国家自然科学基金(30671041)
- 作品数：11 被引量：31H指数：3
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- 大鼠大脑皮层细胞条件培养液促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的研究
- 2008年
- 目的建立大脑皮层细胞条件培养液促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的方法。方法原代培养并鉴定骨髓间充质干细胞;用条件培养基、无血清培养基、DMEM分别诱导骨髓间充质干细胞6h和24h;用免疫荧光染色的方法鉴定由骨髓间充质干细胞分化而来的神经样细胞。结果骨髓间充质干细胞表达CD106、CD90、CD29和CD44标记物,不表达CD71、CD45和CD34,回收得到的条件培养基可以诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞,这些神经样细胞的免疫荧光染色呈β微管蛋白Ⅲ、胶质原纤维酸性蛋白、巢蛋白阳性,且阳性比例明显高于实验对照组,差异有高度统计学意义(P<0.001)。结论大脑皮层细胞条件培养液能促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化。
- 周俊松董运海钱燕翔徐路尧宋琳宋雪慧辛莲张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经样细胞细胞分化
- 神经元在丝素蛋白材料上的生长发育被引量：1
- 2009年
- 目的研究神经元在丝素蛋白材料上的生长发育,为神经干细胞结合丝素蛋白材料用于临床移植修复神经系统损伤提供实验依据。方法从新生大鼠脑室下区(SVZ)分离细胞,培养在柞蚕、家蚕两种丝素蛋白溶液制成的薄膜材料上,分别选取各时间段的细胞进行β-Ⅲ-tubulin特异性免疫荧光染色,并统计不同时间段神经元在丝素材料上的成活率及复杂度。结果神经元在柞蚕丝素薄膜上的成活率和复杂度明显比家蚕丝素薄膜高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论柞蚕、家蚕丝素薄膜支持神经元的生长,具有良好的生物相容性;柞蚕丝素薄膜比家蚕丝素薄膜更适合神经元的生长。
- 辛莲宋雪慧董运海李明忠张焕相
- 关键词：神经元
- 无血清培养条件下神经元前体细胞的增殖
- 2008年
- 目的:建立新生大鼠大脑皮层细胞原代培养体系并进行神经元前体细胞的增殖研究。方法:原代混合培养新生大鼠大脑皮层细胞;混合培养体系用血清培养基培养6d后换用无血清培养基培养,免疫细胞化学显色鉴定此培养过程中不同时间点的细胞类型,并在不同时间段加入BrdU,用于分析神经元前体细胞的增殖状况。结果:换用无血清培养基培养后,出现明显的细胞分层现象;神经元及其前体细胞的比例逐渐上升,而神经干细胞和星形胶质细胞的比例缓慢下降;增殖细胞的比例在0～24h、24～48h、48～72h时间段里逐渐增加,而在72～96h、96～120h时间段里逐渐减少。结论:新生大鼠大脑皮层细胞混合培养体系在无血清培养条件下促进神经元前体细胞的增殖。
- 周俊松董运海宋雪慧辛莲张焕相
- 关键词：神经元前体细胞神经元无血清培养基增殖
- 小鼠胚胎干细胞在丝素材料上向神经细胞分化的研究被引量：1
- 2008年
- 以小鼠胚胎干细胞(ES)为种子细胞,使用改良的4-/4+RA方案,诱导小鼠ES细胞在丝素材料上向神经细胞分化,探讨丝素材料对其生长、黏附、分化等情况的影响。将小鼠ES细胞悬浮培养4 d得到的拟胚体(EBs)分别接种到经丝素膜和明胶包被的培养皿上进行诱导,比较不同材料上EBs的贴壁率及向神经元分化的比率。结果表明EBs在明胶和柞蚕丝素蛋白膜(TSF)上贴壁较快,平均贴壁率为90.3%和84.4%,在桑蚕丝素蛋白膜(SF)上贴壁较慢,贴壁率低,仅为38.5%,同时三者神经元的分化比率均能达到40%以上,无明显差异。以上实验显示TSF有望成为小鼠ES细胞向神经细胞分化的支架材料。
