国家自然科学基金(30471104) 作品数:10 被引量:165 H指数:8 相关作者: 张天真 郭旺珍 张海洋 郑永战 魏利斌 更多>> 相关机构: 南京农业大学 河南省农作物新品种重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
雷蒙德氏棉EST-SSRs分布特征及开发与利用 被引量:30 2006年 微卫星或简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)存在于表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)中.为了在棉花中开发EST—SSR功能性标记,利用生物信息学方法对NCBI网上公开的63485条雷蒙德氏棉(Gossypium raimondii Ulbrich)ESTs序列进行EST-SSRs特征分析.剔除冗余序列,得到非冗余序列58906条.在非冗余序列中发现含不同重复基元SSRs的EST序列有2620条,共2818个EST-SSRs,EST-SSRs序列的频率是4.45%,平均相隔14.8kb出现一个SSR.在1~6bp的重复基元中,三核苷酸重复基元的SSRs出现频率最高(38.31%),其次是二核苷酸(24.09%)、单核苷酸(23.35%).对所有的重复基元类型进行统计分析发现,所占比例最大的是A/T(18.67%),其次是AT/TA(14.83%).在复合型(compound)中发现三核苷酸串联三核苷酸的重复基元出现频率最高,为48.65%.利用Prime3软件,设计了1554对EST-SSRs引物,随机选用300对对本室四倍体作图亲本陆地棉TM-1和海岛棉海7124进行多态性检测,其中129对有多态性,多态性频率为43%.这些EST-SSRs将有效用于不同棉种间的分布特征比较及染色体定位等方面研究. 王长彪 郭旺珍 蔡彩平 张天真关键词:EST-SSRS 分子标记 多态性 两个陆地棉过氧化物酶cDNA的克隆和鉴定 被引量:11 2007年 从陆地棉优质材料7235不同发育时期的棉纤维混合cDNA文库中分离出2个与过氧化物酶相关的cDNA克隆GhPOD1和GhPOD2。GhPOD1是利用5′RACE技术得到的长度为1 489 bp的完整cDNA序列,开放读码框长度为816 bp,编码271个氨基酸,BLAST结果表明,该基因和拟南芥中已报道的过氧化物酶基因同源性最高。GhPOD2是通过对cDNA克隆直接测序获得,其插入片段长度为1 355 bp,开放读码框长度为999 bp,编码332个氨基酸,BLAST结果表明,该cDNA序列与已报道的1个陆地棉纤维过氧化物酶基因(pod8,L08199)氨基酸相似性达99%。RT-PCR分析表明GhPOD1是一个组成性表达的基因,而GhPOD2在根中不表达,而在茎、叶、胚珠和纤维细胞中表达,并从开花后14 d起,在纤维细胞中表达量逐渐减弱。进化树分析显示GhPOD1与已知的11个过氧化物酶基因距离都较远,是1个新的陆地棉过氧化物酶基因;GhPOD2与相似性高的pod8在同一分支,但与其余的第3类过氧化物酶也有较大的差异。Southern杂交结果表明这两个基因在陆地棉基因组中都存在2个拷贝,推测A、D亚组中各有1个拷贝。GhPOD1和GhPOD2的棉花转基因功能验证正在进行。 郭媖 郭旺珍 张天真关键词:棉花 过氧化物酶 克隆 渝棉1号优质纤维QTL的标记与定位 被引量:40 2007年 利用陆地棉遗传标准系TM-1和优质品种渝棉1号组建了(TM-1X渝棉1号)R和R2,3分离群体。通过5544对SSR引物对亲本进行筛选,获得178个多态性标记,用其中138个构建了总长为959.7cM的遗传图谱,覆盖棉花基因组的19%。应用复合区间作图法分析了该组合的R单株和R:,家系纤维品质性状,共检测到12个纤维品质数量性状基因座(QTL),包括1个纤维长度的、4个纤维强度的、3个马克隆值的、3个整齐度的和1个伸长率的,分别解释各性状表型变异的6.1%、5.3l%~14.62%、7.88%~19.17%、7.4%~11.71%和8.26%。研究还发现Chr.23和Chr.24是优质纤维QTL的富集区。 