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国家科技支撑计划(2011BAD09B03): 作品数：16 被引量：70H指数：6; 相关作者：刘宁任皓威李萌刘微张昊更多>>; 相关机构：东北农业大学黑龙江省乳品工业技术开发中心中国农业大学更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划博士科研启动基金北京市重大科技计划项目更多>>; 相关领域：轻工技术与工程理学生物学医药卫生更多>>

人乳β-酪蛋白单体二级结构及胶束微观结构的研究被引量：5: 2014年; 以人乳β-酪蛋白为研究对象,使用圆二色光谱研究单体的二级结构后,借助透射电镜,扫描电镜,和共聚焦电子显微镜技术对β-酪蛋白胶束的微观结构进行观察。圆二色光谱结果表明,单体内部含有α螺旋1.33%,β-折叠17.3%,β-转角31.07%,无规则卷曲50.23%,二级结构相对较少,单体的内部构象疏松开放。共聚焦电子显微镜和扫描电镜结果表明胶束与胶束之间容易进一步缔合,形成直径大小不均的胶束团,透射电镜结果表明,人乳β-酪蛋白胶束最小直径约为20 nm,胶束内部呈现出疏松有孔的柔性结构,这种结构与β-酪蛋白胶束具有释放和保留某些免疫活性物质的功能相关。; 刘微王辰元张婉舒李萌刘宁; 关键词：胶束微观结构

小角X-射线散射与结构预测法研究中国人乳β-酪蛋白的3级结构被引量：1: 2015年; 通过小角X-射线散射与结构预测的方法研究人乳β-酪蛋白的3级结构,并分析其生理功能。通过使用DEAE Sepharose FAST Flow琼脂糖凝胶获得纯度大于90%的β-酪蛋白纯品,并对其溶液进行小角X-射线散射(0.2 mol磷酸盐缓冲溶液,10 mmol DTT,p H 6.7),将获得的人乳β-酪蛋白的结构信息与通过折叠识别及从头预测构建的预测模型进行比较,筛选出在试验条件下与试验结果最相符的人乳β-酪蛋白3级结构模型,该模型结构松散,含有较少的α-螺旋和β-折叠。同时结合模型对人乳β-酪蛋白磷酸化、糖基化及脂质化等蛋白质功能位点进行了分析,认为人乳β-酪蛋白含有12个可以与乳糖或葡萄糖结合的糖基化位点,7个脂质化位点,其磷酸化位点与已知的5个磷酸化位点相符。; 王辰元李萌刘宁

离子交换色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定中国人乳中的β-酪蛋白被引量：6: 2013年; 以新鲜中国人乳为研究对象,在酸性条件下加氯化钙分离酪蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从pH值、离心力和CaCl2浓度等3个方面对分离效果进行评价。结果表明:当pH=4.3,离心力为10 400 g,CaCl2溶液浓度为60 mmol/L时,分离得到的酪蛋白组分纯度最高。对所得酪蛋白沉淀进行DEAE阴离子交换色谱分离,得到3个洗脱液。对其中第3个峰进行Western-Blot法及基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱法(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定,证明该峰能与人β-酪蛋白抗体特异性结合,确认其为人乳β-酪蛋白;将质谱结果在Mascot数据库中进行数据检索,序列覆盖率为50%,进一步确定其为人乳β-酪蛋白。综上所述,我们建立了能够得到符合蛋白质组学研究要求的人乳β-酪蛋白的方法。; 黄宇任皓威刘彪刘宁李萌王东茂; 关键词：阴离子交换色谱质谱 Β-酪蛋白纯化

婴幼儿配方乳粉中脂肪酸的种类和质量分数分析被引量：1: 2015年; 抽样购买市售10种不同品牌的国产和进口婴幼儿配方乳粉,采用气相色谱法测定其中脂肪酸组成,了解和分析目前国产乳粉与进口乳粉脂肪酸的差异。研究结果显示:本研究所采集样品均符合国家相关标准。在脂肪酸组成种类上,国产婴幼儿配方乳粉中的脂肪酸种类要多于进口婴幼儿配方乳粉。在脂肪酸质量分数上,进口婴幼儿乳粉所检出的各种脂肪酸质量分数大部分高于国产婴幼儿乳粉中脂肪酸的质量分数。; 任皓威李贺佳张振何扬波刘宁; 关键词：婴幼儿配方乳粉脂肪酸气相色谱法

超高效液相色谱-串联质谱分析人乳中的3种雌激素被引量：3: 2016年; 建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC—Ms／Ms）的方法对我国人乳中雌激素含量进行分析测定。样品经酶解，提取，固相萃取柱净化和浓缩后，采用Waters UPLCBEHC18色谱柱（50mm×2．1mm，1．7μm）分离，以MRM多反应监测扫描模式检测，外标法定量分析。在0．5-20ng／mL范围内，校准曲线呈现良好的线性，相关系数（R2）大于0．99。结果表明，该方法具有良好灵敏度、准确度。该方法已成功应用于人乳中3种雌激素的定性和定量分析。; 曹宇彤任皓威刘宁; 关键词：人乳雌激素超高效液相色谱-串联质谱固相萃取

