贵州省科技厅农业攻关项目(2011-3047)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 相关作者：林世锋任学良王仁刚王东茂张拓更多>>
- 相关机构：贵州省烟草科学研究所北京蛋白质组研究中心贵州省烟草科学研究院更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅农业攻关项目中国烟草总公司科技项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 三个烟草防御素基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2012年
- 为从烟草中克隆与植物抗病虫反应相关的防御素基因,以辣椒防御素基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到3个防御素基因(NtDEF1、NtDEF2和NtDEF3),并对其进行了序列分析。结果表明,3个防御素cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码78、77、76个氨基酸,具有8个半胱氨酸的高度保守结构等典型的植物防御素特征,成熟肽含有γ-硫素蛋白功能结构域。通过同源比对和进化分析发现,NtDEF1、NtDEF2和NtDEF3的氨基酸序列与辣椒的一致性最高为50%-87%,亲缘关系较近;但与已报道的烟草属植物防御素的一致性仅为33%-40%,亲缘关系较远,表明NtDEF1、NtDEF2和NtDEF3是烟草中未报道的3个防御素基因。
- 林世锋任学良王轶王仁刚
- 关键词：烟草防御素克隆
- 烟草肌醇半乳糖苷合成酶基因NtGolS1的克隆及序列分析被引量：3
- 2012年
- 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS,以辣椒GolS基因为探针,通过电子克隆法从烟草栽培品种K326中分离出一条编码GolS基因的cDNA序列,暂被命名为NtGolS1。NtGolS1包含一个完整的开放读码框,编码343个氨基酸,具备糖基转移酶保守结构域;序列比对结果表明,NtGolS1蛋白与其他植物的GolS蛋白具有很高的相似性;系统进化树分析表明,NtGolS1与耐旱植物维柯萨的Gols亲缘关系最近。这些结果为进一步研究NtGolS1的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供理论基础。
- 林世锋王仁刚任学良王东茂张拓黄亚娟
- 关键词：烟草克隆
- 烟草根系蛋白质双向电泳样品制备方法的比较被引量：6
- 2012年
- 为探索适于烟草根系蛋白质组学研究的样品制备方法,以栽培品种K326生长期根系为材料,比较了常规裂解液法、TCA/丙酮沉淀法、Trizol抽提法和酚法等4种总蛋白质的提取方法。对制备的样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)检测。结果表明:酚法最佳,所获蛋白在单向SDS-PAGE中形成条带数目多而清晰;经双向电泳分离用银染显色,可检测约548个蛋白点,图谱分辨率较好,蛋白点清晰,主要集中在等电点pH5～8、相对分子量25.0～70.0kD,可有效解析烟草根系的蛋白质组。
- 林世锋张拓史跃伟王东茂王志红杨志晓谢升东魏开华任学良
- 关键词：烟草根系蛋白质蛋白质组蛋白提取双向电泳
- 烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶小亚基基因的克隆及组织表达谱被引量：10
- 2014年
- 为揭示牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPPS)小亚基在烟草(Nicotiana tabacum)中的生理功能,采用电子克隆的方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,从烟草中克隆到1个牛儿基牛儿基焦磷酸合成酶小亚基基因的cDNA序列,命名为NtGGPPS5(GenBank登陆号:KF316932)。该基因全长1320 bp,编码332个氨基酸,与番茄(Solanum lycopersicum,XP_004246572)及其野生种(Solanum pennellii,ADZ24721)的GGPPS小亚基的氨基酸序列一致性均为92%,具有一个特征性的异戊二烯合成酶保守的天门冬氨酸富集区。进化分析表明,植物GGPPS分为大亚基和小亚基两个分支,而且NtGGPPS5属于小亚基。实时荧光定量PCR试验表明,NtGGPPS5基因在烟草根、茎、叶和芽中均有表达,表达量为芽>叶>茎>根。
- 林世锋王仁刚张孝廉邹颉钟晓武郭玉双付强赵杰宏任学良
- 关键词：烟草基因克隆
- 烟草LEA3基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因,以番茄LEA3基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到2个第3组LEA基因(NtLEA3-1和NtLEA3-2),并对其进行了序列分析。结果表明:2个LEA3基因的cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码167和166个氨基酸,具有8个LEA3基元序列。亲水性分析表明NtLEA3-1和NtLEA3-2蛋白富含亲水氨基酸,是一种高度亲水性的蛋白,其蛋白二级结构中均以α-螺旋构象为主。NtLEA3-1和NtLEA3-2的氨基酸序列与番茄的一致性最高为79%,与其他已经发现的LEA3蛋白的一致性在42%～62%之间,表明NtLEA3-1和NtLEA3-2是2个新的烟草LEA3基因。
- 林世锋任学良王轶王东茂张拓王仁刚
- 关键词：烟草克隆
- 烟草β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2012年
- 为有效调控烟草类胡萝卜素的合成代谢,从普通烟草中克隆到与植物类胡萝卜素合成代谢相关的β-胡萝卜素羟化酶基因BCH,以辣椒BCH基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中分离出一条编码BCH基因的cDNA序列,暂命名为NtBCH1(GenBank登录号JQ410446)。NtBCH1包含一个完整的开放阅读框,编码309个氨基酸,具备脂肪酸羟化酶超家族保守结构域。序列比对结果表明,NtBCH1蛋白与其他植物的BCH蛋白具有很高的相似性。系统进化树分析表明,NtBCH1与番茄的亲缘关系最近。
- 林世锋王仁刚王轶张吉顺任学良
- 关键词：普通烟草克隆
- 烟草3个甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的甜菜碱醛脱氢酶(EADH)基因,以枸杞BADH基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到3个BADH基因(NtBADH1、NtBADH2、NtBADH3),并对其进行了序列分析。结果表明:3个BADH基因的cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码504个氨基酸,具有醛脱氢酶家族高度保守的十肽(VTLELGGKSP)以及与酶功能有关的半胱氨酸残基(C)。烟草3个BADH与其他物种在蛋白质水平上表现较高的相似性,NtBADH1和NtBADH2在进化上与同科的番茄BADH蛋白距离较近,NtBADH3在进化上与同科的枸杞BADH蛋白距离较近。这些结果为进一步分析该类蛋白的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供了基础资料。
- 林世锋任学良王轶王东茂张拓王仁刚
- 关键词：烟草甜菜碱醛脱氢酶基因克隆
