒后24h、48h、72h,流式细胞仪结果显示KB和KBv200细胞凋亡都明显增加,均在48h凋亡达到高峰,以KB凋亡率较高,并且Caspase-3活性也都明显增加,均在48h达到最高。同时KB细胞生长抑制率分别为(33.04±2.17)%、(56.25±3.32)%和(58.26±5.15)%,KBv200细胞生长抑制率则分别为(35.23±3.43)%、(44.90±4.12)%和(44.19±4.37)%。结论:siRNA方法能够有效沉默survivin基因,不仅能诱导KB细胞凋亡,而且能介导耐药株KBv200细胞凋亡。
- 闫琳陈伟强梁永钜戴春岭王晓红石智陈黎明符立梧
- 关键词：RNA干扰
