湛江市科技攻关计划项目(2006C03002)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：遵义医学院广东医学院东莞市石龙人民医院更多>>
- 发文基金：湛江市科技攻关计划项目更多>>
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- 不同培养基上空肠弯曲菌生长特性及外膜蛋白表达差异的初步研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨不同培养基对空肠弯曲菌(CJ)的生物学特性和外膜蛋白表达的影响。方法采用改良布氏、改良布氏血、改良卵黄等3种培养基培养CJ,48h后进行菌落观察、菌体观察、动力学试验、生物化学检验、间接荧光检测等初步确定生物学特性,比较3种培养基上CJ生长特性的差别。采用0.2mol/L、pH2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽提CJ外膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,灰度扫描观察比较不同培养基上CJ的28000～31000外膜蛋白表达差异。结果改良卵黄培养基上CJ的生长特性典型,并且其菌体形态较另外两种培养基粗壮,繁殖速度更为快速,改良卵黄培养基来源的CJ的28000～31000外膜蛋白的表达较改良布氏血培养基丰富。结论改良卵黄培养基培养CJ是一种生长特性典型、28000-31000外膜蛋白表达丰富的培养基,该培养基的选择和使用将为该类蛋白的CJ亚单位疫苗大规模制备、CJ的流行病学检验、食品安全卫生检验检疫奠定重要基础。
- 冯胜军吴丽丹孙万邦肖政米娜刘仿陈群
- 关键词：空肠弯曲菌培养基外膜蛋白生物学特征
- 空肠弯曲菌在两种培养基上外膜蛋白中的表达及其体液免疫应答比较
- 2009年
- 目的探讨不同培养基来源的空肠弯曲菌28～31kD外膜蛋白免疫小鼠后的体液免疫应答效果。方法将66只BALB/c小鼠分别随机分为11组,每组6只,采用布氏血培养基、改良卵黄培养基培养来源的空肠弯曲菌甘氨酸提取28～31kD外膜蛋白以不同剂量疫苗组(50、100、200μg/只,加入0.2mL福氏完全佐剂),分别在0、7、14、21和28d,通过背部皮下+腹部皮下多点注射免疫小鼠;空白组、对照组分别采用0.4mLNS、0.4mL福氏完全佐剂。在末次免疫后10d(即第38天),分别应用双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价,采用ELISA技术分别检测小鼠血清和肠液中的特异性抗体IgG、IgA、分泌型IgA(sIgA)的水平。结果末次免疫后10d后,两种培养基来源的各免疫组中,双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价分别达到1∶4～1∶16和1∶320～1∶1280,间接ELISA法检测两种培养基来源血清、肠液中IgG、IgA、sIgA的水平与空白组、对照组差异均有显著性(P<0.05);两种培养基来源的同剂量组的疫苗之间IgG、IgA、sIgA的水平差异没有显著性(P>0.05);空白组与对照组差异无显著性(P>0.05)。结论改良卵黄培养基来源的空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31kD外膜蛋白能够诱导BALB/c小鼠较好的体液免疫应答和高水平的肠液sIgA抗体,与改良布氏血培养基相同,该培养基的选择和使用将为CJ亚单位疫苗、CJ检验、CJ食品卫生检疫的深入研究奠定重要的实验依据。
- 冯胜军吴丽丹孙万邦肖政米娜刘仿陈群陈军剑
- 关键词：空肠弯曲菌培养基外膜蛋白抗体体液免疫
- 不同培养基条件来源空肠弯曲菌外膜蛋白纯化及其表达差异
- 2010年
- 目的探讨不同培养基培养条件下空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)Mr28000～31000外膜蛋白的纯化方案及表达差异。方法分别采用改良布氏血琼脂培养基(以下简称Bull’s)、改良卵黄培养基(以下简称Yolk)培养CJ,比较两者的生长特征。制备CJ全菌抗血清。0.2mol/L、pH2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽取CJ外膜蛋白,Sephadex G-75层析法纯化其中的Mr28000～31000蛋白。SDS-PAGE技术检测Mr28000～31000外膜蛋白表达情况和含量差异,Western-blotting检测该类蛋白的抗原性。结果卵黄培养基培养的细菌生长更典型,SephadexG-75层析能够稳定可靠地纯化CJ细菌Mr28000～31000外膜蛋白,卵黄培养基培养来源的CJ的Mr28000～31000表达量占酸提取物的70%,大于改良布氏血琼脂培养基培养来源的表达量48%,两种培养基来源的CJ的Mr28000～31000蛋白成分均与CJ全菌兔抗血清发生免疫反应。结论不同培养基来源CJ的Mr28000～31000外膜蛋白均能被SphadexG-75分子筛纯化,该类蛋白能够在改良卵黄培养基上更高效表达,不同培养基来源的该类蛋白均具有良好的抗原性,该培养基的使用和该类蛋白有效提取为CJ感染的血清学特异性诊断及疫苗的研制奠定基础。
- 冯胜军孙万邦肖政姚新生米娜刘仿
- 关键词：空肠弯曲菌培养基外膜蛋白纯化
- 空肠弯曲菌外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答被引量：2
- 2010年
- 目的探讨空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答效果。方法将30只BALB/c小鼠随机分为5组,每组6只,采用空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白以不同剂量疫苗组,分别在第0、7、14、21、28天,通过背部及腹部皮下多点注射免疫小鼠;空白组、对照组分别采用0.4 mL生理盐水(NS)、0.4 mL福氏完全佐剂。在末次免疫10 d(即第38天),分别应用双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价,ELISA检测血清和肠液中的特异性IgG、IgA、。结果末次免疫10 d后,各疫苗组中,双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价分别达到1∶4～1∶16和1∶320～1∶1 280,ELISA法检测血清、肠液中IgG、IgA、的水平与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);空白组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白佐剂疫苗能够诱导BALB/c小鼠较好的体液免疫应答和高水平的肠液抗体,将为空肠弯曲菌亚单位疫苗的深入研究奠定重要的实验依据。
- 冯胜军吴丽丹肖政孙万邦米娜刘仿陈群陈军剑
- 关键词：空肠弯曲菌外膜蛋白抗体黏膜免疫