- 鲍柳君叶荣韩甫张军超张焕相
- 关键词：胚胎干细胞丝素神经细胞
- 星形胶质细胞与神经元在蚕丝素纳米纤维上的联合培养被引量：1
- 2009年
- 目的：研究胶质细胞结合丝素纳米纤维对神经元生长发育的作用，为神经干细胞结合丝素蛋白材料用于临床移植修复神经系统损伤提供实验依据。方法：从新生大鼠脑室下区分离细胞与取自混合培养得来的星形胶质细胞共培养在柞蚕、家蚕2种丝素蛋白溶液制成的材料上，分别选取各时间段的细胞进行β-Ⅲ-tubulin特异性免疫荧光显色，并统计不同时间段神经元在丝素材料上的复杂度。结果：神经元与星形胶质细胞共培养在柞蚕丝素无纺布上（TSF）的复杂度明显比家蚕丝素无纺布（SF）高。结论：柞蚕、家蚕丝素无纺布结合星形胶质细胞支持神经元的生长，具有良好的生物相容性；胶质细胞结合柞蚕丝素无纺布比家蚕丝素无纺布更适合神经元的生长发育。
- 王敏张峰苏军包普花刘孟宇李明忠左宝齐张焕相
- 关键词：神经元胶质细胞生物相容性
- 不同方法诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化被引量：2
- 2009年
- 目的观察两种方法体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向神经样细胞分化的效果。方法自大鼠股骨中提取骨髓细胞,利用Percoll法进行BMSC分离、纯化及鉴定。取第5代细胞,应用两种方法进行诱导。方法一(BHA组):200μmol/L丁羟基茴香醚(BHA)、10 ng/ml碱性成纤维生长因子(bFGF)和2%二甲基亚砜(DMSO)联合诱导细胞;方法二(RA组):全反式维甲酸(RA)和β-巯基乙醇(β-ME)联合诱导细胞。同时设正常培养的BMSC为对照组。实验过程中对细胞进行形态观察和免疫荧光染色检测神经细胞标志物。结果BHA组诱导5 h,细胞即发生明显的形态改变,出现胞体回缩、突触伸展等神经干细胞的形态特征,而RA组诱导1周未出现神经干细胞形态。免疫荧光染色显示两种方法诱导的细胞均能表达神经前体细胞标志物nestin、β-tubulin和成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE),不表达星形胶质细胞标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)。BHA组与RA组表达NSE的阳性率分别为80.05%和71.61%,两者相比,差异无统计学意义(P>0.05);对照组不表达NSE,诱导组与对照组比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论两种方法均能诱导骨髓间充质干细胞定向分化为表达神经细胞标志物的神经样细胞。
- 徐路尧宋琳钱燕翔王敏包普花张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化神经样细胞全反式维甲酸
- Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系被引量：2
- 2009年
- 目的探讨Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系。方法取新生大鼠大脑皮层,原代培养获得混合细胞培养体系,在含10%血清的培养基中培养6 d细胞汇合后更换无血清培养基继续培养。实验中设计4个时间点,用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化的变化,免疫荧光染色技术鉴定细胞种类以及Rac1蛋白在细胞内的表达,通过Western blot检测Rac1蛋白的表达变化。结果建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合细胞培养体系,此体系底层主要是由Ⅰ型胶质细胞组成的单层细胞,GFAP染色呈阳性;在单层细胞上面有一些小圆形强折光性神经前体细胞生长,βⅢ-Tubulin染色呈阳性。更换无血清培养基后上层神经前体细胞大量增殖,βⅢ-Tubulin、Rac1染色呈阳性。Western blot定量分析结果显示,神经前体细胞增殖过程中Rac1蛋白表达上升,而分化过程中Rac1蛋白的表达下降。结论Rac1蛋白表达与神经前体细胞的增殖分化过程密切相关,可能参与了神经前体细胞的增殖分化过程。
