国家自然科学基金(31360617)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 酵母双杂交筛选与胞内劳森菌LI0902互作宿主蛋白被引量：2
- 2020年
- 为了鉴定胞内劳森菌(Lawsonia intercellularis,LI)外膜蛋白LI0902在细菌感染中的作用,本试验以胞内劳森菌疫苗DNA为模板,设计特异性引物进行PCR扩增,并成功构建诱饵表达载体pGBKT7-LI0902。将通过菌落PCR和测序验证的质粒转化酵母菌株Y2H Gold后,发现LI0902能在酵母细胞中正确表达,对酵母细胞无毒性,且无自激活活性。将含有pGBKT7-LI0902的酵母菌株Y2H Gold与猪肠上皮细胞系IPEC-1 cDNA文库菌株Y187进行杂交,筛选、验证、测序后得到3个与LI0902相互作用的宿主蛋白。本试验研究了胞内劳森菌与猪肠上皮细胞相互作用,为揭示增生性肠炎的致病机理提供了线索。
- 张兰桥赖崇德戴益民张庆华钟其旺赖芬菊
- 关键词：酵母双杂交
- 猪增生性肠炎套式PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5
- 2014年
- 本试验旨在建立检测猪增生性肠炎(porcine proliferative enteropathy,PPE)的套式PCR方法,为临床快速鉴别诊断和防控该病提供病原学依据。根据GenBank上已发表的的劳森氏胞内菌(Lawsonia intracellularis,LI)的基因组序列(登录号:AM180252)设计2对特异性引物,以疑似PPE病猪粪便中纯化的DNA为模板,建立了套式PCR方法,并对PCR产物进行序列测定,所扩增的序列与GenBank上登录的劳森氏胞内菌相应序列的同源性在99%以上。应用本试验建立的套式PCR方法对疑似PPE病猪的粪便进行检测,结果表明,本方法具有快速、方便和敏感度高等优点,可用于PPE的临床检测。
- 张文波戴益民蒋新华胡杨徐昌满陈松昌邓舜洲
- 关键词：猪增生性肠炎套式PCR
- 酿酒酵母荧光定位报告菌株的开发
- 2020年
- 【目的】为了给外源蛋白在酿酒酵母细胞中的定位提供参考,构建酿酒酵母荧光定位报告菌株。【方法】运用染色体同源重组的方法,将突变的、已进行酵母表达优化的红色荧光蛋白RedStar分别整合到12个酵母细胞器标记蛋白的C端,与之进行融合表达,用特异性引物对每一个酵母荧光定位报告菌株进行PCR扩增和测序验证,用激光共聚焦显微镜进行荧光检测,对线粒体和细胞核进行特异性染料染色,用EGFP标记沙门氏菌已知定位蛋白SipA,与构建的相应荧光定位报告菌株进行共定位。【结果】构建的酿酒酵母荧光定位报告菌株可分别标示酵母细胞的肌动蛋白、晚期胞内体、细胞核、核周质、纺锤体、线粒体、过氧化物酶体、脂滴、初级内吞体、次级内吞体、高尔基体顺面及高尔基体反面。PCR扩增及测序验证、荧光检测、染料与相应报告菌株的共定位、已知定位蛋白SipA与相应报告菌株的共定位均提示报告菌株构建成功。【结论】这些报告菌株的构建,为日后在酵母中观察细胞器动态变化,以及未知蛋白在酵母中的定位提供了基础性工具。
- 杨丽娟赖芬菊谢宁清戴益民
- 关键词：蛋白定位共定位
- 一例致病性大肠杆菌的分离鉴定及诊治被引量：4
- 2018年
- 2016年3月,江西新余某猪场10～20日龄哺乳仔猪出现了严重下痢。为了获得最佳的预防和治疗方案,笔者现场采集了5头病猪的5份小肠内容物样品,接种于麦康凯及伊红美兰培养基进行细菌分离纯化。经培养特性试验和生化试验鉴定出4株大肠杆菌。对这4株大肠杆菌进行16S rRNA基因扩增及测序分析,所得序列在Gen Bank中进行同源性搜索并构建分子系统树,鉴定均为致感染性腹泻的大肠杆菌。药敏纸片法试验表明这4株大肠杆菌耐药性很强,对大多数抗生素不敏感,但对头孢噻肟、头孢曲松敏感或中度敏感。以这两者作为治疗药物,猪场病情得到有效控制。
- 戴益民廖财智赖芬菊
- 关键词：仔猪腹泻大肠杆菌耐药性
