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河北省科学技术研究与发展计划项目(10276167): 作品数：9 被引量：40H指数：4; 相关作者：单保恩王玲王彬丁春艳连易水更多>>; 相关机构：河北医科大学第四医院中国人民解放军白求恩国际和平医院更多>>; 发文基金：河北省科学技术研究与发展计划项目河北省卫生厅医学科学研究重点课题更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

靶向p65基因的miRNA对人三阴性乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用被引量：2: 2012年; 背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌中预后较差的一个亚型,如何防治TNBC的快速生长成为近几年临床研究的热点之一。NF-κB信号通路在肿瘤发生、发展的各个环节中扮演重要角色,有望成为肿瘤基因治疗新的方向。本研究通过建立人TNBC裸鼠移植瘤模型,观察靶向沉默NF-κB p65亚基的微小RNA(microRNA,miRNA)治疗对TNBC裸鼠移植瘤生长及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:建立人TNBC细胞株MDA-MB-231裸鼠移植瘤动物模型,瘤旁注射p65miRNA质粒(p65miRNA组),同时以注射Neg-miRNA质粒和PBS作为Neg-miRNA对照组和空白对照组。监测肿瘤生长变化,测量肿瘤质量。流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测肿瘤细胞凋亡的变化。免疫组化法检测肿瘤组织中p65的表达。Western blot法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:经p65miRNA处理后,裸鼠肿瘤的生长受到明显抑制。FCM结果表明,p65miRNA组肿瘤细胞凋亡率为(31.08±3.52)%,明显高于Neg-miRNA组(5.76±1.02)%和空白对照组(4.29±0.86)%(P<0.05)。此外,p65miRNA组裸鼠肿瘤组织p65和Bcl-2的蛋白表达明显下调,Bax的蛋白表达显著上调。结论:p65miRNA能抑制人TNBC裸鼠皮下移植瘤的生长,且在体内可诱导肿瘤细胞凋亡。; 王玲单保恩曹玉李巧霞赵连梅周凯旋徐莹莹; 关键词：三阴性乳腺癌 MIRNA P65

靶向沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响被引量：12: 2011年; 目的利用miRNA靶向沉默p65基因,观察其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。方法以脂质体LipofectamineTM2000为载体,将针对特异靶点p65基因的miRNA转染入MDA-MB-231细胞。RT-PCR和Western blot法检测p65 mRNA和蛋白表达的变化;MTT法检测细胞增殖;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关因子表达的变化。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示,p65miRNA转染组p65 mRNA及蛋白表达量较对照组显著下降(P<0.05);MTT检测结果显示,沉默p65基因后,细胞出现了生长抑制现象;FCM检测结果发现,p65miRNA转染组细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。Western blot进一步检测发现,转染组细胞中caspase-3的前体蛋白条带变细,裂解片段条带加深;PARP蛋白出现裂解片段。结论 miRNA靶向沉默p65基因可抑制人乳腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,推测p65基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。; 王玲单保恩桑梅香连易水王彬丁春艳; 关键词：乳腺癌基因沉默 MIRNA P65

塞来昔布抑制人三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤的生长及其机制初探: 目的:探讨塞来昔布(celecoxib)对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)裸鼠体内IL-6、IL-8水平的影响。方法:人TNBC细胞MDA-MB-231接种于裸鼠背部...; 王玲单保恩曹娜娜刘莉; 关键词：三阴性乳腺癌塞来昔布

