北京市自然科学基金(7042017)
- 作品数：4 被引量：69H指数：2
- 相关作者：吴建新李媛媛常会波马斐斐欧阳胜荣更多>>
- 相关机构：首都儿科研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- TGF-β和IGF-1信号通路调控肾母细胞瘤细胞增殖机制探讨被引量：7
- 2017年
- 目的肾母细胞瘤是一种高发的儿童实体瘤,发病率占儿童恶性肿瘤8%~10%,多发生于<5岁儿童,有研究表明某些信号通路可调控其增殖过程。本研究探讨TGF-β和IGF-1信号通路是否共同参与调控肾母细胞瘤细胞的增殖过程。方法采用siRNA转染实验将TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA转至肾母细胞瘤细胞株G401,以转染不同siRNA分为TGFBR1-siRNA组和IGF1R-siRNA组,siRNA无关序列(non-siRNA)转染组作为对照组,每组设6个复孔。MTS方法检测TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA对细胞增殖率的影响,蛋白质印迹法检测TGF-β信号通路TGFBR1及下游蛋白p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表达情况;蛋白质印迹法检测IGF-1信号通路IGF1R及下游蛋白p-AKT蛋白表达情况。ELISA法检测细胞上清中FGF9蛋白表达。结果抑制TGFBR1和IGF1R72和96h后,细胞的增殖率受到抑制,对照组增殖率设为100%。与其相比,转染TGFBR1-siRNA 72h后的实验组和对照组的增殖率分别为(80±14)%和(100±7)%,实验组低于对照组,P=0.034;转染IGF1R-siRNA 72h后实验组和对照组的增值率分别为(85±21)%和(100±7)%,实验组低于对照组,P=0.028。转染TGFBR1-siRNA 96h后的实验组和对照组的增殖率分别为(81±13)%和(100±11)%,实验组低于对照组,P=0.021;转染IGF1R-siRNA 96h后实验组和对照组的增殖率分别为(82±17)%和(100±11)%,实验组低于对照组,P=0.038。抑制TGFBR1后,与non-siRNA组相比,下游蛋白FGF-9、p-ERK、SMAD2/3和p-AKT明显受到抑制。TGFBR1-siRNA转染72h后,实验组细胞上清中FGF9蛋白表达量显著下降,实验组为(533.85±54.64)ρg/mL,对照组为(587.34±46.83)ρg/mL,P=0.041;96h后实验组FGF9蛋白表达量仍显著低于对照组,实验组为(495.03±59.26)ρg/mL,对照组为(605.34±49.28)ρg/mL,P=0.018。TGFBR1-siRNA转染48h后,p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表达量出现降低;72h后,p-ERK和SMAD2/3蛋白表达量仍降低。与non-siRNA转染对照组相比,IGF1R-siRNA转染72和96h后,p-AKT蛋白表达量出现降低。�
- 刘卓何峰李媛媛欧阳胜荣曹丁丁常会波马斐斐吴建新
- 关键词：肾母细胞瘤信号通路IGF1R肿瘤增殖
- 半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶荧光定量测定及保存条件对酶活性的影响
- 2010年
- 目的探讨荧光定量测定导致经典型半乳糖血症的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(GALT)的方法,以及不同保存条件对酶活性的影响。方法选取来本院就诊的半乳糖血症患儿及其父母为研究对象,随机选取健康体检儿童作为对照,采集肝素抗凝血,用定量荧光法测定GALT活性,并观察不同保存温度和不同时间的GALT活性的变化。结果本方法表明酶反应1hr时可以分辨出完全失活型和杂合子,诊断出75%的半乳糖血症患儿,并检测出4例杂合子。同时发现随着时间的推移GALT活性在下降,室温影响最大。结论本方法简单,准确,快捷,费用低廉适合于半乳糖血症的诊断和杂合子的检出,但要注意高温和保存时间对样品的影响。本法也适合于新生儿大规模筛查和孕妇杂合子的检出。
- 常会波王立文朱彦丽李媛媛刘哲伟张霆吴建新
- TGFBR1和FGF9蛋白参与miRNA-140-5p调控肾母细胞瘤细胞的增殖过程被引量：2
- 2016年
- 目的本研究拟探讨miRNA-140-5p在肾母细胞瘤增殖过程中的调控作用以及TGF—BR1和FGF9蛋白参与此过程的作用机制。方法采用miRNA芯片技术分析肾母细胞瘤患儿肿瘤组织和瘤旁正常组织的miRNA表达谱，结合生物信息学预测和文献报道，选取表达差异显著的miRNA-140-5p作为研究对象，扩大样本进行Real-time PCR验证；MTS方法检测miRNA-140—5p对细胞增殖率的影响；双荧光素酶实验验证miRNA-140—5p的直接下游靶基因；Western-blot法检测TGF—BR1蛋白表达；ELISA法检测细胞上清中FGF9蛋白表达。结果发现与瘤旁组织相比，miRNA-140—5p在肾母细胞瘤组织和瘤旁正常组织的相对表达量分别为1．69±0．83和6．37±3．25，肾母细胞瘤组miRNA-140-5p的表达量明显降低（P〈0．05）。在肾母细胞瘤细胞株G401及SK-NEP-1中，发现过表达miRNA-140-5p可有效降低G401及SK-NEP-1的增殖率，将miRNA无关序列（miRNA-con）转染组细胞增殖率设为100％，与其相比，转染miRNA-140-5p的G401细胞组的增殖率为（87±15）％比（100±20）％，SK-NEP-1细胞组为（91±12）％比（100±9）％，组间比较，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。利用生物信息学软件对miRNA-140—5p直接下游靶基因进行预测，结合肾母细胞瘤相关基因，选择TGFBR1和FGF9基因为miRNA-140—5p的直接下游靶基因；通过双荧光素酶实验证实miRNA-140—5p可直接靶向TGFBR1和FGF9基因。将miRNA-con转染组TGFBR1蛋白表达量设为1，与其相比，过表达miRNA-140-5p的G401及SK-NEP-1细胞内，TGFBR1蛋白表达量降低（G401细胞降为0．67；SK-NEP-1细胞降为0.87）（P〈0．05）。与miRNA-con转染对照组相比，G401及SK-NEP-1细胞上清中FGF9蛋白表达量下降，G401组为（478．66±66．32）pg／ml比（535．64±78．53）pg／ml，SK-NEP-1细胞组为（486．57±71．01）pg／ml比（601．26±77．68）pg／ml，组间比较，差异均有统计学�
- 刘卓李媛媛欧阳胜荣何峰吴建新常会波马斐斐
- 关键词：肾母细胞瘤基因表达调控增殖
- DNA甲基化——肿瘤产生的一种表观遗传学机制被引量：60
- 2006年
- 在人类基因组中,DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它与肿瘤的发生关系密切。抑癌基因和DNA修复基因的高甲基化、重复序列DNA的低甲基化、某些基因的印记丢失与多种肿瘤的发生有关。目前研究发现,基因组中DNA甲基化的水平不仅受DNA甲基化转移酶(DNMT)的影响,还与组蛋白甲基化、饮食与环境、RNA干扰等多种因素有关。DNA甲基化在基因转录过程中扮有重要角色,并与组蛋白修饰、染色质构型重塑共同参与转录调控。
- 张丽丽吴建新
- 关键词：DNA甲基化肿瘤抑癌基因转录调控
