天津市自然科学基金(08JCZDJC16200)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王德芝张春明郝建秀杨磊刘鉴峰更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院放射医学研究所更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：6
- 2010年
- 目的建立一种简便实用胶体金免疫层析检测方法,用于人心肌肌钙蛋白I(cTnI)的快速检测。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,以兔源抗cTnI多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,采用免疫层析技术制备快速检测cTnI胶体金免疫层析检测试纸条,并与国外生产的胶体金试剂盒作对比。结果该试纸条检测范围质量浓度为5 ng/mL～1μg/mL;灵敏度质量浓度为5 ng/mL;特异性:与肌红蛋白、肌酸磷酸激酶同工酶、cTnT、cTnC无交叉反应;与国外胶体金试纸条检测结果比较阳性符合率为96.4%,阴性符合率为100.0%。结论成功建立cTnI胶体金免疫层析检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要。
- 郝建秀张春明王沂宋娜玲贺欣刘鉴峰王德芝
- 关键词：胶体金免疫层析技术急性心肌梗死
- 响应曲面法优化心肌肌钙蛋白I在E.coli中表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 为优化已构建表达人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因工程菌的表达条件,获得纯度较高的cTnI作为抗原用于研制临床上检测心肌梗塞的试剂盒;通过PBD(Plackett Burman Design)设计,考察各因素对目的蛋白cTnI表达的影响,证明诱导时间、pH、KCl浓度是影响最大的三个因素,通过响应曲面法(RSM)优化对cTnI表达影响最大的三个因素,构建回归方程预测cTnI的表达所占总蛋白的百分比,在最优条件下目的蛋白表达所占菌体总蛋白含量的26%。经过硫酸氨沉淀和DEAE-Cellulose离子交换层析,将重组的cTnI蛋白进行纯化,经SDS-PAGE检测后,目的蛋白只有一条带;经Western-blottting和临床检测cTnI试剂盒检测后,证明纯化的cTnI有良好的特性,可以作为免疫动物的抗原,制备特异性强,亲和力好的单克隆抗体,也可以作为临床上标定不同cTnI检测方法的校准物。
- 杨磊张春明王德芝
- 人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的:以重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)为抗原制备鼠源单克隆抗体(McAb)及兔源多克隆抗体,并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的重组人cTnⅠ为抗原免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞同Sp2/0骨髓瘤细胞融合,利用选择培养基筛选融合的杂交瘤细胞,用有限稀释法分离获得能够稳定分泌抗cTnⅠ的McAb阳性克隆,并利用体内诱生法大规模制备McAb,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体;兔多抗制备以cTnⅠ为抗原常规免疫后取其血清;用间接ELISA和Western印迹鉴定抗体的性质。结果:经ELISA鉴定,筛选出5株能分泌cTnⅠMcAb的杂交瘤细胞株,即C5B2、C5B3、C5B4、C5B1、B1A6,效价最高的B1A6株分泌的McAb为IgG3型,纯化后效价为1∶10000,亲和常数为1.08×10-9mol/L,Western印迹鉴定表明cTnⅠMcAb有良好的特异性;兔多抗纯化后的效价为1∶8000。结论:制备了具有良好特性的cTnⅠMcAb和多克隆抗体。
- 杨磊张春明郝建秀佘义王德芝
- 关键词：单克隆抗体多克隆抗体
- 心肌肌钙蛋白I(cTnI)合成肽制备、鉴定及抗体研究被引量：2
- 2013年
- 目的制备人心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)合成肽并鉴定其质量。方法根据人cTnI氨基酸序列,结合计算机软件分析,预测cTnI分子的亲水性、抗原性和同源性,采用固相多肽合成法合成了cTnI分子98～110位氨基酸肽段序列(13肽,RQLHARVDKVDEE)。经与载体蛋白KLH偶联作为免疫原制备抗cTnI-KLH抗体,用间接ELISA方法鉴定其免疫原性。结果采用多肽合成法合成的cTnI合成多肽(13肽),经HPLC纯化后,以其制备的cTnI-KLH纯度达到95%。免疫学实验证实,制备的抗体效价达到1∶100 000。结论本研究制备的肽段连接物具有较强的免疫原性,并与生物提取人cTnI具有较好的交叉反应性。cTnI合成肽的研制为临床cTnI检测试剂的国产化奠定了基础。
- 王德芝周则卫刘鉴峰徐文清郝建秀杨福军张春明
- 关键词：抗体
- 体外展示技术及其在抗体工程中的应用
- 2009年
- 体外展示技术包括核糖体展示技术、mRNA展示技术、DNA展示技术,是在无细胞蛋白质表达体系内将基因型和表型通过一定的方法连接在一起,体外高通量的筛选多肽和蛋白质的技术。抗体的产生是一个不断选择的过程,利用体外展示技术在体外选择针对某一抗原的抗体分子,并结合基因工程技术对抗体进行改造,以产生高亲和力、高特异性的抗体。体外展示技术的研究和应用已越来越广泛,有望成为下一代的抗体制备技术。
- 杨磊张春明王德芝
- 关键词：抗体工程单链抗体
