国家自然科学基金(C0304)
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- 重组蛋白TATm-Survivin(T34/117A)对乳腺癌细胞周期变化与凋亡的影响
- 2011年
- 背景与目的:Survivin是一个抗凋亡、促增殖的双功能基因,且高表达于多种恶性肿瘤和转化组织中,使其成为抗肿瘤药物研究的新靶点。本研究观察经点突变的重组蛋白药物TATm-Survivin(T34/117A)处理乳腺癌细胞B-Cap-37后,对乳腺癌细胞B-Cap-37细胞周期和增殖的影响,检测其对癌细胞促凋亡且抑制增殖的药效并初步探讨其分子机制。方法:重叠PCR法在TATm-Survivin(T34A)基因上引入突变位点Thr117→Ala117,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期及线粒体膜电位变化;Western blot检测Aurora B激酶底物Histone H3的磷酸化水平和Caspase-3激活情况。结果:TATm-Survivin(T34/117A)蛋白对B-Cap-37细胞的增殖有显著的抑制作用;作用24 h后,细胞被阻滞在G0/G1期,G0/G1期细胞由对照组的(54.1±6.1)%显著增加到(62.7±5.1)%(P<0.05),作用48 h后,细胞被阻滞在G2/M期,G2/M细胞由对照组的(16.6±8.9)%显著增加到(24.0±6.0)%;Aurora B激酶活性通过Histone H3的磷酸化水平间接反映,蛋白药物处理48 h后p-Histone H3的灰度值由对照组的100%降低到89.8%(P<0.05);48 h时,细胞线粒体膜电位由对照组的(649.9±8.0)%显著降低到(582.9±15.6)%(P<0.05);细胞凋亡率由对照组的(4.6±0.7)%显著增加到(42.7±0.5)%(P<0.01),与对照相比,不同浓度的重组蛋白均激活了Caspase-3。结论:重组蛋白TATm-Survivin(T34/117A)对乳腺癌B-Cap-37具有抑制增殖、促凋亡作用,其与降低Aurora B激酶的活性,并激活Caspase-3相关。
- 康燕燕唐莉莉石磊陈海龙林南静马兴元
- 关键词：点突变乳腺癌凋亡
