江苏省高技术研究计划项目(BG2006313)
- 作品数：10 被引量：49H指数：5
- 相关作者：章镇乔玉山胡钟东渠慎春姚泉洪更多>>
- 相关机构：南京农业大学上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省高技术研究计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 明水梨叶片不定芽再生体系的建立被引量：5
- 2009年
- 以‘明水’梨(Akemizu)叶片为外植体,研究了不同基本培养基,不同浓度噻重氮苯基脲(TDZ)和吲哚丁酸(IBA)的组合,不同暗培养时间以及不同浓度的硝酸银(AgNO3)对梨叶片不定芽再生的影响。试验结果表明,在NN69+TDZ 1.5mg/L+IBA0.2 mg/L+AgNO31.0 mg/L中暗培养25 d后,叶片不定芽再生率最高,达到71.8%。
- 李海乔玉山李志强佟兆国章镇
- 关键词：不定芽培养基
- 若光梨叶片诱导不定芽的研究被引量：4
- 2007年
- 以NN69为基本培养基,附加TDZ 1.0 mg/L、IBA 0.15 mg/L、AgNO30.1 mg/L,处理若光梨叶片,暗培养21 d,再于光照条件下培养30 d,获得不定芽和再生植株,再生频率为63.2%。
- 胡钟东乔玉山渠慎春章镇
- 关键词：叶片不定芽
- 梨ACC氧化酶基因(ACO)的片段克隆及其RNAi载体构建被引量：13
- 2006年
- 以若光梨成熟果实为材料,提取总RNA,在ACC氧化酶基因(ACO)cDNA序列同源性较高区域设计一对特异引物,利用RT-PCR克隆了ACC氧化酶(ACO)基因片段。将ACO反义基因、与副球菌中类胡罗卜素合成有关的间隔基因YYT和ACO正义基因3个片段串联在一起,经鉴定后,插入到植物表达载体中,构建成能够表达ACC氧化酶基因的双链RNA的植物载体pYF028,为耐贮砂梨的遗传转化创造条件。
- 胡钟东乔玉山王三红姚泉洪章镇
- 关键词：RT-PCR克隆RNAI载体构建
- 砂梨扩展蛋白基因cDNA克隆及全序列分析被引量：3
- 2008年
- 设计植物EXP扩展蛋白简并引物,以砂梨果实cDNA为模板,克隆得到EXP基因cDNA片段,该片段长465 bp。根据该片段序列,分别设计2条5’和3’末端扩增的特异引物,利用RACE技术,获得了该片段的5’端和3’端序列。用DNAMAN5.22软件对3个序列进行拼接和分析,获得了该基因的cDNA全长,命名为Pyp-EXP。该cDNA全长为1 395 bp,5’端起始密码子ATG始于72 bp,3’端终止子TAG止于830 bp,Ploy+(A)从1 363～1 395 bp。该基因已在GenBank基因数据库注册,注册号为EF602031。Pyp-EXP核苷酸序列有一个759 bp完整的开放阅读框,编码区与西洋梨、苹果、湖北海棠、桃的同源性分别为96%,96%,94%和86%;该cDNA推导编码252个氨基酸,含有1个组氨酸(His_Phe_Asp,HFD)功能域,与西洋梨、苹果、湖北海棠、桃中相应序列同源性分别为98%,97%,95%和93%。该基因的克隆为研究扩展蛋白的时空表达及其在果实发育和成熟过程中的作用奠定了基础。
- 宋长年乔玉山章镇胡钟东渠慎春熊爱生姚泉洪
- 关键词：砂梨分子克隆
- 不同因素对小黄李试管苗增殖与生根的影响被引量：3
- 2008年
- 以‘小黄李’砧木的单芽茎段为外植体进行离体培养，研究不同培养基、植物生长调节剂的种类及其浓度、pH值对‘小黄李’增殖与生根的影响。结果表明：较合适的增殖培养基为F14＋0．8mg·L^-1 6-BA＋0．2mg·L^-1 NAA＋30g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂，pH值5．4～5．8；较合适的生根培养基为改良MS＋0．1mg·L^-1 NAA＋0．2mg·L^-1 IBA＋30g·L^-1蔗糖＋6g·L^-1琼脂，生根率达100％，单株平均根数3～4根；以蛭石：珍珠岩：泥炭（1：1：1）移栽生根苗，成活率达80％以上，实验结果为工厂化育苗生产奠定了基础。
- 丁燕乔玉山章镇佟兆国高志红
- 关键词：增殖
- 砂梨脂氧合酶cDNA片段克隆与RNAi载体构建被引量：9
- 2007年
