国家自然科学基金(30910103915)
- 作品数：23 被引量：75H指数：6
- 相关作者：陈德喜张玉林徐树莹乔录新吴昊更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院首都医科大学广元市精神卫生中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于同尾酶技术构建CCL3L1基因串联重组质粒的方法被引量：4
- 2012年
- 目的:利用同尾酶技术将CCL3L1基因重复连续插入pcDNA6.2-GW/miR载体,构建含有CCL3L1基因串联体的重组质粒,实现小片段CCL3L1有效延长。方法:PCR扩增CCL3L1基因并在引物的两端设有同尾酶BamHI和BglII限制性内切酶位点,纯化PCR产物插入pMD18-T载体,阳性克隆命名为pMD18T-CCL3L1。BamHI和BglII双酶切pMD18T-CCL3L1和pcDNA6.2-GW/miR载体后将第一个CCL3L1片段插入pcDNA6.2-GW/miR载体命名为pcDNA6.2-CCL3L1-1。由于载体本身在BglII位点后带有XhoI酶切位点利用BamHI和XhoI切割pcDNA6.2-CCL3L1-1回收CCL3L1片段,BglII和XhoI切割pcDNA6.2-CCL3L1-1回收大片段做载体重组形成含有两个连续CCL3L1片段的质粒命名为pcDNA6.2-CCL3L1-2,重复此步骤可得到含有N个CCL3L1基因串联体的重组质粒pcDNA6.2-CCL3L1-X。结果:经酶切和测序证实成功构建含有4个CCL3L1基因串联体的重组质粒pcDNA6.2-CCL3L1-4,并同时产生含有1个和2个CCL3L1基因串联体的重组质粒。结论:利用同尾酶技术可以快速有效地构建CCL3L1基因串联重组质粒,实现目的片段的无限扩大,为小片段基因表达的研究奠定基础。
- 乔录新张世杰石英陈德喜
- 关键词：同尾酶CCL3L1
- HIV-1感染者中枢神经系统的病毒学特征研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨HIV-1感染者中枢神经系统(CNS)的病毒学特征。方法通过克隆测序分析病毒亚型,观察CNS中HIV-1变异性和离散率;依据V3环11/25法则并结合10例有偿献血HIV-1感染者尸检脑组织标本免疫荧光试验分析中枢神经HIV-1复合受体的使用。结果有偿献血人群感染的HIV-1显示B和B′亚型特征,脑脊液(CSF)和外周血序列有嵌合现象;CSF C2-V5区序列变异性明显低于外周血,两者的离散率差异无统计学意义;依据11/25法则分析V3环序列可见中枢神经HIV-1大多数使用CCR5复合受体。结论 CNS HIV-1病毒变异性明显小于外周血;CNS HIV-1具有CCR5嗜性。
- 丁渭张玉林乔录新徐树莹宋凤丽陈德喜
- 关键词：中枢神经系统人类免疫缺陷病毒1型病毒学特征
- 氧化损伤在HIV相关神经认知损害中的作用被引量：5
- 2012年
- 目的研究由活性氧诱导的DNA氧化损伤在感染了艾滋病毒的患者中枢神经系统组织中的积累。方法利用感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV-1)的患者的尸检脑组织的额叶皮质来分析HIV-1亚型,采用免疫荧光染色、定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和PCR克隆测序分析脑细胞中核和线粒体DNA损伤。结果中枢神经系统感染HIV会导致大脑细胞中核和线粒体DNA基因组的损伤。对HIV相关的神经认知功能障碍患者的尸检皮质组织进行检测可以发现有高水平的核和线粒体DNA 8-氧鸟嘌呤(8-hydroxyguanine,8-oxoG)损伤。在HIV相关的神经认知障碍的一个亚型脑组织中有逐渐增加的线粒体DNA突变和缺失,这与病情已经得到控制的情况大为不同。结论在HIV相关的神经认知障碍患者的中枢神经系统中高水平的氧化损伤对HIV引发神经细胞和胶质细胞的神经免疫和凋亡发挥了重要作用。
- 丁渭张玉林乔录新宋凤丽徐树莹陈德喜
- 关键词：活性氧人类免疫缺陷病毒线粒体线粒体DNA
- 中国HIV-1感染人群神经认知损害初步筛查被引量：16
- 2012年
