辽宁省科学技术计划项目(2001305003)
- 作品数：2 被引量：18H指数：2
- 相关作者：徐明恺张先恩张成刚周亚凤刘丽更多>>
- 相关机构：中国科学院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 抗Her-2-scFv-SEC2融合免疫毒素的构建和功能研究(英文)被引量：3
- 2006年
- 用基因工程方法,将金黄色葡萄球菌肠毒素 C2 与抗人表皮生长因子受体 HER-2 单链抗体 scFv-B1,以一连接短肽连接,构建融合免疫毒素 B-L-SEC2,并用改进的新型表达载体 pASK75-EX,在大肠杆菌 BL21(ED3)中表达. 以不溶性包涵体形式表达的目的蛋白经变性后以镍离子螯和层析纯化,并以透析法进行复性. 流式细胞术和 MTT 实验结果表明,纯化复性的融合免疫毒素 B-L-SEC2,在体外具有与 HER-2 过表达的靶细胞 SK-Br-3 特异性结合的活性,并对该细胞产生显著的特异性生长抑制作用.
- 徐明恺张成刚张惠文周亚凤张先恩刘丽
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素C2肿瘤靶向
- 金黄色葡萄球菌肠毒素C2的基因克隆、表达及其生物学活性被引量：15
- 2005年
- 利用PCR技术从金黄色葡萄球菌的基因组DNA中克隆SEC2全长基因,PCR产物与pGEM-T载体连接,经测序证实后进行亚克隆,构建其表达载体pET-28a-SEC2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达成熟重组蛋白(rSEC2),纯化rSEC2蛋白并对其生物学活性进行研究. 结果表明:成功克隆了SEC2全长基因,测序证实该基因共717 bp,编码239个氨基酸,与GenBank中收录的SEC2成熟蛋白质序列完全一致,SEC2基因登录GenBank(Accession number:AY450554);构建了SEC2的表达载体pET-28a-SEC2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,可溶性的rSEC2经Ni2+亲和层析纯化达到电泳纯,纯化的rSEC2蛋白经蛋白质印迹检测,并能有效刺激人外周血单个核细胞的增殖,被rSEC2刺激的外周血单个核细胞在体外对肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用.
- 徐明恺张成刚周亚凤张先恩
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆表达生物学活性
