江苏省“135”工程重点医学人才基金(2002-45)
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
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- 脂氧素A4通过上调Smac表达诱导肾间质成纤维细胞凋亡被引量：9
- 2004年
- 目的验证脂氧素A4(LXA4)是否诱导肾间质成纤维细胞凋亡,并探讨其作用机制是否与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caapase)第2个线粒体激活因子(Smac)表达上调有关。方法将大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)培养于含5%胎牛血清的培养液中,用较高浓度的LXA4刺激后,应用吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色观察细胞凋亡形态,应用碘化丙锭/Annexin双染色及流式细胞仪计数凋亡的细胞,应用对硝基苯胺法测定caspase-3酶活性。应用Western印迹方法测定Smac表达,对NRK-49F细胞用脂质体转染Smac反义寡核苷酸,再观察LXA4处理后Smac表达、细胞凋亡的改变。结果LXA4在100nmol/L、1μmol/L的高浓度时,分别引起9.83%、33.82%的NRK-49F细胞发生凋亡、caspase-3活性升高、Smac表达上调。应用Smac反义寡核苷酸处理细胞后,可抑制LXA4所致的Smac表达与细胞凋亡。结论较高浓度的LXA4能够引起大鼠肾间质成纤维细胞发生凋亡,其机制与上调Smac表达有关。
- 吴升华陆超董玲姜新猷
- 关键词：肾间质成纤维细胞上调脂氧素溴化乙锭脂质体转染
- 结缔组织生长因子促进肾小球系膜细胞合成RANTES部分依赖于p42/44 MAPK被引量：2
- 2005年
- 检测结缔组织生长因子(CTGF)是否诱导肾小球系膜细胞分泌正常T细胞表达分泌的活化调节因子(RANTES),并探讨其作用机制。应用CTGF刺激静息的培养大鼠肾小球系膜细胞,在刺激后不同时间点应用RT-PCR方法测定RANTES的mRNA表达,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定上清液中RANTES。应用趋化试验测定上清液对单核细胞(THP-1)的趋化作用。应用Westernblot测定CTGF对丝裂原激活的蛋白激酶(p42/44MAPK)磷酸化的作用。应用磷酸化p42/44MAPK抑制剂PD98059预处理,观察CTGF对上清液中RANTES分泌的影响。结果显示,应用CTGF(100ng/ml)刺激后,系膜细胞的RANTES的mRNA表达上升,上清液中RANTES分泌量增加。RANTES抗体可部分阻止上清液对单核细胞的趋化作用。CTGF诱导p42/p44MAPK磷酸化,而PD98059可抑制这一作用,并部分抑制CTGF诱导的上清液中RANTES的分泌。研究表明,CTGF可引起系膜细胞分泌RANTES,其作用机制部分依赖于p42/p44MAPK的磷酸化。
- 吴升华陆超董玲周国平
- 关键词：结缔组织生长因子RANTESMAPK
- 脂氧素A_4抑制结缔组织生长因子诱导的系膜细胞产生Fractalkine被引量：1
- 2005年
- 目的:检测结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)是否诱导肾小球系膜细胞产生Fractalkine;检测脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)是否调节CTGF对合成Fractalkine的作用,并探讨其作用机制。方法:应用CTGF刺激培养的大鼠肾小球系膜细胞,应用逆转录多聚酶链反应测定FractalkinemRNA表达,应用酶联免疫吸附试验测定上清液中Fractalkine蛋白表达。应用趋化试验测定上清液对单核细胞(THP-1)的趋化作用。应用Westernblot测定分裂原激活的蛋白激酶(p42/44mitogen-activatedproteinkinase,p42/44MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3-K)、蛋白激酶B(proteinkinaseB,PKB)。应用凝胶电泳迁移率试验测定核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)。结果:CTGF刺激使系膜细胞FractalkinemRNA表达与分泌量增加,增加磷酸化p42/44MAPK、P-PI3-K、P-PKB及NF-κB表达。P-p42/44MAPK抑制剂PD98059抑制CTGF诱导的p42/p44MAPK磷酸化与Fractalkine分泌。PI3-K抑制剂LY294002抑制CTGF诱导的PI3-K、PKB、NF-κB活化与Fractalkine分泌。NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidinedithio-carbamate,PDTC)抑制CTGF诱导的NF-κB活化与Fractalkine分泌。LXA4呈剂量依赖性地抑制CTGF所致的上述变化。结论:LXA4可抑制CTGF引起的系膜细胞分泌Fractalkine,其机制依赖于抑制p42/p44MAPK、PI3-K/PKB的磷酸化与NF-κB活化。
- 吴升华陆超董玲周国平姜新猷
- 关键词：脂氧素A4结缔组织生长因子FRACTALKINEMAPK磷酸化NF-ΚB活化
- MyD88／PI3-K／NF-κB途径介导脂氧素A_4拮抗LPS诱导大鼠内皮细胞的白细胞介素合成被引量：1
- 2006年
- 目的研究脂氧素A4(LXA4)对脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞合成白细胞介素(IL)- 1β、IL-6、IL-8的影响,并探讨其机制。方法对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),用LXA4预孵育,再加入LPS;或单用LPS刺激PMVEC。在孵育后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中的IL-1β、IL-6、IL-8蛋白表达;用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、IL-8的mRNA表达。应用Western blot法检测磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)、髓细胞分化因子88(MyD88)的表达。应用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)测定核因子-κB(MF-κB)和活化蛋白-1(AP-1)的DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8的蛋白合成与mRNA表达,抑制PI-3K的表达,抑制NF-κB和AP-1的DNA结合活性,但不影响LPS诱导的MyD88表达。结论LXA4通过下调PI3-K的表达和NF-κB、AP-1的DNA结合活性,拮抗LPS对PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8合成的诱导作用。
