国家自然科学基金(81300655)
- 作品数：9 被引量：15H指数：3
- 相关作者：李洪波吴东海于晓英雷凌华李娜更多>>
- 相关机构：怀化学院中国科学院广州生物医药与健康研究院丽水学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省重点学科建设项目湖南省教育厅优秀青年基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组嗜热乳糖酶在毕赤酵母中的表达、纯化与活性分析被引量：1
- 2018年
- 为获得耐高温的重组乳糖酶,PCR扩增激烈热球菌(Pyrococcus furious)乳糖酶基因、构建毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/Lac并转化毕赤酵母X-33菌株。重组酵母转化子经甲醇诱导,重组嗜热乳糖酶实现了分泌表达并经蛋白印迹验证。纯化前上清液中乳糖酶总活力高达125 U/mL,经镍亲合纯化得重组酶,SDS-PAGE显示其纯度在95%以上,比活力1 800 U/mg,该酶最适温度在105℃左右且热稳定性好,具有很强的水解乳糖能力。
- 李洪波罗海燕张树琴吴东海
- 关键词：毕赤酵母分泌表达纯化
- C1q/TNFα相关蛋白-2球状功能区的表达、纯化及活性分析被引量：1
- 2014年
- 目的利用大肠杆菌表达可溶性的hCTRP2球状功能区蛋白。方法重组表达载体转化大肠杆菌BL21-codonplus(DE3)菌株、IPTG诱导表达,并利用镍亲合纯化和分子筛纯化。结果 hCTRP2球状功能区蛋白实现了在大肠杆菌中的高效表达和纯化,重组蛋白在细胞和动物水平上都具有生物活性。结论利用大肠杆菌表达系统高效制备了具有生物活性的hCTRP2球状功能区蛋白。
- 李洪波胡兴李娜吴东海
- 关键词：C1Q重组蛋白
- C1q/TNFα相关蛋白-1功能区的表达、纯化及生物活性分析被引量：1
- 2015年
- 目的:利用大肠杆菌表达可溶性hCTRP1球状功能区蛋白并分析其生物活性。方法:重组质粒转化大肠杆菌BL21-codonplus(DE3)菌株、IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达并纯化。结果:hCTRP1球状区蛋白实现在大肠杆菌中的高水平表达,利用镍亲合纯化和分子筛纯化到重组蛋白,重组蛋白在细胞和动物水平上都具有生物活性。结论:利用大肠杆菌表达系统高效制备了具有生物活性的hCTRP1球状功能区蛋白。
- 李洪波李娜吴东海
- 关键词：重组蛋白
- 利用气质联用技术研究不同方法提取的黄心夜合鲜叶挥发油成分被引量：1
- 2018年
- 比较不同提取方法对黄心夜合鲜叶挥发油成分的提取效果,为黄心夜合挥发油提取方法的选择与药材的采集提供科学依据。分别以水蒸汽蒸馏法、CO_2超临界萃取、静态顶空法提取黄心夜合鲜叶挥发油,利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其化学成分进行分析。静态顶空萃取法获取的成分种类最多,主要成分有3-蒈烯(5.15%)、2-甲基2-丁烯-1-醇(5.26%)、2-乙基-1-甲基-3-丙基-环丁烷(5.03%)、甲氧基环庚烷(3.24%)、柠檬烯(3.27%)、别香橙烯(2.96%)、2-十一烯-4-醇(2.85%)、环己基甲基硅烷(2.69%)、1,2,3-三甲基-,(1α,2β,3α)-环己烷(2.76%)、1-丁烯基三甲基硅烷(2.73%)、角鲨烯(2.57%)、三甲基[4-(1,1,3,3,-四甲基丁基)苯基]硅烷(2.35%)等;CO_2超临界萃取法次之,主要成分有亚油酸(20.04%)、三十六烷(10.49%)、棕榈酸(7.22%)、叶绿醇(5.32%)、5,7,8-三甲基-二氢香豆素(5.67%)、α-芹子烯(2.46%)等,水蒸汽蒸馏法提取的成分种类最少,主要成分有β-罗勒烯(14.58%)、β-蒎烯(10.71%)、β-反式-罗勒烯(7.75%)、香芹烯(6.53%)、[1R-(1α,3α,4β)]-4-乙烯基-α,α,4-三甲基-3-(1-异丙烯基)-环己甲醇(5.91%)、α-蒎烯(4.75%)、γ-依兰油烯(4.47%)、大根香叶烯(4.47%)、蓝桉醇(3.98%)等。3种提取方法没有共同的挥发油成分,只是水蒸汽蒸馏法和CO_2超临界萃取法有3种萜烯类化合物、3种醇类化合物相同。相对而言水蒸汽蒸馏法更适于提取分析常温下黄心夜合鲜叶释放的挥发油成分。
