国家自然科学基金(30430620)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：杨瑞馥翟俊辉王津郭兆彪宋亚军更多>>
- 相关机构：军事医学科学院山东大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用重组工程技术标记鼠疫菌rpoS基因被引量：1
- 2006年
- 目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板载体pBSMH。设计与待标记基因末端及其下游同源的引物,从模板载体上扩增标签与抗性基因的融合模块,获得两端带同源区的PCR产物,电击转化鼠疫菌感受态细胞。在λRed重组系统的辅助下,标签和抗性基因重组到目的基因的下游,得到表位标签与目的基因C末端融合的重组子。利用针对表位标签的单克隆抗体进行Westernblot分析,验证C末端标记目的蛋白的表达。结果:成功构建了组氨酸标签与抗性基因融合的质粒,以该质粒作为模板,扩增标记标签盒,对鼠疫菌的rpoS基因进行了标记,利用针对组氨酸标签的抗体能够检测到rpoS基因的表达。结论:基于重组工程的基因标记技术可以为基因功能研究提供一个有价值的研究手段。
- 张建山陈泽良宋亚军郭兆彪王津王红霞翟俊辉杨瑞馥
- 关键词：融合PCR基因标记WESTERNBLOT
- 基于DNA芯片的细菌基因表达谱技术的建立与评价被引量：3
- 2006年
- 目的建立和优化基于全基因组DNA芯片的细菌基因表达谱技术,并用实时定量RT-PCR对此技术平台进行评价。方法提取并纯化鼠疫耶尔森菌总RNA,以六核苷酸随机引物(N6)和/或基因组特异引物(GDP)逆转录合成cDNA,用CY染料直接或间接标记后,与包括鼠疫耶尔森菌4005个ORF的全基因组芯片杂交,通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果,归一化后进行分析。结果用实时定量PCR技术验证。结果采用N6+GDP混合引物以间接法标记获得了较为理想的结果,表达谱技术与实时定量PCR技术所得结果高度相关,证明了此技术的可靠性和实验设计与数据分析的合理性。结论合理的设计和归一化的分析方法是基于DNA芯片的细菌基因表达谱分析成功的关键,该技术的建立为细菌功能基因组研究奠定了基础。
- 庞昕韩延平周冬生宋亚军张玲翟俊辉王津郭兆彪杨瑞馥
- 关键词：DNA芯片细菌基因表达谱
- 鼠疫疫苗的相关基础研究被引量：3
- 2007年
- 1 鼠疫菌比较转录组学研究
全基因组DNA芯片转录谱芯片在细菌转录调控网络的研究上存在着巨大的潜力，除了分析单个体外或体内条件转录谱获悉刺激元和调控元的信息外，更重要的是将多个条件的转录谱数据进行综合分析，结合生物信息学信息，推测全基因组范围内的转录调节包括操纵予和启动予结合位点的预测。
- 杨瑞馥
- 关键词：鼠疫转录组学DNA芯片疫苗调控网络全基因组
