北京市自然科学基金(7042059)
- 作品数：6 被引量：42H指数：3
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- DNA载体途径的RNA干扰技术对前列腺癌细胞系ALVA-41端粒酶活性的抑制作用
- 2006年
- 目的:探讨DNA载体途径的RNA干扰技术抑制肿瘤细胞的作用和机制。方法:设计和构建由U6启动子驱动产生hTERT的siRNA表达质粒,转染至ALVA-41前列腺肿瘤细胞,以TRAP-ELISA方法观察细胞端粒酶活性,W estern-b lot检测端粒酶蛋白的表达,细胞记数法检测对细胞生长的影响。结果:构建的针对hTERT基因的U6表达质粒具有明显的干扰效果,受到特异hTERT-siRNA干扰的ALVA-41肿瘤细胞端粒酶表达下调,细胞生长受抑。结论:应用RNA干扰技术可阻止hTERT基因的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。
- 曾春林赵亚力高江平韩为东李琦
- 关键词：前列腺肿瘤端粒酶RNA
- 尿脱落细胞hTERT mRNA表达在早期膀胱癌无创诊断上的探索被引量：1
- 2008年
- 目的:通过检测尿脱落细胞的hTERT mRNA和端粒酶的活性,探讨建立膀胱癌早期诊断和术后检查的无创方法。方法:利用可提高灵敏度的巢式PCR技术,对尿脱落细胞中hTERT的mRNA进行RT-PCR检测,以TRAP方法加以验证。结果:28例膀胱癌患者尿脱落细胞hTERT的mRNA表达阳性率为93%(26/28)。20例泌尿系良性疾病组患者则为10%(2/20),TRAP方法有很好的一致性。结论:尿脱落细胞hTERT mRNA的检测敏感性高,特异性好,有望应用于膀胱癌的早期诊断和术后复发的无创检查。
- 赵亚力高江平马学斌伍志强司艺玲韩为东
- 关键词：端粒酶膀胱肿瘤细胞
- 小干扰RNA抑制LRP16基因表达限制了MCF-7乳腺癌细胞增殖被引量：29
- 2005年
- 雌激素雌二醇上调人乳腺癌细胞MCF 7中LRP16基因表达 ,该基因过表达促进MCF 7细胞增殖 .为进一步探讨LRP16基因不同表达水平对MCF 7细胞增殖的影响以及对雌激素的反应性增殖能力 ,采用针对LRP16基因特异的小干扰RNA策略 ,通过逆转录病毒介导及抗性筛选构建了LRP16基因被稳定抑制的 2个MCF 7细胞系 ,针对绿色荧光蛋白的干扰序列作为阴性对照 .Northern印迹实验检测了LRP16基因在各个细胞株中mNRA的水平 ,与对照组细胞比较 ,针对LRP16基因不同位置的 2个小干扰RNA可分别将该基因抑制 90 %和 6 0 % .细胞增殖试验结果显示 ,MCF 7细胞中LRP16基因表达抑制率越高 ,细胞增殖速率减慢越显著 (P <0 0 5 ) ;软琼脂集落形成试验结果显示 ,抑制LRP16基因在MCF 7细胞中表达 ,限制了细胞锚定非依赖性生长 ;细胞周期分析结果表明 ,LRP16基因抑表达使MCF 7细胞G1 S周期转换受抑 ;Western印迹结果表明 ,LRP16基因表达抑制的细胞中细胞周期蛋白E及细胞周期蛋白D1蛋白水平显著下调 ,但未检测到P5 3及Rb蛋白表达水平的影响 .雌二醇刺激的增殖实验结果显示 ,抑制LRP16基因表达没有消除MCF 7细胞的反应性增殖特征 .上述结果表明 ,LRP16基因表达量与MCF 7细胞增殖能力密切相关 ,抑制其表达可有效限制MCF 7细胞的增殖能力 ,提?
- 韩为东李琦赵亚力母义明李雪宋海静陆祖谦
- 关键词：LRP16小干扰RNAMCF-7
- A549肿瘤细胞中特异性hTERT-siRNA的干扰作用研究被引量：2
- 2004年
- 目的 研究hTERT特异的siRNA对肿瘤细胞端粒酶活性及细胞生长的抑制作用。方法 设计和构建由U6启动子驱动的产生特异hTERT的siRNA表达质粒 ,转染至A5 4 9肺肿瘤细胞 ,以TRAP ELISA方法观察细胞端粒酶活性 ,Westernblot检测端粒酶蛋白的表达 ,MTT法检测对细胞生长的影响。结果 构建的针对hTERT基因 74 5靶位点的U6表达质粒具有明显的干扰效果 ,受到特异hTERT siRNA干扰的A5 4 9肿瘤细胞端粒酶表达下调 ,细胞生长受抑。结论 应用RNA干扰技术可阻止hTERT基因的表达 ,有望成为肿瘤基因治疗新的研究方向。
- 赵亚力韩卫东宋海静李琦马学斌郝好杰
- 关键词：肿瘤细胞端粒酶RNA干扰
- 小干扰RNA特异性抑制肺肿瘤细胞A549中绿色荧光蛋白基因表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :探讨绿色荧光蛋白 (greenfluorescenceprotein ,GFP)特异的小干扰RNA (smallinterferenceRNA ,siRNA)对肺肿瘤细胞A5 4 9中的GFP基因表达的抑制作用 ,建立以真核表达载体释放生成特异基因siRNA的方法。方法 :构建mU6启动子驱动的含有GFP特异siRNA的真核表达质粒 ,转染A5 4 9肺肿瘤细胞 ,观察共转染时不同剂量siRNA对GFP的抑制效应。结果 :针对GFP核酸序列设计的特异性siRNAGFP siRNA可有效抑制其表达 ,并当比例为 1∶1时效果最佳 ,而空质粒载体及无关RNAi无此效应。结论 :以mU6为启动子的含特异RNAi的质粒可作为抑制特异基因表达的一种新的技术手段 ,并且为研究基因功能的一条有效途径。
- 赵亚力韩为东宋海静李琦马学斌郝好杰
- 关键词：小干扰RNAA549细胞基因表达
- 逆转录病毒介导的小干扰RNA稳定抑制了LRP16基因表达被引量：8
- 2004年
- RNA干涉是近年被广泛关注的一项技术,通过19～21nt的双链核酸介导使靶基因mRNA特异降解,目前已被广泛应用于细胞水平的基因功能研究。通过沉默LRP16基因表达介绍一项利用逆转录病毒介导发夹环样小干扰RNA的策略。首先选择了LRP16基因mRNA翻译起始位点下游+374nt和+668nt位置分别作为小干扰RNA作用靶位点,通过设计21nt的反义序列,构建了pL374和pL6682个以pLPC为骨架的逆转录病毒载体,针对绿色荧光蛋白序列构建pGFPi载体做阴性对照,茎环样结构小RNA由U6启动子驱动转录生成。3个载体分别与VSVG共转染293GP2细胞,包装假病毒,再分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定生成小干扰RNA的细胞。Northernblot实验表明pL374和pL668可分别将LRP16基因抑制90%和60%,为进一步研究LRP16基因功能奠定了基础。另外,首次将mU6启动子序列插入pLPC逆转录病毒载体骨架,将其改造为可介导发夹环样小干扰RNA产生的质粒载体。
- 韩为东李琦赵亚力母义明李雪宋海静郝好杰
- 关键词：逆转录病毒小干扰RNAMCF-7细胞LRP16基因
