国家自然科学基金(30471296)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：尹惠琼章金刚史利军李刚张亚兰更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 禽流感病毒HA基因在S2细胞中的表达与鉴定被引量：2
- 2010年
- 根据GenBank中发表的禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)序列设计了1对引物并分别引入NotⅠ和NcoⅠ酶切位点,用PCR方法扩增AIV HA基因片段。回收目的基因片段,并用NotⅠ/NcoⅠ限制性内切酶消化,经纯化后,将其定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5中,构建重组表达载体pMT-HA。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin(杀稻瘟素)进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-HA。提取S2-HA细胞的基因组DNA,PCR检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用终浓度500μmol/L的硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western Blotting检测。结果表明,成功构建了重组表达载体pMT-HA,转染细胞经10 mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达HA的果蝇S2细胞株。
- 史利军张亚兰尹惠琼章金刚李刚
- 关键词：禽流感病毒HA基因
- 禽减蛋综合征腺病毒载体表达禽流感病毒血凝素基因的研究
- 腺病毒是研究得最为清楚的动物病毒之一,其研究成果极大的丰富了现代分子生物学内容,如腺病毒5型已经成为现代分子生物学和基因工程研究的良好模型和工具;腺病毒载体已经广泛应用于基因工程疫苗和基因治疗载体的构建。与哺乳动物腺病毒...
- 张亚兰丁芳张桂红吕茂民杜华茂廖明章金刚
- 文献传递