塞来昔布对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、侵袭及黏附性的影响被引量：15: 2011年; 背景与目的:三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)由于其高侵袭和高转移特性,是目前乳腺癌中预后最差的一种亚型。大量研究表明塞来昔布(celecoxib)具有很好的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤生长、减少肿瘤血管发生,防止肿瘤的早期转移。为了进一步明确塞来昔布与TNBC细胞侵袭活性之间的关系,本实验研究塞来昔布作用下人TNBC细胞MDA-MB-231黏附、迁移及体外侵袭能力的变化,并初步探讨其可能的机制。方法:以不同浓度的塞来昔布(0、40、80、120μmol/L)作用MDA-MB-231细胞24 h后,采用细胞基质黏附实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响;采用细胞划痕实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞平面迁移能力的影响;采用Transwell侵袭小室实验检测塞来昔布对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的影响;RT-PCR检测塞来昔布作用前后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-2和MMP-9 mRNA的表达情况。结果:经80、120μmol/L塞来昔布作用24 h后,MDA-MB-231细胞与基质的黏附能力分别为(50.2±7.3)%和(31.5±2.2)%,与对照组(96.8±10.9)%相比显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭小室实验结果显示,经80、120μmol/L塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞趋化运动明显减少,穿过人工基底膜的细胞较对照组显著降低(P<0.05)。划痕实验结果显示,经塞来昔布作用后MDA-MB-231细胞平面迁移到损伤区的细胞数明显减少(P<0.05)。RT-PCR结果显示,经塞来昔布作用MDA-MB-231细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:塞来昔布能显著地抑制MDA-MB-231细胞黏附、细胞体外的迁移和侵袭能力,该作用可能与抑制MMP-2和MMP-9 mRNA的表达有关。; 王玲单保恩张建彬; 关键词：塞来昔布三阴性乳腺癌 MDA-MB-231 基质金属蛋白酶

沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期的影响被引量：4: 2011年; 目的研究miRNA(microRNA)沉默p65基因后对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞周期分布的影响。方法用pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体构建p65 miRNA表达质粒,转染MDA-MB-231细胞,用RT-PCR检测转染前后各组细胞中p65 mRNA表达变化;凝胶电泳迁移率改变分析(elec-trophoretic mobility shift assay,EMSA)实验研究转染前后细胞中NF-κB结合活性的变化;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)观察转染前后细胞周期分布的变化;Western blot法检测转染前后细胞周期相关因子cyclinD1、CDK4、p21蛋白表达的变化。结果 p65 miRNA质粒明显下调MDA-MB-231细胞中p65 mRNA的表达水平,并显著抑制细胞中NF-κB的结合活性(P<0.05)。FCM结果显示,转染组细胞G0/G1期细胞比例显著增加,S、G2/M期细胞比例明显下降(P<0.05);Western blot分析结果显示,沉默p65基因后细胞中cyclinD1蛋白表达下调,p21蛋白表达增加。结论 p65 miRNA可以显著降低p65 mRNA的表达,诱导乳腺癌细胞发生G0/G1期阻滞,可能是通过降低cyclinD1蛋白,上调p21蛋白表达而实现的。; 王玲赵连梅张超单保恩; 关键词：乳腺癌 MIRNA P65 细胞周期

塞来昔布抑制人类三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究: 2011年; 目的探讨塞来昔布（celecoxib）对人类三阴性乳腺癌（TNBC）肿瘤生长及细胞凋亡的影响。方法32只裸鼠于背部皮下接种人类TNBC细胞株MDA-MB-231，随机分为空白对照组及低、中、高剂量塞来昔布组（25、50、100mg·kg^-1·d^-1）。实验结束后，留取移植瘤标本，观察用药前后裸鼠肿瘤体积的变化；流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡率；免疫组织化学法检测NF—κB p65和p50分子的表达；Western blot法检测凋亡相关分子Caspase-3、Survivin蛋白的表达。结果塞来昔布治疗组肿瘤体积较对照组均明显减小。中、高剂量塞来昔布治疗组凋亡率分别为（13．58±3．16）％、（21．91±4．75）％，与对照组的（3．15±1．73）％相比差异有统计学意义（t=6．736，12．151，均P〈0．05），塞来昔布低、中、高剂量组p65表达阳性率分别为79．3％、46．7％、23．9％，与对照组（89．7％）相比差异有统计学意义（χ^2=3．312，10．785，15．900，均P〈0．05）。Western blot结果显示，塞来昔布治疗后肿瘤组织中Caspase-3蛋白出现了裂解片段，并且随药物浓度增加，裂解片段表达量逐渐增加。Survivin蛋白随药物浓度增加表达逐渐下调。结论塞来昔布可以诱导TNBC裸鼠移植瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长，其抗肿瘤作用机制可能部分与抑制p65分子以及下调Survivin蛋白表达有关。; 王玲单保恩刘丽宏李杰王彬; 关键词：塞来昔布乳腺肿瘤 NF-ΚB

