山东省自然科学基金(Y2002C01)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 人VEGF-C基因荧光真核表达载体的构建和表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建含有绿色荧光蛋白基因的人血管内皮生长因子C基因的真核表达载体 ,检测该基因在真核细胞中的表达 ,研究VEGF C基因在淋巴管生成中的作用。方法 :含有绿色荧光蛋白基因的质粒 pEGFP 1通过末端平滑化 ,酶切获得 5’(粘端 )BamHI EGFP XbaI(平端 ) 3’片断 ,已经构建的VEGF C表达载体 pcDNA3.1/VEGF C通过末端平滑化 ,酶切获得 5’ (粘端 )BamHI pcDNA3.1 目的基因 Kp nI(平端 ) 3’ ,两片段连接构建含有绿色荧光蛋白的真核表达载体 ,琼脂糖凝胶电泳并测序检测插入片段的正确性。将该载体通过脂质体转染到真核细胞CHO中 ,观察绿色荧光蛋白在CHO细胞中的表达情况。通过G4 18筛选阳性转染细胞 ,提取总RNA ,行RT PCR ,PCR产物琼脂糖凝胶电泳观察VEGF C基因在CHO细胞中的表达情况。结果 :琼脂糖凝胶电泳证实了插入EGFP片段的大小 ,测序结果证实了插入片段的正确性 ,CHO细胞中看到绿色荧光蛋白的表达 ,RT PCR产物中含有VEGF CcDNA。结论 :成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的VEGF
- 董平刘执玉高杰李贵宝毕玉顺田铧丁兆习
- 关键词：血管内皮生长因子真核细胞杂合子基因表达
