重庆市科技攻关计划(2009AB5215)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李小芳沈燕白凤霞刘杞娄世锋更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-3-PE38KDEL的构建及其在CIK细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:构建人白细胞介素-3(interleukin-3,IL-3)和铜绿假单胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin,PE)衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,研究其在细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞中的表达情况。方法:通过PCR获得实验需要的IL-3-PE38KDEL基因片段,构建IL-3-PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-3-PE38KDEL。重组质粒经限制性内切酶及DNA序列测定证实构建成功后,用Liprofectamine2000脂质体转染CIK细胞,然后用RT-PCR及Western blot检测IL-3-PE38KDEL融合蛋白在CIK细胞的表达,用MTS检测细胞上清中融合蛋白的细胞毒作用。结果:酶切分析及DNA序列测定证实,IL-3-PE38KDEL融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(-);RT-PCR及Western blot法检测证实重组基因可在CIK细胞中表达,且表达的融合蛋白对HL60细胞有杀伤活性。结论:IL-3-PE38KDEL融合基因可在CIK细胞中表达,为进一步研究融合毒素IL-3-PE38KDEL联合CIK细胞过继免疫治疗对肿瘤细胞的体内外杀伤作用奠定了基础。
- 李小芳沈燕娄世锋刘杞张萍白凤霞
- 关键词：白细胞介素-3真核表达
