山西省自然科学基金(2012011032-4)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：王鹏飞杜俊杰张建成郑斌孙志刚更多>>
- 相关机构：山西农业大学山西省农业科学院更多>>
- 发文基金：山西省自然科学基金国家教育部博士点基金山西省科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 超量表达欧李ChPSY基因促进转基因番茄类胡萝卜素合成的研究被引量：5
- 2014年
- 将从欧李果实中分离的ChPSY cDNA经过序列分析、酶切之后,连接到植物表达载体PMV,构建了植物重组载体pBI-ChPSY,并通过根瘤农杆菌EHA105介导转化番茄,获得了12株抗性植株。PCR检测和Southern杂交结果显示,12株抗性植株均为阳性,说明外源基因ChPSY整合到转化植株的基因组中。RT-PCR分析表明,ChPSY基因在转化植株果实中得到表达。HPLC分析表明,转ChPSY基因番茄果实中总类胡萝卜素含量增加了1.62~3.04倍,八氢番茄红素、番茄红素、β–胡萝卜素和α–胡萝卜素含量分别增加了4.87、2.10、2.59和3.25倍。转化植株中内源类胡萝卜素合成基因的表达也受到广泛的影响。ChPSY基因超量表达有效促进了番茄果实中类胡萝卜素的合成和积累。
- 张建成王鹏飞郝燕燕杨淑一郑斌牛自勉杜俊杰
- 关键词：欧李番茄类胡萝卜素
- 欧李ChCCD4基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2018年
- 类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCDs)是类胡萝卜素氧化裂解的重要酶之一,在植物中,CCDs催化裂解产物具有重要的作用。本研究以欧李品种‘农大4号’果实为试验材料,根据转录组测序数据分析,利用RT-PCR从中克隆了到了ChCCD4基因。生物信息分析发现,该序列长度1 794 bp,编码597个氨基酸的蛋白,分子量为65 717.90 Da,等电点为6.10,蛋白质二级结构主要由α-螺旋,β-折叠,随机卷须和延伸链构成,ChCCD4蛋白三级结构与CCD蛋白家族三级结构相似,具有相同的结构域。将ChCCD4基因连接到原核表达载体pet-28a,转化大肠杆菌BL21 (DE3),诱导表达,目的蛋白经过SDS-PAGE凝胶电泳检测,与空白对比,检测出了目的蛋白条带。本研究为ChCCD4基因的功能研究提供理论依据,为欧李育种方向提供了理论参考。
- 张建成高利敏王鹏飞穆霄鹏王裕添杜灵敏宣晓毛杜俊杰
- 关键词：欧李生物信息分析原核表达
- 果实中花色素苷生物合成及调控技术研究被引量：5
- 2012年
- 果实色泽是决定果实商品价值的重要指标。花色素苷是果实的重要色素之一,花色素苷的合成与积累受内外因子的调控。综述了近年来果实花色素苷生物合成的研究进展,重点介绍了对花色素苷合成的影响因子,并总结了提高果实花色素苷含量的技术措施及今后需探讨和解决的一些问题。
- 孙志刚张建成王鹏飞杜俊杰
- 关键词：果实花色素苷生物合成
- 欧李番茄红素β–环化酶基因ChLCYb的分离与功能鉴定被引量：3
- 2017年
- 利用RACE技术和RT-PCR相结合,从欧李[Cerasus humilis(Bge)Sok]果实中克隆获得长度为1798 bp的番茄红素β–环化酶(lycopeneβ-cyclase)基因ChLCYb的cDNA全长序列,开放读码框为1515 bp,编码503个氨基酸。序列分析发现,ChLCYb具有植物LCYb保守区(Plant LCYb conserved region)、FAD/NAD(P)结合区(Dinucleotide-binding signature)、"Cyclase motif 1"、"Cyclase motif 2"和"lycopeneβ-cyclase motif"等典型结构特征,在N–端存在1~84个氨基酸残基组成的转运肽信号序列,在85~106、209~227、373~391和460~480氨基酸区域包含4个跨膜结构域。荧光定量PCR结果表明,ChLCYb在叶中表达量最高,其次是幼果,在根中最低;在欧李果实发育过程中,果皮中ChLCYb表达量高于果肉,果皮中ChLCYb表达量先升高,在花后90 d左右表达量最高,然后呈缓慢下降趋势,而果肉中ChLCYb表达量相对平稳。ChLCYb表达模式与果皮和果肉中β–胡萝卜素含量的积累呈显著正相关(r=0.824和r=0.712,P<0.05)。利用大肠杆菌工程菌体系诱导表达了ChLCYb蛋白,并证实其可催化工程菌株中番茄红素向β–胡萝卜素转化,其转化效率达71.22%。在番茄中超量表达ChLCYb促进果实中番茄红素向β–胡萝卜素的转化和积累,转基因株系L-11号果实中的β–胡萝卜素含量高达692.18μg·g^(-1) DW,是非转基因对照的4.42倍。
- 张建成高利敏王鹏飞杨淑一郑斌王裕添杜俊杰
- 关键词：欧李基因克隆基因表达
- 欧李ChPSY基因的原核表达被引量：1
- 2012年
- 为了解欧李果实类胡萝卜素合成过程中八氢番茄红素合成酶基因的作用和功能,将从欧李成熟果实中分离的ChPSY cDNA序列,连接到原核表达载体pET-28a(+),导入大肠杆菌BL21(DE3)体内诱导表达。SDS-PAGE分析表明,1.0 mmol/LIPTG诱导4 h,表达了相对分子量约为45.8 kD融合蛋白产物;IPTG的浓度和诱导时间优化表明,1.2 mmol/LIPTG诱导6 h时,融合蛋白的表达量最大。此外,Western-blot试验证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。这为欧李八氢番茄红素合成酶基因ChPSY生物学功能的深入研究奠定了基础。
- 陈俊奇王鹏飞杜俊杰李润丰洪文泓李佩马精选张建成
- 关键词：欧李八氢番茄红素合成酶CDNA序列原核表达
