军队医药卫生科研基金(02ma04)
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 相关作者：李青张丽英张丰陈广生洪柳更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院厦门大学香港科技大学更多>>
- 发文基金：军队医药卫生科研基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Axin基因的表达对神经胶质瘤细胞系C6生物学特性的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究Axin基因对神经胶质瘤细胞C6生物学特性及相关蛋白的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。应用末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察细胞凋亡及比率。采用免疫细胞化学染色法检测Ki67、CyclinD1、p53的表达。结果转染Axin基因使细胞周期在G1期阻滞;细胞增殖能力和细胞克隆形成能力均显著降低;细胞凋亡率增高;Ki67及CyclinD1低表达,p53高表达。结论转染Axin基因后胶质瘤细胞出现了一定的增殖抑制现象,诱导细胞凋亡,Axin基因可能通过上调p53基因表达和下调Cy-clinD1表达而抑制胶质瘤细胞的生长。
- 张丽英李青陈广生叶菁张丰李繁烦林圣彩
- 关键词：胶质瘤细胞细胞周期细胞凋亡P53
- V806M突变型Axin基因真核表达载体的构建及其在神经胶质细胞瘤内的表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建V806M突变型Axin基因真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并稳定表达于大鼠神经胶质瘤细胞系C6。方法用分子克隆技术,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),经NheⅠ和SmaⅠ双酶切鉴定后,用脂质体法稳定转染神经胶质瘤细胞C6。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),稳定转染后,经荧光显微镜和免疫细胞化学染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究此种突变体Axin是否影响细胞的生物学行为以及是否参与胶质瘤的发生发展奠定了实验基础。
- 李烦繁李青陈广生张丽英洪柳王淑芳姚丽
- 关键词：EGFP真核表达载体
- RGS16与p53在人胶质瘤中的表达及相关性研究被引量：3
- 2005年
- 目的研究G蛋白信号调节子16(RGS16)与p53在人胶质瘤中表达及其相关性。方法利用免疫组织化学链霉亲合素生物素过氧化物酶复合物(SABC)法检测42例胶质瘤标本中RGS16与p53的表达。结果RGS16在10例胶质瘤旁正常脑组织有8例神经元阳性但胶质细胞阴性、42例胶质瘤中37例肿瘤细胞阳性,二者差异显著(P<0.05);p53在瘤旁正常脑组织中阴性,胶质瘤中15例阳性,差异明显(P<0.05);RGS16、p53表达均与病理分型、分级无关(P>0.05);其中,RGS16与p53共同阳性表达11例,共同阴性表达1例,Kappa检验二者表达呈负相一致(P<0.05)。结论RGS16在胶质瘤中高表达而与病理分级无关,推测RGS16可能在胶质瘤发生中起作用。另外,胶质瘤中RGS16与p53表达呈负相关。
- 洪柳李青陈广生张丰聂蕾张丽英林圣彩
- 关键词：胶质瘤P53免疫组织化学
- DNA永生化链和肿瘤干细胞关系的初步研究被引量：9
- 2005年
- 目的:探讨DNA永生化链的分配方式与肿瘤干细胞之间的关系.方法:采用启动和促进两阶段化学诱癌方法在小鼠背部诱导皮肤肿瘤;用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测DNA永生化链在发育期、成年期小鼠皮肤成体干细胞及皮肤肿瘤干细胞中的滞留时间;图像分析DNA含量方法检测肿瘤细胞倍体变化.结果:诱癌4mo后,40只小鼠中有17只背部分别长出1～3个皮肤肿瘤.BrdU阳性细胞变化情况检测显示,24h后发育期、成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞和肿瘤组织的细胞均为阳性,阳性部位为细胞核;60d后发育期标记的小鼠皮肤上皮中仍有少数细胞为阳性,它们主要存在于毛囊的隆突部位(bulge),少数位于皮肤基底层.标记后30d检测成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞,结果均为阴性.标记后30d检测肿瘤组织发现仍有少数细胞BrdU阳性,这些肿瘤细胞主要分布在肿瘤实质组织和间质组织的交界部位;标记后60d检测,肿瘤组织中不再有BrdU阳性细胞.图像分析DNA含量方法发现上述17例小鼠肿瘤都是非整倍体核型.结论:小鼠皮肤成体干细胞存在DNA永生化链,其在有丝分裂过程中发生非随机分配,肿瘤干细胞中可能存在DNA永生化链,其分配方式趋向随机分配.