王娟 郭旺珍 张天真关键词:陆地棉 纤维品质 QTLS Comparative Development of Lint and Fuzz Using Different Cotton Fiber-specific Developmental Mutants in Gossypium hirsutum 被引量:4 2007年 一系列纤维特定的异种,或细菌原生质,最近在纤维开发的学习被使用了。在当前的学习,扫描电子显微镜学(SEM ) 被用来在高地棉花的不同遗传型(Gossypiumhirsutum ) 在棉绒和微毛开始调查发展差别。这些纤维异种包括了主导的裸体种子 N1,后退的裸体 seedn2, Xuzhou-142 lintless-fuzzless (XZ142WX ) , Xinxiangxiaojilintless-fuzzless (XinWX ) , Xinxiangxiaojilinted-fuzzless (XinFLM ) 与 TM-1,细胞发生、基因的试验性的标准储备,,控制。纤维开始的特征为微毛开始从 -1 被分析到 +1 天柱子开花期(dpa ) 并且在 4 和 5 dpa。我们的数据建议了在开花期(Odpa ) 的白天集中的那棉绒开始,并且当微毛开始在 4dpa 开始了时,在 1dpa 显著地伸长了,尽管微毛伸出的形状不同于棉绒纤维的。纤维开始在小卵上首先发生了索的冠。比作 TM-1,在 N1and XinFLM 在开发和纤维伸出有著名延迟。显微镜学数据也证明 thatlintless-fuzzless 异种(XZ142WX 和 XinWX ) 在早发育阶段期间开发了不规则的伸出,它是不能的长成纤维。 Da-Yong Zhang Tian-Zhen Zhang, Zhi-Qin Sang Wang-Zhen Guo关键词:电子扫描 棉花腺苷高半胱氨酸水解酶cDNA的克隆、表达及染色体定位 被引量:13 2008年 腺苷高半胱氨酸水解酶是调节细胞内甲基反应的一个关键酶。通过对高品质纤维陆地棉品系7235的棉纤维混合cDNA文库随机测序,得到一个棉花腺苷高半胱氨酸水解酶(编号:g073a03a,GhSAHH)的cDNA序列。该cDNA序列长1598bp,利用5′RACE技术得到上游318bp的片段,序列拼接获得全长为1916bp的cDNA序列,ORF为1458bp,编码485个氨基酸,其理论上的等电点pI=5.69,分子量MW=53.2kD。该基因在不同组织、器官中均表达,在根、下胚轴和纤维发育早期优势表达。根据Southern杂交结果推测GhSAHH基因在陆地棉基因组中为单拷贝。利用本实验室陆地棉遗传标准系TM-1和海岛棉海7124培育的含140个单株的BC1作图群体,将GhSAHH基因定位在第20号染色体上。 佘义斌 朱一超 张天真 郭旺珍关键词:棉花 克隆 一个新的棉花MYB类基因(GhTF1)的克隆及染色体定位分析 被引量:9 2008年 MYB类转录因子是指含有MYB结构域的一类转录因子,广泛参与植物发育和代谢调节。含2个MYB结构域的R2R3类MYB转录因子在植物体内主要参与次生代谢的调节和控制细胞的形态发生。从优质材料7235不同发育时期的棉纤维混合cDNA文库中克隆了一个棉花MYB转录因子基因GhTF1(GenBank登录号:EF651783)。该cDNA序列长1115bp,其开放读码框长度为771bp,编码256个氨基酸。表达特征分析表明,该基因在陆地棉7235不同组织中均表达,但表达量不同,特别在开花前1d,开花后8d和11d的纤维细胞中优势表达。该基因在二倍体棉种非洲棉和雷蒙德氏棉中开放读码框区的序列较保守,但在非编码区差异较大,在内含子区存在大片段插失和碱基替换现象。Southern杂交结果表明该基因在陆地棉基因组中存在2个拷贝,推测A、D亚组中各有1个拷贝。利用海7124和TM-1两亲本配置的BC1作图群体,将GhTF1定位在染色体10上。 房栋 吕俊宏 郭旺珍 张天真关键词:棉花 MYB基因 克隆 基因定位 陆地棉两个纤维突变体的遗传分析 被引量:8 2007年 用新乡小吉无絮与TM-1和徐州142无絮杂交,用新乡小吉无绒有絮突变体与新乡小吉无絮、徐州142无絮以及隐性光子n2杂交,共配制5个F2组合和2个F2∶3家系来分析这两个棉纤维突变体的遗传。