塞来昔布抑制人三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤的生长及其机制初探: 目的:探讨塞来昔布(celecoxib)对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)裸鼠体内IL-6、IL-8水平的影响。方法:人TNBC细胞MDA-MB-231接种于裸鼠背部...; 王玲单保恩曹娜娜刘莉; 关键词：三阴性乳腺癌塞来昔布; 文献传递

P65基因对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭的影响被引量：1: 2011年; 目的:观察miRNA靶向沉默P65基因对人三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)MDA-MB-231细胞体外黏附和侵袭的影响及其可能机制。方法:设计3对针对P65基因的特异性miRNA(P65miRNA-1、P65miRNA-2和P65miRNA-3),转染MDA-MB-231细胞,Western blotting检测P65蛋白的表达,筛选沉默效果最好的miRNA进行后续实验。体外黏附实验和Transwell小室实验检测P65miRNA转染前后MDA-MB-231细胞的黏附和侵袭。RT-PCR检测MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9 mRNA的表达水平,明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞中MMP-2、MMP-9的酶活性。结果:成功构建重组质粒P65miRNA-1、P65miRNA-2和P65miRNA-3,前两者转染MDA-MB-231细胞后抑制P65蛋白表达80%以上。P65miRNA-1和P65miRNA-2转染对MDA-MB-231细胞的黏附无明显影响(P>0.05),但显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭(0.371±0.039、0.309±0.046 vs 0.698±0.065,P<0.05)。P65miRNA-1和P65miRNA-2转染沉默P65表达后,MDA-MB-231细胞MMP-2 mRNA(0.281±0.018、0.478±0.023 vs 1.056±0.072、1.128±0.059,P<0.05)和MMP-9 mRNA表达(0.193±0.013、0.371±0.035 vs 1.206±0.069、1.089±0.057,P<0.05)及其活性均显著下调。结论:miRNA靶向沉默P65的表达能抑制人TNBC MDA-MB-231细胞的体外侵袭,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。; 王玲单保恩桑梅香连易水丁春艳周欣亮; 关键词：三阴性乳腺癌 P65基因 MMP-2 MMP-9

塞来昔布联合p65miRNA抑制人乳腺癌移植瘤的生长被引量：1: 2012年; 目的探讨下调核因子NF-κB p65亚基的表达联合塞来昔布对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的协同抑制效应及其机制。方法建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,随机将裸鼠分为6组,control组、Neg-miRNA组、p65miRNA组、塞来昔布组、塞来昔布+Neg-miRNA组、塞来昔布+p65miRNA组。观察治疗前后裸鼠的一般状态、肿瘤体积和瘤重,计算平均抑瘤率。免疫组化法检测p65miRNA干扰后肿瘤组织中p65蛋白的表达。RT-PCR、Western印迹法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、金属基质蛋白酶(MMP-2)基因mRNA及蛋白表达的变化。结果塞来昔布组、p65miRNA组和塞来昔布+p65miRNA组肿瘤生长受到明显抑制,抑瘤率分别为43.23%、40.72%及61.69%。p65miRNA组较对照组p65蛋白表达明显减少。塞来昔布组、p65miRNA组和塞来昔布+p65miRNA组VEGF、MMP-2 mRNA及蛋白表达受到不同程度地抑制。结论塞来昔布及p65miRNA均具有明显的抗肿瘤作用,联合应用时具有一定的协同作用,可显著抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长,并可显著下调VEGF、MMP-2的表达。; 王玲单保恩张海谱王彬; 关键词：乳腺癌塞来昔布 NF-ΚBP65 MIRNA

核转录因子NF-κB/RelA的磷酸化、乙酰化和甲基化修饰与活性调控被引量：9: 2012年; RelA是NF-κB家族的重要成员。它通过对靶基因的调节,参与细胞的增殖与转化、凋亡、炎症以及免疫应答等重要的生命活动,同时这些功能受到磷酸化、乙酰化、甲基化等多种翻译后修饰的调控。本文就RelA的结构、功能及其活性调控做一综述,希望为人们认识RelA的网络调控机制提供新的认识。; 王玲单保恩刘丽宏; 关键词：RELA 翻译后修饰活性调控

河北省科学技术研究与发展计划项目(10276167)

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