- 以砂梨‘若光’的成熟果实为材料,根据脂氧合酶氨基酸保守区设计1对简并引物,采用RT-PCR克隆到1段长827 bp的序列,经Blast比对和DNAstar软件聚类分析,结果表明由该序列推导出的氨基酸序列含有脂氧合酶氨基酸保守结构域,与马铃薯脂氧合酶基因的氨基酸序列相似性达到77.5%,判断其为砂梨脂氧合酶基因片段,命名为LOX1,并将序列登录到GenBank,登录号为EF215448。根据RNAi载体的构建原则,选择LOX1一开放阅读框设计携带酶切位点的特异引物,通过PCR扩增正、反向基因片段,再与YYT间隔区串连,插入植物表达载体pYF7713中的相应位置,成功地构建了干扰LOX基因表达的RNAi的植物双元表达载体pYL028,为深入研究该基因在砂梨果实成熟过程中的功能及耐贮藏基因工程育种奠定了基础。
- 胡钟东乔玉山王三红姚泉洪章镇
- 关键词：砂梨脂氧合酶RT-PCRRNAI
- 山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响被引量：6
- 2010年
- 探讨了不同浓度的山梨醇清洗溶液对李果肉组织中RNA提取效果的影响。经琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR等方法对RNA质量和产率进行了分析,结果表明:李果肉组织研磨后用山梨醇清洗溶液处理有利于总RNA的提取,而不添加山梨醇的清洗溶液,提取液中检测不到RNA,当清洗溶液中山梨醇浓度为1.10mol/L时,李果肉组织总RNA的产率明显高于山梨醇浓度为0.35 mol/L和3.00 mol/L时的产率;以不同贮藏天数的李果实为试材提取总RNA,其结果是一致的;通过RT-PCR扩增蛋白延伸因子EF-2基因,结果证明本试验提取的总RNA可以用于基因转录表达特性分析。
- 徐秋红章镇佟兆国高志红渠慎春乔玉山
- 关键词：果肉山梨醇总RNA
- 砂梨果实ACC氧化酶cDNA克隆及其反义表达载体构建被引量：3
- 2008年
- 利用RT-PCR和RACE技术从‘早生新水’砂梨成熟果实cDNA中克隆出ACC氧化酶基因保守片段及其5′和3′端,拼接后获得砂梨果实ACC氧化酶cDNA全长。该cDNA全长1225bp,将其命名为Pyp-ACO,GenBank登录号为EF451060。Pyp-ACO核苷酸序列有一个945bp的开放读码框,5′端非翻译区为63bp,3′端非翻译区为217bp,与西洋梨和苹果的编码区核苷酸序列有较高的同源性,分别为98.3%和98.1%。Pyp-ACO推导编码314个氨基酸,该序列具备非血红素二价铁离子依赖型的氧化/加氧酶类的12个保守氨基酸和催化活性所需的3个氨基酸。将Pyp-ACO编码区序列反向插入pYPX145载体,构建了由双35S启动子所控制的双元表达载体,同时已成功将表达载体导入根癌农杆菌菌株LBA4404,为耐贮藏转基因梨选育奠定了基础。
- 乔玉山宋长年渠慎春胡钟东熊爱生姚泉洪章镇
- 关键词：砂梨ACC氧化酶CDNA克隆反义表达载体
- 气体吸收剂对常温下圆黄梨果实采后品质的影响
- 以圆黄梨为试验材料,研究了常温(24～32℃)条件下乙烯吸收剂和CO吸收剂处理对果实采后品质的影响。结果表明,0.025mm PVC保鲜膜内加乙烯气体吸收剂或CO气体吸收剂均能延缓果实硬度和可滴定酸含量的下降,减少果实重...
- 丁磊焦君华李志强王新卫章镇乔玉山
- 关键词：圆黄梨果实采后品质
- 文献传递
- 不同处理对丰水梨离体叶片不定芽再生的影响被引量：13
- 2007年
- 采用多因素组合试验设计,研究了噻重氮苯基腺(TDZ)和吲哚丁酸(IBA)浓度组合、外植体类型、叶片放置方式、暗培养时间以及乙烯抑制剂AgNO3处理等因素对丰水梨离体叶片再生体系建立的影响。结果表明,NN69+TDZ2.0 mg.L-1+IBA0.1 mg.L-1处理的叶片再生频率和再生芽数分别达到86.7%和2.92,为丰水梨最佳培养基与植物生长物质组合。同一叶片的基部和中部比顶端更容易产生愈伤并再生形成不定芽。叶片远轴面向下接触培养基比近轴面向下利于叶片不定芽再生。AgNO3质量浓度在0.1-1.5 mg.L-1范围内对离体叶片再生有显著促进作用,NN69+TDZ 2.0mg.L-1+IBA0.2 mg.L-1+AgNO31.0 mg.L-1以及NN69+TDZ 1.5 mg.L-1+IBA0.3 mg.L-1+AgNO30.1 mg.L-1使丰水梨叶片再生频率均达到100%。
- 周莉莉蔡斌华乔玉山王三红章镇
- 关键词：丰水梨离体叶片不定芽