- 吴升华廖培元董玲
- 关键词：脂氧素白细胞介素内皮细胞
- 脂氧素A4抑制结缔组织生长因子诱导的系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白1被引量：4
- 2006年
- 脂氧素A4（LXA4）具有拮抗多种炎症介质、生长因子的作用，被称为炎症反应“刹车信号。结缔组织生长因子（CTGF）参与多种细胞的增殖、迁移和黏附，在肾脏纤维化的发病机制中占据重要地位。我们尚未检索到CTGF对趋化因子合成的调节作用及LXA4对CTGF作用的调节报道。我们检测CTGF对肾小球系膜细胞合成单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的调节作用，并测定LXA4对CTGF作用的调节，探讨这些作用的细胞内信号转导机制，报告如下。
- 吴升华陆超董玲周国平姜新猷
- 关键词：单核细胞趋化蛋白1结缔组织生长因子脂氧素A4肾脏纤维化
- NF-κB介导脂氧素A_4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成被引量：2
- 2005年
- 为研究脂氧素A4(LXA4)拮抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL)-1β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用不同浓度的LXA4预刺激,再加入TNF-α共同孵育;或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β、IL-6蛋白表达量;用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)测定核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性。结果发现,LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达,抑制NF-κB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-κB的DNA结合活性,拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。
- 吴升华陆超董玲
- 关键词：脂氧素白介素核因子-KB系膜
- 15-甲基-脂氧素A_4对大鼠系膜增殖性肾炎干预作用的研究被引量：3
- 2006年
- 目的已发现脂氧素A4（LXA4）可抑制肾小球系膜细胞的体外增殖，该研究旨在了解LXA4同系物15-甲基-LXA4是否抑制大鼠系膜增殖性肾炎的病理进展，并探讨其作用的信号转导分子机制。方法使用小鼠抗大鼠Thy1．1单克隆抗体静脉内1次性注射制备大鼠系膜增殖性肾炎。使用15-甲基-LXA4静脉内注射干预大鼠系膜增殖性肾炎。检测尿蛋白、肾小球白细胞浸润、系膜细胞增生评分、增殖性细胞核抗原（PCNA）表达。应用RT—PCR方法检测肾小球白介素（IL）-1β，IL-6的mRNA表达，应用放免法测定肾小球IL-1β，IL-6水平。应用Western Blot测定肾小球磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3-K）、Akt1与p27^kip1表达，应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）测定肾小球核因子-κB（NF—κB）及信号转导及转录活化子-3（STAT3）活性。结果大鼠系膜增殖性肾炎发病后第1～4天，肾小球白细胞计数、IL-1β、IL-6的mRNA与蛋白表达、NF—κB活性升高；第4天尿蛋白、肾小球系膜细胞增生评分、PCNA表达、肾小球PI3-K、Akt1与STAT3活性升高，p27^kip1表达减低。应用15-甲基-LXA4干预，可减少肾炎大鼠尿蛋白、肾小球白细胞计数、系膜细胞增生评分、PCNA表达、IL-1β、IL-6的mRNA与蛋白表达（均P〈0．05），减低PI3-K、Akt1、NF—κB、STAT3活性，阻止p27^kip1表达减低。结论15-甲基-LXA4可有效地抑制大鼠系膜增殖性肾炎的尿蛋白、肾小球炎性反应，系膜细胞增殖，其机制与抑制PI3-K／Akt1／p27^kip1／cyclin途径、STAT3、NF—κB活性有关。
- 吴升华廖培元董玲姜新猷
- 关键词：脂氧素肾炎系膜细胞白介素核因子-ΚB
- 蛋白酪氨酸磷酸酶2/核因子-κB途径介导脂氧素A4拮抗系膜细胞白介素6的合成被引量：6
- 2005年
- 目的探讨脂氧素A4(LXA4)拮抗白介素(IL)1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成的作用,及其信号转导机制。方法LXA4预处理培养的大鼠肾小球系膜细胞,加入IL-1β共同孵育,或单用IL-1β刺激肾小球系膜细胞。应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中IL-6蛋白表达量。用RT-PCR法检测IL-6中mRNA表达量。用免疫印迹法检测含Src同源区2(SH2)蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP-2)的磷酸化水平。用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测核因子-κB(NF—κB)DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌及mRNA表达,拮抗IL-1β诱导的SHP-2磷酸化与NF—κB的活化。应用NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)可抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌与NF—κB活化。结论LXA4能够拮抗IL-1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成,其机制涉及SHP-2/NF—κB信号转导途径。
- 吴升华陆超董玲姜新猷
- 关键词：蛋白酪氨酸磷酸酶脂氧素A4拮抗白介素6二硫代氨基甲酸吡咯烷介导