- 目的初步调查中国人类免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)感染者神经认知损害情况。方法通过国际HIV痴呆量表和神经心理评估,结合症状评分和临床相关资料对我国HIV-1感染人群HIV相关神经认知障碍(HIV-1associated neurocognitive disorders,HAND)患病情况进行初步调查。结果①我国HIV-1感染人群HAND患病率为37%;②认知障碍是主要症状,其次是行为异常;③脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)病毒载量与外周血病毒载量密切相关,但与HAND无关,同样HAND与CD4计数也无关。结论结果显示中国HIV-1感染人群HAND患病率约为37%,以认知障碍症状为主;CSF与外周血病毒载量呈一致性变化,但是CD4计数和病毒载量不能作为诊断和预测HAND病情的指标,上述结果需要进一步的大样本调查予以证实。
- 宋凤丽张玉林乔录新丁渭徐树莹张彤吴昊陈德喜
- 关键词：患病率
- 人免疫缺陷病毒相关痴呆症诊断策略被引量：7
- 2011年
- 痴呆症并非神经科所独有，在HIV感染者也会发生不同程度的认知功能障碍和HIV相关痴呆症（HAD），目前其发病机制还不完全清楚。在针对HIV的高效抗逆转录病毒治疗（HAART）之前，其患病率约占进展期伴CD4^＋T淋巴细胞减低患者的20％～30％；开展HAART之后，由于患者生存期明显延长，所以总的认知功能障碍的患病率大幅度升高至37％左右。值得注意的是，重度认知损害病人数相对减少，而轻度和无症状认知功能障碍病人数明显增加。因此，早期正确诊断该病显得尤为重要。
- 张王林张彤吴昊陈德喜
- 关键词：人免疫缺陷病毒痴呆症高效抗逆转录病毒治疗CD4^+T淋巴细胞HIV感染者HAART
- 艾滋病毒神经损伤机制研究最新进展被引量：1
- 2010年
- 随着HAART的广泛使用,艾滋病患者无症状生存期及寿命明显延长.这使得其慢性神经系统并发症,尤其是HIV相关痴呆症（HAD）,显得尤为突出.有关HIV神经损伤的确切机制目前还没有完全阐明,因而了解本领域国际前沿对于研究HIV神经损伤机制以及HAD的防治具有非常重要的意义.此文就炎症细胞、gp120、Tat、谷氨酸的作用和在HAD中的作用机制作了综述.
- 乔录新张玉林陈德喜
- 关键词：艾滋病凋亡
- 人类免疫缺陷病毒相关痴呆症的治疗
- 2012年
- 人类免疫缺陷病毒相关痴呆症（HAD）已成为HIV感染者重要的慢性并发症之一，严重威胁到病人的生命和生活质量。我们在详细叙述了该病的系统诊断^[1]的基础上，以下根据美国神经协会有关该病的诊治指南，结合最新国际研究成果重点阐述HAD的治疗。
一、治疗原则
HAD的治疗原则是：增加脑脊液药物浓度，
- 张玉林宋凤丽吴昊陈德喜
- 关键词：痴呆症慢性并发症诊治指南药物浓度
- 一例HIV-1急性感染者奠基病毒的gp160基因序列特征及其假病毒构建
- 2014年
- 目的观察急性感染期艾滋病病毒I型（HIV-1）gp160的全长基因序列及感染特征。方法从一例处于Feibig I期HIV-1感染者血浆中提取RNA,扩增gp160全长基因并测序,分析其生物学信息;将gp160全长基因与pcDNA3.1His/V5真核表达载体连接,构建Env-pcDNA3.1真核表达质粒,与骨架质粒pNL4-3.Luc.R-E-共转染293细胞,包装出假病毒。用包装的假病毒感染ghost细胞,测定感染细胞的荧光素酶活性（RLU）,鉴定假病毒的感染活性。结果成功扩增出gp160全长基因,嗜性预测为CCR5,N-糖基化位点数与标准株HXB2相同,但gp120糖基化程度更高,氨基酸变异主要集中在V1-V5区。假病毒感染试验显示,RLU值达到7log。结论获得了处于急性感染期的HIV-1gp160基因序列和高感染活性的假病毒。
- 刘志英李甜寇卜心徐萌徐树莹陆小凡焦艳梅张彤陈德喜吴昊
- 关键词：艾滋病病毒I型假病毒
- 单核细胞病毒库在HIV相关痴呆症发病机制中的作用被引量：1
- 2010年
- 尽管联合抗病毒治疗,HIV仍能在淋巴细胞和单核细胞中持续存在.而且,即使体外研究证实HIV病毒颗粒nef、gp120和tat具有神经毒性,HIV相关痴呆症（HAD）的发生主要还是由于单核/巨噬细胞及与其相关的胶质细胞的间接免疫应答.因此,外周病毒库的循环单核细胞中的HIV在HAD发病机制中发挥着重要作用.针对循环单核细胞中HIV的导向治疗不仅有利于消灭外周病毒库,也有利于HAD及其他HIV并发症的防治.此文就单核细胞病毒库与HAD发病之间的关系进行了综述.
- 张玉林乔录新陈德喜
- 关键词：单核细胞病毒库艾滋病
- 采用集合转化的方法构建HIV-1蛋白酶区和反转录酶区T-A克隆载体
- 2014年
- DNA重组技术是将两个或多个单独的DNA片段连接起来产生一个能在特定宿主中自主复制的DNA分子。重组DNA分子最简单的构建方法是将基因片段克隆到质粒或噬菌体等克隆载体上。常用的质粒载体有pBR322、pUC和pGEM等。这些载体含有不同的多克隆位点，适于将含有不同酶切位点的DNA片段连接起来[1]。
- 徐萌徐树莹袁霖陈德喜
- 关键词：克隆载体反转录酶DNA重组技术DNA分子DNA片段
