国家教育部博士点基金(20050159023)
- 作品数：16 被引量：26H指数：3
- 相关作者：李丰梁彬程大也李彦姝李晓东更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院沈阳体育学院更多>>
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- p21活化蛋白激酶2在卵母细胞成熟中的作用被引量：1
- 2007年
- 研究p21活化蛋白激酶2(p21-activated kinase2,PAK2)在爪蟾卵母细胞成熟中的作用。利用特异性抑制PAK2活性的PAK2-N端(PAK2-Nterminal,PAK2-NT)片段显微注射爪蟾卵母细胞。荧光显微镜下比较PAK2-NTmRNA注射组和未注射对照组卵母细胞胚泡破裂发生。共聚焦显微镜下,时间延迟摄影法观察两组卵母细胞胞质分裂过程中肌动蛋白和纺锤体的变化。与未注射PAK2-N端mRNA的对照组卵母细胞相比,注射组卵母细胞胚泡破裂发生无异常,但未见胞质分裂发生和极体形成。结果提示PAK2可能参与爪蟾卵母细胞胞质分裂过程。
- 程大也梁彬李丰
- 关键词：卵母细胞胞质分裂
- 用镭射激光捕获技术研究LEC鼠p53基因突变和肝癌发生的关系被引量：2
- 2007年
- 目的:研究p53基因突变与原发性肝癌发生发展的关系。方法:利用LEC鼠(long evan cin-namon)作为肝癌的动物模型。选取15、37、101周的LEC鼠17、15和12只,正常对照SD大鼠15只,取出肝脏组织进行切片。切片一部分用于谷胱甘肽S-转移酶(GST-P)免疫组化染色,另一部分利用镭射激光捕获技术(laser capture microdissection,LCM)定位切割,进行p53基因外显子5、6/7、8突变的分析。结果:37周龄LEC鼠和101周龄LEC鼠GST-P阳性率高于对照组(P<0.05),15周龄LEC鼠GST-P阳性率与对照组相比差异无统计学意义,P>0.05。p53基因在GST-P表达阳性肝炎组有3例突变(3/12),GST-P表达阳性肝癌组有12例发生突变(12/17),肝癌组显著高于肝炎组,P<0.05。结论:p53突变发生在肝癌形成的早期阶段,随着发展过程,突变率明显增高。GST-P虽然特异性不强,但是不失为一种灵敏的判断肝损伤的指标。
- 梁彬程大也梁红解方李丰
- 关键词：多态现象单链构象基因突变
- 人PAK1重组蛋白质的表达及在人胃癌BGC-823细胞内定位
- 2007年
- 为检测人PAK1在原核细胞中的表达情况及在真核细胞中的定位,利用RT-PCR技术获得PAK1目的基因,构建GST融合蛋白原核表达载体pGEX-5X-1/PAK1,IPTG诱导后进行SDS-PAGE及Western印迹检测,并用体外激酶实验测定其生物学活性;同时,构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的真核表达载体pEGFP/PAK1,利用脂质体法转入人胃癌BGC-823细胞系中,在共焦激光扫描显微镜下观察癌细胞中绿色荧光蛋白的表达。结果表明,pGEX-5X-1/PAK1载体能在大肠杆菌BL-21中正确表达GST-PAK1融合蛋白,大小约为94kDa,具有生物活性;PAK1绿色荧光蛋白定位于细胞浆。上述研究为进一步探索PAK1的生物学特性及信号转导通路打下了基础。
- 王桂玲周颖赵大林李家滨刘芙蓉李丰
- 关键词：PAK1蛋白表达转染绿色荧光蛋白
- hLMO4基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位被引量：4
- 2009年
- 目的构建hLMO4真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法提取人乳腺癌MCF-7细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hLMO4全长编码基因,亚克隆至pCDNA3.1-myc-hisA表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到胃癌细胞BGC823中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-LMO4在乳腺癌MCF-7细胞内定位。结果hLMO4全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-hisA中,酶切鉴定片段为500bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为23KD。pEGFP-LMO4在乳腺癌MCF-7细胞内定位以细胞核为主,在细胞浆内少量表达。结论成功的构建了hLMO4全长基因真核表达载体,pEGFP-LMO4蛋白定位于乳腺癌细胞质和核内。
- 李彦姝王春玉苏楠张红艳李丹妮李丰
- 关键词：乳腺癌WESTERNBLOT
- 应用共聚焦显微镜观察卵母细胞成熟过程中Cdc42活性变化被引量：1
- 2007年
- Cdc42属于GTP酶家族成员,参与细胞骨架调节和细胞发育,但在细胞分裂过程中的作用所知甚少。以爪蟾卵母细胞为模型,GFP-wGBD(Cdc42活性探针)和罗丹明-微管蛋白作为荧光标记物,采用共聚焦显微镜观察卵母细胞分裂过程中Cdc42活性变化。结果显示卵母细胞中,极体释放数分钟前,纺锤体上方和周边可见微弱的Cdc42活性,2 min^4 min内,活性逐渐增强,随后收缩环形成,胞质分裂发生。胞质分裂完成后,Cdc42活性消失。结果提示Cdc42活性可能与爪蟾卵母细胞胞质分裂有关。