遗传分析表明:新乡小吉无絮与TM-1在纤维和短绒发育方面存在至少2个位点的差异;新乡小吉无绒有絮突变体是新乡小吉无絮控制纤维发育基因发生显性突变造成的,两者在棉纤维发育上仅有1个位点的差异。等位性测验表明,控制新乡小吉无絮纤维和短绒发育的基因与控制徐州142无絮基因等位;控制新乡小吉无绒有絮突变体纤维和短绒发育的基因与隐性光子n2等位。不论采用那种分析方法,新乡小吉无绒有絮突变体与新乡小吉无絮都仅存在一个纤维发育基因的差异。 丁业掌 郭旺珍 张天真关键词:陆地棉 突变体 纤维 短绒 芝麻EST-SSR标记的开发和初步研究 被引量:38 2008年 为加速分子标记在芝麻研究中的应用,利用网上现有的芝麻EST(expressed sequencetags)数据信息,开展了芝麻EST-SSR功能性标记的开发和利用研究。在所有的3328条芝麻EST序列中共确认得到1785条非冗余EST序列。其中,在含有微卫星重复的148条序列中共检测有155个EST-SSR。非冗余EST序列总长为774.27kb,平均每4.99kb含有一个EST-SSR。EST-SSR的分布频率和特征分析表明,以AG/TC为重复基元(motif)的SSR出现最多,占总SSR的37.42%。利用这些序列,设计开发了50对EST-SSR引物,并分别选用36个芝麻、2个棉花、2个大豆和2个油葵进行多态性和通用性研究。其中44对引物在供试芝麻材料中扩增出条带,共产生108个位点,平均每对引物产生2.45个位点,多态信息含量(polymorphism information content,PIC)平均值为0.390。根据遗传相似性系数进行聚类,有26个芝麻材料聚类在两个大的亚类(III和IV)中,聚类结果表明芝麻的基因型与地理来源之间没有必然的联系。此外,分别有2对、3对和4对引物可以在棉花、大豆和油葵中进行通用性扩增。本研究证实这种全新开发的芝麻EST-SSR标记在芝麻遗传多样性分析、遗传图谱构建以及比较基因组等研究方面有广阔的利用前景。 魏利斌 张海洋 郑永战 郭旺珍 张天真关键词:芝麻 陆地棉优质纤维QTL的分子标记筛选及优质来源分析 被引量:20 2008年 利用陆地棉优质品系7235、渝棉1号做亲本,以7235×渝棉1号的F2与F2:3分离群体为材料,开展不同来源棉花高强纤维QTL微卫星标记筛选,为进一步进行优质纤维QTL聚合育种提供基础。通过5514对SSR引物对亲本进行多态性筛选,获得117个多态性标记,用其中80个标记构建了总长为1147.8cM的遗传图谱;应用复合区间作图法分析了该组合的F2单株和F2:3家系纤维品质性状,共检测到36个纤维品质数量性状基因座(QTL),其中与纤维长度、比强度、细度、伸长率及整齐度相关的QTL各6、8、7、8和7个,分别解释各性状表型变异的3.4%~14.4%、5.0%~42.4%、6.5%~11.7%、5.1%~19.4%和6.9%~14.0%。通过分析来源于7235和渝棉1号高强QTL的染色体分布,表明两亲本在D7、D8、D9染色体上都存在控制纤维比强度的QTL,其中存在于D7和D8染色体上来自双亲的QTL紧密连锁,成簇分布在染色体上的一定区间内。而在D7和D9染色体上也发现双亲完全相同的优质QTL,其优质供体可能来自陆地棉优质品系PD4381。进一步分析了获得的QTL在聚合育种中的应用潜力。 胡文静 张晓阳 张天真 郭旺珍关键词:陆地棉 纤维品质 QTL 芝麻DNA和RNA同步提取方法 被引量:7 2008年 高质量的DNA和RNA是分子生物学实验顺利进行的基础。本文首次针对CTAB法提取芝麻DNA和RNA的效果进行了研究,在此基础上改进了提取程序和相关技术参数,总结出一套可同步提取高质量芝麻DNA与RNA的方法。利用该方法提取的DNA及RNA经RAPD、SSR、SRAP、DDRT-PCR、AFLP、cDNA-AFLP等分子试验验证,质量好,符合后续试验的要求。这套方法为顺利开展芝麻分子生物学研究奠定了基础。 魏利斌 张海洋 郑永战 郭旺珍 张天真关键词:芝麻 DNA RNA