- 张丰李青朱晓慧赵一岭马福成王文勇张丽英聂蕾洪柳
- 关键词：成体干细胞肿瘤干细胞
- 外源性RGS16基因稳定转染对胶质瘤C6细胞生长的影响被引量：3
- 2006年
- 背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线、平板克隆形成等方法研究RGS16基因对胶质瘤细胞周期、生长及增殖的影响。结果:成功构建了稳定表达RGS16和表达空载体的细胞系C6-RGS16、C6-GFP。C6-RGS16、C6-GFP和C6经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为28.5%、18.9%和14.3%(P<0.05);生长曲线表明C6-RGS16生长的速度明显快于C6-GFP及C6,但其平板克隆形成率分别为12%、25%和25%(P<0.05)。结论:RGS16促进C6细胞周期从G1期向S期过渡,加快细胞生长速度,但是并不促进细胞克隆形成。
- 洪柳李青陈广生张丰聂蕾林圣彩
- 关键词：基因转染细胞生长胶质瘤C6细胞
- Axin基因的表达对神经胶质瘤细胞系C6生物学特性的影响
- 目的研究Axin基因对神经胶质瘤细胞C6生物学特性及相关蛋白的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞生长曲线,应用流式细胞仪（FCW）测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。应用末端T...
- 张丽英李青陈广生
- 关键词：胶质瘤细胞细胞周期细胞凋亡P53
- 文献传递
- 突变型Axin基因在神经胶质瘤细胞系C6中的功能研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究突变型Axin基因对C6细胞增殖及细胞周期的影响,以期揭示突变型Axin基因是否影响胶质瘤的发生。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。采用SP法免疫细胞化学染色法检测Ki-67、cyclinD1表达。结果转染突变型Axin基因与转染野生型Axin基因的C6细胞在生长速度,克隆形成能力方面均显著降低,且组间无差别;C6、C6-Vector、C6-Vector-Axin、和C6-Vector-Axin806各组细胞经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为:27.2%、24.8%、18.9%和18.5%;Ki-67及cyclinD1在转染突变型Axin基因与转染野生型Axin基因的C6细胞中表达均降低,且组间无差别。结论突变型Axin基因明显抑制C6细胞的增殖能力,该位点突变可能并不是胶质瘤发生的关键因素。
- 李烦繁李青陈广生张丽英陆建荣
- 关键词：细胞增殖细胞周期
- 非整倍体与肿瘤细胞增殖表型关系的初步研究
- 2005年
- 目的探讨非整倍体与肿瘤细胞增殖表型的关系.方法采用平板克隆形成实验检测人胶质瘤细胞系BT325和大鼠胶质瘤细胞系C6单个细胞的增殖能力,应用常规染色体分析方法检测这些细胞系的核型.结果 BT325和C6细胞系中具有最强增殖能力的细胞分别占8.0%和13.0%左右,具有中等增殖能力的细胞比例分别占17.0%和27.0%,不具有增殖能力或增殖能力很低的细胞分别占75.0%和60.0%.连续细胞克隆形成实验发现,只有具有最强增殖能力的细胞能够连续传代.核型分析结果表明这些细胞系都是非整倍体核型,细胞系BT325的众数范围是47～57,C6的众数范围是32～41,众数范围的细胞比例分别是72.6%和73.4%.结论单纯从非整倍体出发不可能合理解释肿瘤细胞增殖表型的异质性现象,提示有其它机制参与癌变过程.
- 张丰李青张丽英赵一岭姚丽洪柳聂蕾邵秋杰
- 关键词：非整倍体
- 真核表达载体pIRES2-EGFP-Axin的构建及其在神经胶质瘤细胞内的表达被引量：10
- 2005年
- 目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中Axin的表达。结果:构建了真核表达载体pIRES2EGFPAxin,用脂质体法转染神经胶质瘤细胞C6后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论:成功地构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究Axin对肿瘤的生物学作用以及Axin在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。
- 张丽英李青陈广生林圣彩叶菁司少艳张丰
- 关键词：AXINEGFP真核表达载体
