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国家自然科学基金(31100136): 作品数：13 被引量：72H指数：6; 相关作者：邵国青刘茂军车巧林冯志新张旭更多>>; 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学山西农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金中国博士后科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

猪肺炎支原体主要抗原蛋白的研究进展被引量：17: 2013年; 猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae of Swine,MPS)的病原,给养猪业造成巨大的经济损失。由于对具有良好免疫原性的Mhp特异性蛋白缺少深入研究,使得Mhp在致病机制、血清学检测方法和新型疫苗的研究发展上受到一定限制,从而影响了对MPS的控制。本研究综合Mhp主要粘附因子、膜蛋白及细胞质蛋白等主要抗原蛋白的研究进展,为该病原致病机理研究、建立特异性诊断方法和推动基因工程疫苗发展提供一定的理论基础,对MPS的正确诊断、检测、免疫预防和控制也有重要意义。; 张悦刘茂军邵国青; 关键词：猪肺炎支原体疫苗

猪肺炎支原体对上皮细胞氧化损伤的分析被引量：4: 2014年; 分析猪肺炎支原体致病株168和弱毒株168L对上皮细胞的氧化损伤。用猪肺炎支原体168和168L株体外感染猪肺泡上皮细胞(SJPL),通过对感染细胞进行MTT和NO检测,筛选感染时间和感染剂量,利用间接免疫荧光(IFA)检测细胞上Mhp,通过H2O2和DAPI验证细胞损伤。结果:在5×106 CCU感染36h时,细胞活力相同,Mhp168株感染细胞的NO浓度显著高于Mhp168L株(P<0.05);H2O2检测显示Mhp168对细胞的氧化损伤显著高于Mhp168L株,同时都显著高于对照(P<0.01);IFA观察分析显示Mhp168株在细胞上的黏附量高于Mhp168L。DAPI染色显示Mhp168对细胞造成的损伤程度高于Mhp168L。通过优化感染时间和感染剂量,找到了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞损伤的显著差异点,分析了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞的氧化损伤,为深入研究猪肺炎支原体强弱毒株感染细胞的差异机制奠定了基础。; 李彦伟刘茂军刘蓓蓓武昱孜倪博白方方纪燕张映邵国青; 关键词：猪肺炎支原体上皮细胞

猪肺炎支原体P65蛋白的单克隆抗体的制备（英文）: 2014年; P65蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。本实验应用原核表达的重组P65蛋白免疫小鼠,用Mhp全菌蛋白和P65蛋白筛选,制备了1株特异性单克隆抗体3G12。鉴定结果表明,该株单克隆抗体可与P65蛋白和Mhp全菌蛋白反应,采用间接ELISA法测得3G12细胞培养上清与P65蛋白反应抗体的效价为1∶12 800,与全菌蛋白反应抗体的效价为1∶3 200;3G12腹水与P65蛋白反应的抗体效价为1∶4 000 000以上,与168全菌蛋白反应的抗体效价为1∶20 000以上,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体。本研究成功获得到1株针对P65和Mhp全菌的单克隆抗体,为猪肺炎支原体致病机制和检测方法的进一步研究提供了基础。; 刘茂军张悦白昀王海燕邵国青; 关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体

猪肺炎支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立被引量：8: 2012年; 为了建立一种用间接免疫荧光技术检测猪肺炎支原体黏附宿主细胞的方法。以抗猪肺炎支原体单克隆抗体为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗小鼠IgG为二抗,通过对一抗、二抗工作浓度的优化确定合适的抗体浓度;通过以1×107CCU/ml猪肺炎支原体与PK15细胞作用不同时间,确定其黏附细胞需要的时间;通过不同滴度的猪肺炎支原体与PK15细胞37℃作用4 h,确定其黏附细胞需要的滴度。猪肺炎支原体单克隆抗体P463G11的最适工作浓度为1∶1 000倍稀释,FITC-羊抗小鼠IgG的最适工作浓度为1∶200倍稀释,猪肺炎支原体黏附PK15细胞需要的时间为4 h以上,黏附PK15细胞需要的滴度为1×105CCU/ml以上。表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪肺炎支原体对宿主细胞的黏附作用。; 车巧林熊祺琰冯志新张旭刘茂军邵国青; 关键词：猪肺炎支原体间接免疫荧光

