国家自然科学基金(30330300)
- 作品数：14 被引量：155H指数：8
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- 晚期糖基化终产物诱导单核细胞产生细胞因子的细胞内信号传导机制被引量：10
- 2004年
- 目的 探讨晚期糖基化终产物 (AGE)诱导单核细胞产生白细胞介素 1β(IL 1β)和肿瘤坏死因子 浕(TNF 浕)的细胞内信号传导机制。方法 采用密度梯度离心法分离健康成人外周血单核细胞 ,经AGE修饰的人血清白蛋白 (AGE HSA)刺激后 ,用ELISA法检测培养上清中IL 1β、TNF 浕水平 ,用化学发光法测定活性氧的生成 ;免疫细胞化学染色及凝胶迁移电泳 (EMSA)法观察核因子 κB(NF κB/p6 5 )的激活。分别用抗AGE受体 (RAGE)抗体、NADPH氧化酶特异性抑制剂apocynin和p38通路抑制剂SB 2 0 35 80预处理单核细胞 ,观察对AGE HSA诱导细胞因子和活性氧产生的影响。结果 AGE HSA与单核细胞在体外共同培养后 ,细胞内NF κB激活 ,培养上清中IL 1β、TNF 浕水平明显增高 ,活性氧生成增加 ;用抗RAGE抗血清或apocynin预处理细胞可阻断AGE HSA诱导的活性氧生成 (P <0 0 1) ,抑制NF κB的活化并使培养上清IL 1β、TNF 浕显著降低 (P <0 0 1)。用SB 2 0 35 80预处理细胞也可抑制AGE HSA诱导的NF κB激活及IL 1β、TNF 浕的产生 ,但对活性氧的产生无明显影响 (P >0 0 5 )。结论 AGE通过RAGE介导的途径刺激单核细胞生成IL 1β、TNF 浕和活性氧 ,NADPH氧化酶途径可能是RAGE细胞内信号途径的上游 。
- 刘阳刘尚喜侯凡凡
- 关键词：糖基化终产物活性氧组分NADPH氧化酶
- 晚期氧化蛋白产物导致血管内皮细胞氧化应激损伤被引量：27
- 2004年
- 目的 研究慢性肾功能衰竭病人循环晚期氧化蛋白产物 (AOPP)对人血管内皮细胞活性的影响及机制。方法 用次氯酸(HOCl)氧化牛血清白蛋白 (BSA)体外制备AOPP BSA ,将人血管内皮细胞株ECV30 4与不同浓度、不同氧化修饰程度的AOPP BSA共同培养 ,用MTT法测定细胞活性 ,用VICTORWallac 14 2 0多标记分析系统动态检测细胞内活性氧的产生量。结果 AOPP BSA使血管内皮细胞活性降低 ,其对内皮细胞活性的影响与BSA氧化程度及AOPP BSA的浓度有关 ;AOPP BSA刺激内皮细胞生成活性氧 ,细胞内活性氧的生成量随BSA氧化程度和AOPP BSA浓度增加而升高。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen预处理细胞 ,可使AOPP BSA诱导产生的活性氧减少 5 3% ,并可保护细胞免受AOPP BSA造成的细胞损伤。结论 晚期氧化蛋白产物能通过氧化应激引起血管内皮细胞损伤。
- 袁方刘尚喜侯凡凡陈瑗田建伟刘志强
- 关键词：晚期氧化蛋白产物内皮血管活性氧组分氧化性应激
- 维生素E对血液透析病人氧化应激的干预效果被引量：8
- 2004年
- 目的 研究抗氧化剂维生素E对血液透析病人氧化应激状态的干预效果。方法 处于稳定状态的血液透析病人 5 6例 (不服用任何抗氧化药)采用自身对照的方法 ,观察 1个月后 ,随机均分为两个实验组 ,A组口服维生素E 2 0 0mg/d ,B组口服维生素E 4 0 0mg/d,服药 1个月 ;两组分别在观察期和服用维生素E干预期前后检测循环晚期氧化蛋白产物(AOPP)、丙二醛 (MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)水平以及血清维生素E浓度。另选 5 6例健康者作为正常对照组。结果 实验组血清AOPP、MDA水平明显高于同龄正常对照组(n =5 6 ,P <0 0 1) ,GSHPx、维生素E浓度明显低于正常人(P <0 0 1) ;透析病人在未服抗氧化药的 1个月观察期前后AOPP、MDA、GSHPx及维生素E浓度无明显变化 (P均 >0 0 5 ) ;A组治疗后 ,血清维生素E水平较治疗前明显增高 (P <0 0 1) ,但AOPP、MDA和GSHPx水平与治疗前相比无明显差异 ;B组治疗后血清维生素E、GSHPx水平较治疗前增高 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,AOPP较治疗前明显降低 (P <0 0 1) ,但MDA水平无明显变化。结论 口服大剂量维生素E(4 0 0mg/d)可以改善血透病人的氧化应激状态 ;血透病人短期服用大剂量维生素E未见明显副作用。
