天津市科技发展战略研究计划项目(05YFSYSF01300)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：陈传贵孙晋津陈剑秋刘庚张宝帅更多>>
- 相关机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- rAAV介导的HIF-1α—RNAi载体的构建被引量：4
- 2006年
- 目的构建以rAAV为载体、GFP为报告基因和HIF-1α为靶基因的RNA干扰。方法提取人基因组DNA，PCR扩增人H1启动子，插入载体质粒pAAV-hrGFP的CMV启动子前方Mlu Ⅰ单克隆位点，构建成pH1—hrGFP；根据HIF-1α的有效干扰位点，合成两条分别为58bp互补的寡核苷酸链，通过体外退火形成双链，然后插入pH1-hrGFP的H1启动子尾部Xba Ⅰ和MunⅠ位点，构建成pH1—siRNA；将载体质粒pH1-siRNA和辅助质粒pRC、pHelper共转染HEK293细胞，反复冻溶后收集上清，浓缩纯化，电镜观察病毒形态和ELISA法测定病毒滴度。结果构建的pH1-hrGFP质粒，通过酶切、PCR检测以及测序鉴定均正确；构建的pH1—siRNA，通过酶切及测序鉴定也正确；包装的rAAV经电镜检测形态正常，滴度达1．2×10^12 v．p／mL。结论成功构建了rAAV介导的HIF-1α—RNAi表达载体，为今后的体内外试验奠定了基础。
- 陈传贵陈剑秋孙晋津王丰
- 关键词：重组腺相关病毒缺氧诱导因子
- 重组腺相关病毒介导的靶向缺氧诱导因子-1α小干扰RNA联合抗坏血酸在乏氧条件下对MiaPaCa2细胞增殖和凋亡的影响
- 2008年
- 最近研究结果显示，缺氧诱导因子（HIF）-1α在肿瘤细胞缺氧适应过程中起着中枢调节作用，与肿瘤细胞的增殖、凋亡、细胞周期等密切相关，而胰腺癌组织中有高丰度的HIF—1α表达。我们以重组腺相关病毒（rAAV）为载体介导的靶向HIF-1α小干扰RNA联合抗坏血酸，在乏氧条件下观察其对MiaPaCa2细胞增殖和凋亡的影响。
- 陈传贵孙晋津刘庚陈剑秋
- 关键词：重组腺相关病毒介导小干扰RNA缺氧诱导因子-1Α细胞增殖抗坏血酸凋亡乏氧
- 靶向HIF-1α小干扰RNA对裸鼠MiaPaCa2细胞移植瘤生长的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:初步探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导的靶向缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)小干扰RNA对裸鼠Mia-PaCa2人胰腺癌细胞移植瘤生长的影响。方法:首先构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF。将rAAV-hrGFP、rAAV-siHIF分别转染对数生长的MiaPaCa2细胞,在乏氧条件下进行培养,应用Real-Time PCR、Western Blot和ELISA法观察其对MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA、蛋白和VEGF表达的影响。将MiaPaCa2细胞接种于裸鼠皮下,形成荷瘤小鼠后随机分别肌注ddH2O(空白对照组)、rAAV-hrGFP(空载病毒组)和rAAV-siHIF(干扰病毒组),30d后处死荷瘤裸鼠,取出移植瘤并测量肿瘤的大小及肿瘤的质量,应用免疫组化染色观察各组肿瘤标本HIF-1α、VEGF、CD34的表达并计数微血管密度(MVD)。结果:体外实验发现,干扰病毒组MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达以及VEGF的分泌低于空白对照组(均P<0.01)。体内实验发现,干扰病毒组裸鼠移植瘤的生长和HIF-1α、VEGF及CD34的表达也低于空白对照组(P<0.01或P<0.05)。而空载病毒组与空白对照组相比,体内外实验结果差别均无统计学意义(均P>0.05)。结论:rAAV介导的靶向HIF-1α小干扰RNA有抑制裸鼠MiaPaCa2细胞移植瘤生长的作用,其机制可能是通过抑制移植瘤的血管生成而实现的。
- 陈传贵陈剑秋孙晋津刘庚
- rAAV介导的靶向HIF-1α小干扰RNA在乏氧条件下对MiaPaCa2细胞Glut-1表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:以重组腺相关病毒(rAAV)为载体介导以HIF-1α为靶点的小干扰RNA,在厌氧培养条件下作用于Mia-PaCa2人胰腺癌细胞,观察其对糖代谢反应关键酶——葡萄糖转运体-1(Glut-1)表达的影响。方法:构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF。将rAAV-hrGFP、rAAV-siHIF-1α分别转染对数生长的MiaPaCa2人胰腺癌细胞,在乏氧条件下进行培养,应用Real-Time PCR、RT-PCR、Western Blot法观察其对Mia-PaCa2细胞HIF-1α mRNA、蛋白以及Glut-1 mRNA、蛋白表达的影响。结果:Real-Time PCR和Western Blot检测发现,rAAV-siHIF-1α能够抑制MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达。RT-PCR和Western Blot检测发现,rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2细胞Glut-1 mRNA和蛋白的表达。结论:rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2人胰腺癌细胞糖代谢关键酶Glut-1表达的作用。
- 张宝帅陈传贵陈剑秋孙晋津
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α小干扰RNA重组腺相关病毒