不同喂养方式产妇生活质量评价被引量：2: 2014年; 目的评价采用不同的喂养方式对产后妇女生活质量的影响,为社区有针对性地开展心理健康干预提供依据。方法采用随机整群抽样方法,对哈尔滨市某社区208名不同喂养方式的产后哺育期妇女,使用健康调查简表SF-36进行调查,应用SPSS 13.0软件包对资料进行统计分析。结果采用母乳喂养者在生活质量8个维度的得分上普遍较高,除躯体疼痛、一般健康外,其余6个维度母乳喂养组得分高于人工喂养组,差异均有统计学意义(P<0.05);在生理功能和社会功能方面,母乳喂养组得分高于混合喂养组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与人工喂养和混合喂养的产妇相比,母乳喂养组产妇有较好的生活质量,从另一个侧面体现了母乳喂养的优越性。; 张玲杨艳杰刘宁; 关键词：产妇生活质量

基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱法分析人乳β-酪蛋白新生儿体外消化模型多肽组被引量：2: 2015年; 通过体外模拟新生儿消化道条件,用基质辅助激光解吸离子化飞行时间串联质谱法（MALDI-TOF/TOF）探究人乳β-酪蛋白消化后的多肽组。在离子源加速电压为20 k V,激光波长337 nm,激光频率200 Hz,离子延迟提取时间330 ns,质谱信号单次扫描累加2000次条件下,扫描质量范围m/z 500~5000的肽段。结果表明,消化后得到26个肽段,分子量集中在1000~4000 Da。与已知功能的肽段序列进行对比,人乳β-酪蛋白在新生儿体外模型消化后未产生与已知功能的活性肽序列匹配的肽段,但发现9个肽前体,其中含4个血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽前体,2个酪蛋白磷酸肽（CPP）前体,2个抗氧化肽前体,1个免疫活性肽前体,由酶切位点推测分析,肽前体可以继续在蛋白酶作用下转化为生物活性肽。; 李相怡方曦任皓威程琳张拓付国红刘宁; 关键词：Β-酪蛋白新生儿体外消化

人乳β-酪蛋白酶解产物体外对小鼠淋巴细胞的刺激作用: 2014年; 采用离子交换色谱法从人乳中分离、纯化得到人乳β-酪蛋白,利用胰蛋白酶对其进行酶解,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同孵育时间下,不同质量浓度的酶解产物对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾T淋巴细胞增殖情况的影响;ELISA法测定Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)分泌量。结果表明,人乳β-酪蛋白酶解产物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖具有显著的促进作用,且48 h效果最佳;对Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)的分泌具有显著的促进作用、对Th2型细胞因子(IL-6)分泌有显著下调作用;显著增加IFN-γ/IL-4的比值。; 顾鑫任皓威李萌刘宁; 关键词：淋巴细胞增殖 TH1

pH对中国人乳β-酪蛋白二级结构的圆二色和拉曼特征影响被引量：8: 2015年; 人乳中β-酪蛋白为婴儿的快速生长提供了最适宜的氨基酸、钙磷等。以往的研究均是对牛乳的β-酪蛋白二级结构进行分析,而牛乳β-酪蛋白对婴儿配方乳的指导意义不如人乳β-酪蛋白,且人乳β-酪蛋白难以获得合适的蛋白晶体,其三级结构不清楚。为了获得中国人乳β-酪蛋白二级结构的相关基础信息,采用圆二色光谱（CD）法和拉曼光谱（Raman）法分析在不同pH条件下其二级结构的变化,结果表明：pH值的改变能够诱导中国人乳β-酪蛋白二级结构的改变,CD分析表明β-酪蛋白各部分的二级结构分别是：0.5%~2%α-螺旋,16%~18%β-折叠,30%~34%β-转角,49%~51%无规则卷曲;随着pH的增加,部分结构发生了变化,α-螺旋在pH 8处含量增加,而在pH 10处含量减小。拉曼光谱分析表明：β-酪蛋白在酰胺I的特征峰在1 662cm-1处,分析出β-酪蛋白的无规则卷曲含量较高。同时,根据I850/I830的比值计算出β-酪蛋白的酪氨酸残基趋向于＂暴露式＂。圆二色光谱和拉曼光谱都证明了人乳β-酪蛋白二级结构中无规则卷曲的含量最高,而β-折叠和β-转角含量保持相对的稳定。并且,在pH 8条件下,α-螺旋含量高于在其他pH条件下的含量。; 任皓威张婉舒李相怡刘宁; 关键词：圆二色光谱拉曼光谱

中国人乳β-酪蛋白基因克隆表达及生物信息学分析被引量：1: 2015年; 文献显示:牛β-酪蛋白(CSN2)目前有12种遗传变种,提示人类中也可能存在这种现象。为探究中国人乳β-酪蛋白是否与NCBI数据库中该种蛋白的1级结构具有差异性,验证作者先前对中国人乳β-酪蛋白氨基酸序列的分析,采集正常中国女性乳腺组织,提取总RNA,并以其为模板,通过RT-PCR方法扩增人乳β-酪蛋白的编码区(CDS)基因,连接T载体测序,然后提交至Gen Bank(登录号:KF 751868)。与NCBI上人β-酪蛋白的核苷酸序列比较,所得人乳β-酪蛋白CDS序列同源性达到100%,说明该基因在不同人种间具有高度保守性。由其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果:理论等电点(p I)5.52,该蛋白质不存在跨膜结构,具有较强的疏水区域。连接重组质粒和PET-30a-GST载体后,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,37℃诱导4 h,目标重组蛋白以包涵体形式表达,通过Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白,经SDS-PAGE验证,成功构建原核表达载体PET-30a-GST-CSN2,并获得重组人乳β-酪蛋白。这为进一步研究中国人乳β-酪蛋白奠定良好的基础。; 任皓威李春刘宁顾鑫; 关键词：Β-酪蛋白基因克隆

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