- 宋雪慧辛莲周俊松董运海张焕相
- 关键词：神经前体细胞增殖分化
- 成神经分化的骨髓间充质干细胞向C6细胞条件培养基和SDF-1α的趋化性迁移研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨成神经分化的骨髓间充质干细胞(BM-SCs)向C6细胞条件培养基和SDF-1α的趋化性迁移。方法:采用碱性成纤维生长因子(bFGF)、丁羟基茴香醚(BHA)、二甲基亚砜(DMSO)联合诱导剂对BMSCs进行诱导分化,通过免疫荧光染色检测诱导的细胞表达神经前体细胞标志物Nes-tin、β-III-Tubulin和NSE的情况。运用Dunn chamber研究成神经分化的BMSCs向胶质瘤和SDF-1α的迁移。结果:BM-SCs能诱导分化成神经元样细胞,而对照组的BMSCs形态无变化。Dunn chamber分析显示,C6细胞条件培养基组和SDF-1α组诱导细胞的迁移速率和迁移效率明显高于对照组,表明C6细胞条件培养基和SDF-1α对BMSCs具有趋化作用,单个细胞迁移轨迹实验也证实了这一结果。此外,分化不同状态的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF-1α的趋化程度也不同。结论:BMSCs的定向迁移与分化状态密切相关。
- 包普花王敏苏军刘孟宇张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化趋化性
- 再生丝素蛋白纳米纤维网支持和引导神经胶质细胞的生长与迁移被引量：18
- 2009年
- 除了自体和异体移植外,利用生物相容性材料辅助中枢神经系统损伤后的修复成为最具开发潜力的方法之一。以来源于家蚕和柞蚕的再生丝素蛋白纳米纤维网作为星形胶质细胞的生长基质,研究星形胶质细胞在其上的粘附、生长、增殖和迁移等生命活动。结果显示星形胶质细胞在两种材料上表现出很高的相容性,星形胶质细胞在丝素蛋白纳米纤维网上具有正常的粘附、增殖和迁移等行为。更重要的是,通过实时显微摄像跟踪细胞的生长与迁移行为,发现星形胶质细胞的生长与迁移表现出很强的丝素蛋白纳米纤维依赖性,星形胶质细胞在丝素纤维上生长铺展并且沿着纤维进行迁移,纤维的走向决定着细胞的迁移轨迹。实验证明,丝素蛋白纳米纤维不仅能够支持星形胶质细胞的生长,而且对星形胶质细胞的迁移运动还有引导作用,这些特点使得再生丝素蛋白纳米纤维网成为极具开发潜力的神经组织工程替代物。
- 董运海张锋左宝齐周俊松宋雪慧辛莲张焕相
- 关键词：星形胶质细胞再生丝素生物相容性
- SDF-1α对不同分化状态下NPCs迁移能力的影响被引量：4
- 2009年
- 神经干细胞(neural progenitor/stem cells,NPCs)的迁移在神经系统发育及损伤修复中起着非常关键的作用,然而其内在作用机制及影响因素尚不明了。在本研究中,我们从新生远交群(Sprague Dawley,SD)大鼠的脑室下区(the subventricular zone,SVZ)中纯化并培养NPCs,使用含有1%胎牛血清的H-DMEM对其进行诱导分化,通过延时动态视频(time-lapsevideo)对处于不同分化状态的NPCs的迁移能力进行分析。结果表明,相对于NPCs分化末期(24-48h),基质细胞衍生因子1á(stromal cell-derived factor1α,SDF-1á)可显著提高其分化早期(0-24h)的迁移距离。与之相比,在NPCs分化的整个过程(0-48h)中,通过分析单个细胞迁移角度的变化发现SDF-1α显著促进并维持单个细胞的迁移持续性。这一现象说明NPCs的迁移特征与其不同分化状态之间有着非常紧密的内在联系。
- 苏军王敏包普花王丹刘孟宇张焕相
- 关键词：神经干细胞迁移分化基质细胞衍生因子1Α脑室下区
