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国家自然科学基金(30671060)

作品数:4 被引量:5H指数:1
相关作者:赵威张志谦韩海勃更多>>
相关机构:北京大学肿瘤医院北京大学临床肿瘤学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 2篇迁移
  • 2篇细胞
  • 2篇基因
  • 2篇MYOSIN
  • 2篇TWIST
  • 2篇VA
  • 1篇蛋白
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇印迹
  • 1篇融合蛋白
  • 1篇人肝
  • 1篇人肝癌
  • 1篇人肝癌细胞
  • 1篇转基因
  • 1篇转基因表达
  • 1篇转染
  • 1篇细胞癌
  • 1篇细胞运动
  • 1篇小鼠

机构

  • 2篇北京大学肿瘤...
  • 1篇北京大学临床...

作者

  • 3篇张志谦
  • 3篇赵威
  • 2篇韩海勃

传媒

  • 1篇解剖学报
  • 1篇中国肿瘤临床
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇Clinic...

年份

  • 1篇2010
  • 3篇2009
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
Twist Promotes the Migration of Hepatocellular Carcinoma Cells
2009年
OBJECTIVE To study the effect of the Twist gene on themigration of human hepatocellular carcinoma cells and thepossible mechanisms involved.METHODS RT-PCR was used to detect expression of the Twistgene in primary (Hepl1) and recurrent (Hep12) cell lines fromthe same HCC patient.Hepll cells were stably transfected withTwist-cDNA,and Hep12 cells were transiently transfected withTwist RNAi plasmid.Cell migration assays were performed onTwist up-regulated Hepll cells and Twist RNAi Hep12 cells.RTPCRand Western blot were used to test the expression of EMTmarkers.RESULTS Twist was expressed higher level and had increasedmigration capability in recurrent Hep12 cells than those in primaryHepll cells.Cell models (Twist-Hep1l) in which Twist proteinwas steadily and highly expressed were obtained.Compared withpcDNA3-Hepll cells,migration of Twist-Hepll cells was clearlyincreased.However,migration of Twist RNAi (Si-Twist-Hepl2)Hep12 cells were reduced.Overexpression of Twist in Hep11 cellspromoted expression of N-cad and vimentin.CONCLUSION These results indicate that Twist promotes themigration of hepatocellular carcinoma cells in vitro and may playan important role in the upregulation of mesenchymal markers.
Haibo Han Yantao Du Zhiqian Zhang Zhao Wei
关键词:WESTERN印迹基因效应转基因表达
小鼠抗人Myosin Va多克隆抗体的制备和鉴定被引量:3
2009年
目的:制备Myosin Va多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法:PCR扩增编码人Myosin Va C末端(MyoVaCT)278个氨基酸的cD-NA片段,DNA重组入原核表达质粒pET28a,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基β-D硫代半糖苷(IPTG)诱导表达His-MyoVaCT融合蛋白。经电泳纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。通过ELISA和免疫荧光法鉴定血清特异抗体效价和特异性。结果:成功构建了pET28a/MyoVaCT原核表达载体,转化BL21后可高效表达融合蛋白His-MyoVaCT,纯化蛋白免疫小鼠后产生的Myosin Va多抗可特异检测细胞内源性Myosin Va的表达及定位情况,同时能特异识别细胞内外源表达的Myosin Va分子。结论:获得了效价和特异性都良好的Myosin Va抗体,适合应用于Myosin Va的检测。
韩海勃蓝林祥张志谦赵威
关键词:MYOSINVA融合蛋白多克隆抗体
Myosin Va RNAi慢病毒载体的构建及对肺癌PG细胞运动和迁移能力的影响被引量:1
2009年
目的构建人非常规肌球蛋白myosinVa基因RNAi慢病毒载体,并探讨其对人肺巨细胞癌PG细胞运动和迁移能力的影响。方法针对已经筛选确定的myosinVa基因RNAi有效靶序列,合成靶序列及其阴性对照的寡聚DNA,并连接到pSuper载体获得中间实验质粒pSuper-shM5A及阴性对照pSuper-shCON;然后将H1promoter-shM5A/shCON表达框重组到慢病毒载体plenti4上,分别得到plenti4-H1-shM5A和shCON载体,并进行慢病毒包装。随后用病毒上清感染PG细胞,并筛选出zeocin抗性的稳定细胞系PG-shM5A和shCON。通过RT-PCR方法检测PG-shM5A和shCON细胞的myosinVamRNA表达水平;用创伤愈合和Boyden小室实验测定PG-shM5A和shCON细胞的运动和迁移能力。结果限制性内切酶酶切和测序证实,成功构建myosinVaRNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A。慢病毒包装成功后,感染PG细胞并获得zeocin抗性的细胞;用RT-PCR方法证明,myosinVamRNA被抑制70%以上。创伤愈合和Boyden小室实验表明,感染携带myosinVaRNAi慢病毒的PG细胞运动和迁移能力显著下调。结论成功构建myosinVaRNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A,它能有效抑制人肺巨细胞癌PG细胞的myosinVa表达并降低其运动和迁移能力,初步揭示了myosinVa与肿瘤细胞恶性行为的相关性。
蓝林祥杜艳涛赵威张志谦
关键词:MYOSINVA慢病毒迁移肺巨细胞癌
Twist促进人肝癌细胞的迁移被引量:1
2010年
目的:研究Twist对肝癌细胞迁移能力的影响。方法:RT-PCR方法检测Hep-11和Hep-12中Twist的表达情况。将Twist-cDNA转染Hep-11筛选得到稳定高表达Twist的细胞克隆Twist-Hep-11。构建pSuper-Twist-shRNA干扰载体,瞬时转染Hep-12细胞。用Boyden小室检测过表达和抑制Twist基因后对细胞迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR和Western blot检测Hep-11上调Twist后的EMT标志分子的表达。结果:与Hep-11相比,Hep-12的Twist基因表达显著上调,Hep-12的迁移能力也强于Hep-11。Hep-11细胞过表达Twist后,其迁移能力明显增强;而干扰Hep-12细胞Twist表达后,其迁移能力亦明显下降。Hep-11过表达Twist后,N-cad、Vimentin表达明显上调,E-cad变化不明显。结论:Twist可以促进肝癌细胞的迁移,其机制可能与N-cad、Vimentin表达上调有关。
杜艳涛韩海勃赵威张志谦
关键词:TWISTRNA干扰基因转染迁移
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