- 武强刘郑荣侯凡凡刘尚喜刘俊杨小兵田建伟任昊蒋建平
- 关键词：维生素E血液透析氧化性应激
- 晚期糖基化终产物通过氧化应激加速动脉粥样硬化斑块形成被引量：38
- 2004年
- 目的 探讨晚期糖基化终产物 (AGE)对动脉粥样斑块形成的影响及机制。方法 5 0只新西兰白兔随机分为 5组 ,A组 :喂饲高胆固醇饲料加注射AGE修饰的兔血清白蛋白 (AGE RSA ,5mg/kg ,1次 /隔天 ) ;B组 :喂饲高胆固醇饲料加注射未加修饰的兔血清白蛋白 (RSA ,5mg/kg ,1次 /隔天 ) ;C组 :单纯喂饲高胆固醇饲料 ;D组 :喂饲普通饲料 ;E组 :喂饲普通饲料加注射AGE RSA(5mg/kg ,1次 /隔天 )。 10周后取主动脉全段 ,苏丹Ⅳ染色 ,PHOTOSHOP系统测定粥样斑块面积占内膜面积的百分比 ,免疫组化法观察主动脉AGE、氧化修饰低密度脂蛋白 (ox LDL)、丙二醛修饰低密度脂蛋白 (MDA LDL)的沉积及AGE受体 (RAGE)的表达。同时检测循环AGE、血脂、血清硒谷胱甘肽过氧化物酶 (SeGSHPx)活性、丙二醛 (MDA)及氧化修饰低密度脂蛋白 (ox LDL)水平。结果 (1)喂饲高胆固醇饲料各组动物主动脉均见粥样硬化斑块形成 ,但A组动脉粥样斑块面积 /内膜面积百分比 (5 0 %± 8% )明显高于B组 (2 1%± 7% )和C组 (2 9%± 6 % ) (P均 <0 0 5 ) ,A组粥样斑块病变部位MDA LDL、ox LDL、AGE的沉积面积较B、C组明显增大 ,内皮细胞RAGE表达上调 ;而D组和E组主动脉未见粥样斑块病变。 (2 )喂饲高胆固醇饲料各组动物的血清甘油三酯及胆固醇水平明显?
- 张卫茹侯凡凡刘尚喜郭志坚周展眉王国保富宁刘志强王力周玫
- 关键词：糖基化过氧化应激动脉粥样硬化斑块形成动脉硬化
- 磷脂酰丝氨酸外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除过程中的协作效应被引量：4
- 2006年
- 为探讨磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除中的作用,用脂质体整合的方法将不同的磷脂整合到红细胞上或用N-乙酰马来酰胺(N-ethylmaleimide,NEM)预处理红细胞然后整合磷脂,制备含不同凋亡信号的红细胞模型,测定巨噬细胞对整合不同磷脂信号红细胞的结合率和吞噬率。结果表明,单独整合PS或用NEM处理造成PS外翻,可显著性提高巨噬细胞对红细胞的结合率,但对吞噬率没有影响;同时整合PS和氧化磷脂(氧化PS或氧化磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)),或用NEM处理造成PS外翻后再整合氧化PS或氧化PC,不仅可显著提高巨噬细胞对红细胞的结合率,而且可显著性提高吞噬率。这些结果提示PS外翻可能参与了巨噬细胞对凋亡细胞的结合,而磷脂氧化可能启动了巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬,二者协作才可能完成巨噬细胞对凋亡细胞的清除。
- 王燕群刘尚喜侯凡凡李忠海
- 关键词：磷脂酰丝氨酸凋亡细胞
- 抗人晚期糖基化终产物受体胞外段不同表位单克隆抗体的制备被引量：8
- 2004年
- 目的 制备抗人晚期糖基化终产物受体(RAGE)胞外段单克隆抗体。方法 用纯化人重组RAGE胞外段(氨基酸序列23～342)免疫Balb／c小鼠，取其脾细胞与NS—1融合制备杂交瘤，经筛选和两次克隆化，从制备的腹水中纯化单克隆抗体。结果和结论 获得两株杂交瘤细胞B2．2和E10，其分泌单抗的亚型均为IgG2b。经ELISA、Westernblot和流式细胞仪鉴定，证明两株单抗均可结合重组RAGE及表达于细胞表面的RAGE，且两株抗体识别的位点为远隔表位，所建立的双夹心法可用于检测可溶性重组RAGE。这两株抗体将为研究RAGE相关疾病提供有效的工具。
- 朱平唐磊赵善超卢晓候凡凡富宁
- 关键词：单克隆抗体流式细胞仪
- 人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性,并能够抑制AGE诱导的内皮细胞NF-kB的表达。结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与AGE的结合活性,并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用。
- 赵善超姜勇刘靖华李志杰邓鹏张桂林刘志强张训侯凡凡郑少斌
- 关键词：晚期糖基化终产物