猪肺炎支原体粘附因子在毕赤酵母中的表达及应用: 猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae of swine,MPS)的主要病原。该病又称猪气喘病或猪地方流行性肺炎(Enzooti...; 刘茂军冯志新祝永琴王海燕甘源王占伟白昀王丽刘冬霞邵国青

猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重PCR检测方法的建立与应用被引量：11: 2012年; 根据猪肺炎支原体(Mhp)和猪鼻支原体(Mhr)的16S rRNA基因设计3条引物,建立Mhp和Mhr的双重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性和敏感性试验。应用建立的方法检测了临床样品和疫苗样品。结果显示,该方法具有良好的特异性,最低可检测到0.66 ng的Mhp基因组DNA和0.58 ng Mhr基因组DNA。临床样品和疫苗样品检测结果与普通PCR检测结果一致。该双重PCR方法可用于Mhp与Mhr的鉴别、诊断以及疫苗纯粹性检查,快速而准确。; 刘茂军王占伟韦艳娜马庆红杨莉莉周勇岐邵国青; 关键词：猪肺炎支原体 PCR

猪鼻支原体与猪地方性肺炎被引量：10: 2012年; 猪鼻支原体(Mhr)是小猪呼吸道的常在菌,在猪群中的检出率很高,可引起猪发生肺炎、多浆膜炎、关节炎和中耳炎,一定程度上影响了猪的生长和生产性能,并可继发其它病原感染,加重呼吸道症状。Mhr也是细胞培养的常见污染物和多种癌症的诱发因素。Mhr引起猪肺炎的机理除了在病理变化方面有介绍外,其深层次的机制还未见报道,其在呼吸道移行及诱导全身性疾病的机制也不清楚。本文将从猪地方性肺炎(SEP)及主要致病原、可能的致病机理和研究方法方面进行阐述Mhr肺炎,为该病的研究和防治提供新思路与新手段,同时也为Mhr和其它病原共感染的研究提供借鉴。; 王占伟熊琪琰邵国青; 关键词：猪肺泡巨噬细胞体外感染致病机理

猪肺炎支原体P159蛋白的截短表达及黏附活性研究被引量：2: 2012年; 为了解猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)P159蛋白的黏附活性,本实验利用PCR从Mhp NJ株扩增P159基因片段(3'端),克隆于pET-28a(+)进行表达,并用表达的截短蛋白进行黏附试验。结果表明,PCR扩增的目的基因片段约为450 bp;SDS-PAGE检测重组蛋白分子量为46 ku;western blot检测表明该重组蛋白能够与Mhp阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的免疫反应原性;表达的截短蛋白与Mhp的黏附试验结果表明,该重组蛋白可以粘附于猪肺上皮细胞(SJPL)表面,并部分抑制Mhp对SJPL的粘附作用。本研究结果为Mhp致病机制的进一步研究奠定了基础。; 刘茂军杜海霞杜改梅车巧林张悦熊祺琰白方方王海燕冯志新邵国青; 关键词：猪肺炎支原体黏附活性

人和动物支原体蛋白组学研究进展被引量：2: 2013年; 支原体可感染人、动物、植物及细胞等,给人类、动植物健康和科研工作带来不利影响,危害巨大。目前,研究人员开始从蛋白质水平阐述病原菌的致病机制,研发新型疫苗和药物,从而控制支原体疾病的发生与危害。本文将近年来的人和动物支原体蛋白质组学的研究方法和研究成果进行综述,以为今后更进一步的研究提供参考。; 邱明君刘茂军张旭武昱孜张映邵国青; 关键词：支原体蛋白质组学

猪肺炎支原体感染的组学分析及其致病机理研究: 猪支原体肺炎（Mycoplasmapneumoniaofswine，MPS）是由猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）引起的一种长期广泛流行性猪慢性呼吸道疫病。该病可引起猪生产性能下降，且...; 刘茂军; 关键词：基因表达谱蛋白组学致病机理; 文献传递

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