- 程大也梁彬李丰
- 关键词：CDC42胞质分裂卵母细胞共聚焦显微镜
- Cdc42在小鼠卵母细胞发育中与纺锤体定位的关系被引量：1
- 2008年
- 目的研究Cdc42与小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体定位的关系。方法以小鼠卵母细胞为模型,利用特异性抑制Cdc42活性的Cdc42T17N(GDP结合形式Cdc42),显微注射小鼠卵母细胞。共聚焦显微镜下观察Cdc42T17N mRNA注射组和空质粒注射对照组小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体的定位,对结果进行统计分析。结果与对照组小鼠卵母细胞相比,Cdc42T17N mRNA注射组小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体的定位分布有所改变。Cdc42T17N mRNA注射组的小鼠卵母细胞,纺锤体一端与卵母细胞皮质层接触百分率下降,与卵母细胞皮质层平行接触百分率上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Cdc42可能参与小鼠卵母细胞发育过程中纺锤体的定位。
- 梁彬程大也
- 关键词：CDC42卵母细胞纺锤体
- 爪蟾p21活化激酶2参与卵母细胞胞质分裂过程不依赖于Cdc42
- 2007年
- 研究p21活化激酶2(p21-activated kinase2,PAK2)在卵母细胞成熟过程中的作用.以爪蟾卵母细胞为模型,分别向爪蟾卵母细胞显微注射PAK2-N端(PAK2-N-terminal,PAK2-NT)和PAK2-N端突变体(PAK2-N-terminal mutation,PAK2-NTm)mRNA,荧光显微镜下观察胚泡破裂发生.采用共聚焦显微镜,时间延迟摄影法观察正常卵母细胞、PAK2-NTmRNA注射组和PAK2-NTm mRNA注射组卵母细胞胞质分裂、极体形成及与Cdc42活性的关系.结果表明,PAK2-NTmRNA和PAK2-NTm mRNA注射组的卵母细胞与正常卵母细胞胚泡破裂发生相似,但PAK2-NTmRNA和PAK2-NTm mRNA注射组未见胞质分裂和极体形成.结果提示,PAK2参与卵母细胞胞质分裂和极体形成可能不依赖于Cdc42的调节过程.
- 程大也梁彬李丰
- 关键词：P21活化激酶爪蟾卵母细胞胞质分裂CDC42
- GFP-hERα重组质粒的构建及蛋白表达和细胞内定位的研究
- 2011年
- 目的构建hERα真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法以pcDNA3.1-flag-hERα重组质粒(Dr.Muyan M馈赠)为模板,PCR扩增hERα全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体。将构建的重组质粒测序并转染到乳腺癌细胞MCF-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-hERα在MCF-7细胞内定位。结果 hERα全长基因序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1800bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为95KD,pEGFP-hERα在乳腺癌细胞MCF-7细胞内定位于细胞核内。结论成功的构建了hERα全长基因真核表达载体pEGFP-hERα,融合蛋白定位于乳腺癌细胞核内。
- 刘芙蓉李彦姝张红艳李丰
- 关键词：WESTERNBLOT
- 一种高效而经济获得长片段基因突变体的方法被引量：8
- 2006年
- 重组PCR方法的发展为体外突变技术提供了更快捷、准确的方法.通过改进引物设计和PCR保真性等方法,应用重叠延伸PCR的原理成功地实现了对BA基因的定点突变,并构建了其含有m1,m2,m3和m4的突变体.实验证明通过这种改进方法可以有效地进行长片段基因的突变,并且这种方法与其他方法相比具有简便、快捷、经济、高效的特点.
- 刘彤李晓东王桂玲李家滨李丰
- 关键词：定点突变
- Cdc42和球形肌动蛋白在卵母细胞胞质分裂中的定位分析被引量：2
- 2007年
- 研究活性Cdc42与球形肌动蛋白(G-actin)在爪蟾卵母细胞胞质分裂中的定位关系。分别用GFP-wGBDmRNA与罗丹明-594-微管蛋白、Alexa-488-球形肌动蛋白与罗丹明-594-微管蛋白、GFP-wGBDmRNA与Alexa-594-球形肌动蛋白共同显微注射爪蟾卵母细胞。利用共聚焦显微镜,时间延迟摄影方法,分别观察活体卵母细胞中活性Cdc42、球形肌动蛋白在胞质分裂过程中的定位,以及活性Cdc42与球形肌动蛋白在胞质分裂中的定位关系。在卵母细胞胞质分裂中,活性Cdc42与球形肌动蛋白存在空间上共定位现象,并且在时相上具有一致性。结果提示活性Cdc42和球形肌动蛋白在卵母细胞胞质分裂过程中密切相关。
- 程大也梁彬李丰
- 关键词：CDC42卵母细胞胞质分裂