- 杨承清雷凌华雷凌华夏更寿朱强根于晓英
- 关键词：黄心夜合水蒸气蒸馏CO2超临界萃取静态顶空
- 黄心夜合不同组织挥发油成分分析被引量：3
- 2019年
- 为探讨同一时间内黄心夜合Michelia martinii鲜叶、鲜嫩枝和鲜花的挥发油成分,利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对水蒸气蒸馏法提取的黄心夜合鲜叶、鲜嫩枝和鲜花挥发油成分进行了分析。结果表明:去掉峰值0.49以下的峰,从黄心夜合鲜叶、鲜嫩枝、鲜花分别检测出21种、 31种和25种成分, 3种不同组织样品共有2,4-二异丙烯基-1-甲基环己烷、γ-依兰油烯、 4(14),11-桉叶二烯、γ-榄香烯等4种成分,而鲜叶与鲜嫩枝都释放共同的12种挥发性成分,鲜嫩枝与鲜花都释放共同的13种挥发性成分,鲜叶与鲜花都释放共同的4种挥发性成分。黄心夜合鲜叶、鲜嫩枝和鲜花的挥发油成分在提取材料选择、挥发性成分利用与养生保健群落的营建等方面具有一定的应用参考。
- 雷凌华朱强根夏更寿肖悠于晓英
- 关键词：黄心夜合挥发性成分水蒸气蒸馏
- 重组毕赤酵母高密度发酵表达活性hCTRP2的研究被引量：3
- 2013年
- 目的利用毕赤酵母,高密度发酵表达重组hCTRP2蛋白。方法采用高密度发酵表达hCTRP2蛋白并利用镍亲合层析进行纯化,在细胞与动物水平测定其生物活性。结果每升发酵液上清可分泌560 mg总蛋白,利用镍亲合层析从100 ml发酵液上清中纯化得到10.4 mg的rhCTRP2蛋白,rhCTRP2蛋白在细胞及动物水平都表现出活性。结论利用酵母高密度发酵实现了活性hCTRP2蛋白的高效表达和纯化。
- 李洪波吴东海
- 关键词：C1Q毕赤酵母高密度发酵
- 人C1q/TNFα相关蛋白-6的表达、纯化及生物活性分析被引量：1
- 2015年
- 目的利用大肠杆菌表达可溶性h CTRP6蛋白并分析其活性。方法重组载体转化大肠杆菌表达菌株、IPTG诱导表达、纯化后测定活性。结果 Trx-h CTRP6蛋白在大肠杆菌中高效表达,经镍亲合纯化和分子筛纯化,Trx-h CTRP6在细胞和动物水平上都有生物活性。结论利用大肠杆菌表达系统高效制备了具有生物活性的Trx-h CTRP6蛋白。
- 李洪波高学飞李娜吴东海
- 关键词：重组蛋白蛋白印迹
- 黄心夜合不同季节鲜叶挥发性成分研究被引量：5
- 2017年
- 利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术,对黄心夜合(Michelia martinii Levl.)春、夏、秋、冬4季不同鲜叶挥发油成分及其含量进行了分析研究。结果显示,去掉峰值0.49以下的色谱峰从4个季节黄心夜合鲜叶样品中共鉴定出65种挥发油成分,其中,春、夏、秋、冬4个季节鲜叶分别检测出26种、29种、31种和32种成分,4个季节鲜叶样品共有成分为三环烯、α-蒎烯、莰烯、香桧烯、β-蒎烯等14种。黄心夜合4个季节鲜叶及干燥花蕾中的共有挥发性成分有α-蒎烯、莰烯、β-蒎烯、芳樟醇4种。黄心夜合鲜叶挥发油成分中的α-蒎烯、β-蒎烯、β-月桂烯、β-芳樟醇、芳樟醇、月桂烯含量高,且春季鲜叶挥发油得率最高,最适合挥发油提取。鲜叶具有保健功能,适于四季园林养生配置。本研究黄心夜合4个季节鲜叶挥发油成分差异及季节性变化,可为黄心夜合挥发油提取的季节选择及养生保健群落的营建提供科学依据和指导。
- 雷凌华李胜华曾军英于晓英
- 关键词：黄心夜合挥发性成分水蒸气蒸馏鲜叶
- 人C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-1高特异性抗体的制备
- 2014年
- 目的制备人补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白1(hCTRP1)的特异性抗体。方法合成了hCTRP1的C端抗原肽并免疫新西兰大白兔,利用亲合纯化色谱柱对抗体进行了纯化。结果间接ELISA测定表明,抗血清效价达1∶64 000,Western印迹及ELISA验证表明纯化抗体具有很高的特异性。结论人工合成的hCTRP1抗原肽免疫新西兰大白兔,制备了高效价的抗血清,并纯化制备了hCTRP1特性抗体。
- 李洪波吴东海
- 关键词：抗原肽多克隆抗体
