北京市自然科学基金(7042032)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 原发性肝细胞癌消减杂交文库构建及差异表达基因筛选被引量：1
- 2006年
- 目的构建人原发性肝细胞癌(HCC)消减杂交文库,筛选差异表达基因。方法以癌组织为检测者(tester)、癌旁组织为参照者(driver),应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建消减杂交cDNA文库,随机挑选56个阳性克隆进行鉴定、测序及同源性分析。结果文库获得130个阳性克隆,鉴定96％有200～1 500 bp插入片断。获得的35个基因中包括已知基因26个。功能未知基因5个,新基因4个。已知基因中包含酶、细胞信号转导、基因调控因子、转录调节因子、癌基因、抗凋亡因子及细胞的黏附与生长调节因子等相关基因。结论应用SSH方法成功构建HCC差异表达基因cDNA文库,筛选出低丰度和新基因在内的HCC差异表达基因。
- 金仲田彭吉润李澍郁卫东冷希圣
- 关键词：肝细胞基因表达杂交
- 利用质谱技术鉴定人肝癌细胞表面自然呈递的MAGE—A3表位被引量：1
- 2007年
- 目的鉴定人肝癌细胞系 HLE 细胞表面自然呈递的1条 HLA-A2限制性 MAGE-A3抗原表位 FLWGPRALV(MAGE-A3_(271-279))。方法用高效液相色谱仪(HPLC)及液-质联用仪对人工合成多肽 FLWGPRALV 进行鉴定,明确该多肽的 HPLC 出峰时间和质谱信号特征,并确定这两种仪器对该多肽的检测下限。以弱酸洗涤法从 HLE 细胞表面洗脱出由主要组织相容性抗原复合物(MHC)分子自然呈递的抗原多肽,用 HPLC 纯化分馏,根据人工合成多肽的出峰时间,收集该出峰时间前后2 min 的馏分,低温冻干后以液.质联用仪进行鉴定,明确其中是否存在 MAGE-A3_(271-279)抗原多肽。结果经纯化的多肽洗涤样品经液.质联用仪检测,可获得一个(m/z)_2为529.9的双电荷质谱信号,对其碰撞诱导解离谱图进一步分析,证明其序列(自 N 端至 C 端)为 FLWGPRALV,相对分子质量为1058.4 Da,与 MAGE-A3_(271-279)抗原多肽相符,说明样品中存在低丰度的目的抗原多肽。结论可以从人肝癌细胞系表面直接分离、鉴定出可被 HLA-A2分子自然呈递的 MAGE-A3表位多肽,提示 MAGE-A3_(271-279)抗原多肽在肝癌免疫治疗中具有潜在应用价值。
- 彭吉润董南刘虎威冷希圣
- 关键词：表位肽类
