国家自然科学基金(30801381)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金南方医科大学南方医院院长基金更多>>
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- shRNAmir慢病毒载体沉默鼻咽癌细胞中环氧合酶-2的表达被引量：5
- 2009年
- 目的构建基于miR-155结构的shRNAmir慢病毒表达载体,在鼻咽癌细胞中沉默COX-2基因的表达,探索全新的COX-2抑制方法。方法转染小干扰RNA(siRNA),筛选出沉默COX-2表达的RNA干扰序列,以该序列替换miR-155前体序列中的双链部分作为anti-COX-2 shRNAmir转录模板,构建pLVTHM/shRNAmir慢病毒质粒表达载体,利用293FT细胞包装pLVTHM/anti-COX-2shRNAmir慢病毒。感染鼻咽癌C666-1细胞后,通过流式分选,建立anti-COX-2 shRNAmir稳定表达,COX-2基因沉默的亚系。结果设计合成的anti-COX-2a siRNA能够使COX-2 mRNA表达下降90%以上,根据其序列构建的pLVTHM/shRNAmir质粒载体测序无误,pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒感染C666-1细胞后,分选出亚系C666-1经反复传代仍可保持COX-2基因沉默的表型。结论pLVTHM/shRNAmir慢病毒载体能够转录出基于miR-155结构的shRNAmir,沉默鼻咽癌细胞COX-2的表达,为探索更加高效安全的COX-2抑制剂奠定基础,也为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新手段。
- 李刚李湘平姜立鲁娟刘雄陈顺金
- 关键词：鼻咽肿瘤环氧合酶-2微小RNA
- shRNAmir慢病毒载体沉默环氧合酶-2对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响被引量：10
- 2011年
- 目的探讨COX-2基因沉默对鼻咽癌C666-1细胞放射敏感性的影响。方法以稳定沉默COX-2基因表达的鼻咽癌Anti-COX-2 C666-1细胞和对照细胞Anti-GL-2 C666-1为研究对象,采用克隆形成实验及曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数和放射增敏比;采用流式细胞仪检测辐射后细胞周期的变化;采用体内荷瘤裸鼠动物模型检测放疗后皮高下,放移射植增瘤敏的比生为长曲1.4线01,4并;C计O算X抑-2瘤沉率默。后结降果低了An辐ti-射CO诱X导-2的C6G662-/1M细期胞阻S滞F2、,D并0增、D加q值辐较射对后照荷组瘤均裸明鼠显的偏抑低瘤,α率/β。显结著增论COX-2基因稳定沉默后可改变鼻咽癌C666-1的放射生物学参数,并降低辐射引起的G2/M期阻滞,增大抑瘤率,能够起到放疗增敏的作用。
- 孙权权刘雄刘英王路彭新宇曾芳芳李刚袁亚维
- 关键词：鼻咽肿瘤环氧合酶-2放疗
- 重组腺相关病毒协同重组腺病毒增强目的基因表达的体内试验
- 2011年
- 目的研究重组腺相关病毒(rAAV)协同重组腺病毒(AdV)在体内增强目的基因表达的强度及时间变化。方法人EB病毒阳性鼻咽癌细胞株C666-1接种于裸鼠皮下,待肿瘤直径达到3 mm左右以rAAV-EGFP 1.5×1011v.g(病毒基因组数,vi-rus genome)、rAdV-EGFP 2.5×108pfu或其等量混合液采用瘤内注射,于注射后第5天、10天分别处死裸鼠,取注射点周围肿瘤组织以10%PBS福尔马林固定,用免疫组化方法检测GFP表达情况,在400×光学显微镜下计数具有代表性的10个视野下的阳性细胞比例及强度,采用SPSS10.0单项方差分析统计结果。结果免疫组化提示瘤内注射病毒后第5天rAAV组开始表达目的基因(1.70±0.48),rAdV组目的基因表达达到高峰(6.00±1.94),联合组表达量与AdV组基本一致(6.90±1.92);第10天rAdV组目的基因表达基本消失(2.00±0.67),rAAV组表达明显升高(8.00±1.15),联合组持续高表达(10.10±1.63),且较rAAV组有显著差异(P=0.001)。结论 rAAV协同rAdV能够显著提高目的基因的表达量,能够使目的基因表达迅速且维持较长时间,可相互弥补两种病毒的不足,是一种值得推荐的基因表达方式。
- 刘雄李刚李琦田文栋张威陈怀宏李湘平
- 关键词：重组腺相关病毒重组腺病毒鼻咽癌