- 晚期糖基化终产物增加动脉粥样硬化病变部位的炎症反应被引量：14
- 2005年
- 目的通过整体模型探讨晚期糖基化终产物(AGEs)负荷对动脉粥样硬化斑块炎症反应程度的影响。方法50只新西兰白兔随机分为5组。A组:喂饲高胆固醇饲料,同时注射AGEs修饰的兔血清白蛋白(AGEs—RSA);B组:喂饲高胆固醇饲料,同时注射未加修饰的兔血清白蛋白(RSA);C组:单纯喂饲高胆固醇饲料;D组:喂饲普通饲料;E组:喂饲普通饲料,同时注射AGEs—RSA。10周后分离主动脉全段,油红O染色测定主动脉粥样斑块内脂质含量;免疫组化法计数斑块内浸润的巨噬细胞、T淋巴细胞以及平滑肌细胞的迁移增生。结果喂饲高胆固醇饲料各组动物主动脉均可见粥样硬化斑块形成,斑块病变部位可见不同程度的脂质沉积、巨噬细胞、T淋巴细胞浸润及平滑肌细胞迁移增生。A组粥样斑块中脂质含量[(71.86±8.30)%]显著多于B组[(53.76±3.72)%]和C组[(56.67±9.20)%](P<0.05);粥样硬化斑块病变部位浸润的巨噬细胞[(23.1±8.5)个/0.01 mm2]、T淋巴细胞[(15.1±3.8)个/0.01 mm2]和平滑肌细胞[(19.2±5.7)个/0.01.mm2]较B组[巨噬细胞(14.4±5.9)个/0.01 mm2、T淋巴细胞(9.1±2.6)个/0.01 mm2、平滑肌细胞(12.9±3.8)个/0.01mm2]和C组[巨噬细胞(15.4±4.4)个/0.01mm2、T淋巴细胞(10.5±2.2) 个/0.01 mm2、平滑肌细胞(13.8±3.9)个/0.01
- 张卫茹侯凡凡刘尚喜郭志坚周展眉刘志强
- 关键词：炎症反应病变部位高胆固醇饲料主动脉粥样斑块脂质含量
- 晚期氧化蛋白产物对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究晚期氧化蛋白产物(AOPP)对小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)产生一氧化氮的影响。方法用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备的AOPP-BSA单独或与内毒素(LPS)一起与MPM共同培养或用AOPP-BSA预处理后再用LPS刺激MPM,用Griess试剂法测定培养上清一氧化氮的含量;MTT法测定细胞活力。结果AOPP修饰可使BSA诱导MPM产生一氧化氮的量显著性降低。同时,AOPP-BSA预处理或与LPS一起共同刺激巨噬细胞均可显著性抑制LPS诱导的MPM产生一氧化氮,抑制程度与BSA的氧化修饰程度AOPP-BSA的浓度有关。结论晚期氧化蛋白产物可抑制MPM诱导型一氧化氮的产生。
- 李忠海刘尚喜侯凡凡王燕群
- 关键词：晚期氧化蛋白产物氧化应激巨噬细胞一氧化氮
- 糖化和氧化产物修饰的蛋白质促进兔主动脉粥样斑块形成被引量：23
- 2004年
- 目的 :探讨晚期糖基化终产物 (AGE)和晚期蛋白质氧化产物 (AOPP)对动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 :5 0只 1 2周龄新西兰白兔被随机分为 5组 (每组 1 0只 ) ,除对照组外均以高胆固醇饲料喂养并分别注射或不注射兔血清白蛋白及AGE或AOPP修饰的兔血清白蛋白。 1 0周后处死动物 ,取血清测血脂、AGE和AOPP水平 ;取主动脉全段 ,以苏丹IV染色 ,PHOTOSHOP○R软件分析粥样斑块占主动脉壁的相对面积 ;显微镜下测量粥样斑块的平均厚度。结果 :(1 )AGE和AOPP组主动脉全段的动脉粥样斑块相对面积 (5 0 .1 %± 7.4 %和 6 2 .4 %±8.8% )均明显大于单纯胆固醇喂饲组 (2 9.8%± 6 .3% )和白蛋白组 (2 0 .9%± 6 .4 % ) (P均 <0 .0 5 )。 (2 )AGE和AOPP组胸主动脉段粥样斑块的平均厚度 [(1 4 7.7± 1 3.1 ) μm和 (1 38.1± 1 3.0 ) μm]均明显大于单纯胆固醇喂饲组 [(85 .7± 1 5 .0 ) μm和白蛋白组 [(95 .5± 1 5 .7) μm](P均 <0 .0 5 ) ;(3) 4个喂饲高胆固醇饲料组的血脂水平无明显差异 ,注射AGE或AOPP的动物血清中AGE或AOPP水平明显增高 ,且与斑块相对面积呈正相关 (AGE与斑块相对面积 :r=0 .4 0 8,P =0 .0 0 5 ;AOPP与斑块相对面积 :r =0 .5 95 ,P =0 .0 0 0 )。结论 :AGE和AOPP促进高胆固醇动物动脉粥样斑块?
- 郭志坚侯凡凡刘尚喜张卫茹周展眉刘志强
- 关键词：糖基化终产物动脉粥样硬化血清白蛋白慢性肾功能衰竭
