广东省科技计划工业攻关项目(2003A3080202)
- 作品数：7 被引量：115H指数：4
- 相关作者：邵建永邓玲吴秋良冯惠霞郜红艺更多>>
- 相关机构：中山大学江门市中心医院广东省妇幼保健院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用原代细胞培养和人全基因表达谱芯片筛选鼻咽癌差异表达基因被引量：4
- 2007年
- 目的利用细胞的原代培养技术及人全基因表达谱芯片技术初步筛选出鼻咽癌差异表达基因,以发现与鼻咽癌发生、发展相关的新的候选基因。方法分别用1例鼻咽癌细胞株C666及5例鼻咽癌培养出的原代细胞和3例鼻咽正常上皮的原代细胞,进行基因表达谱分析,并以荧光定量PCR及免疫组织化学验证芯片结果。结果原代培养的鼻咽癌细胞和鼻咽正常上皮细胞通过细胞角蛋白的免疫细胞化学染色、EBER1原位杂交和EBV-DNA荧光定量PCR证实;鼻咽癌原代细胞和鼻咽正常上皮原代细胞的基因表达谱有显著差异;4例以上共同表达的差异基因有493个,包括上调基因264个,下调基因229个。荧光定量PCR及免疫组织化学结果和芯片结果一致。结论用原代培养细胞及人类全基因组基因芯片构建基因表达谱能够准确、高效地筛选出鼻咽癌相关的差异表达基因,该基因表达谱的建立为研究鼻咽癌分子生物学机制、鼻咽癌的分子分型和分子诊断提供了重要的分子依据。
- 李瑞平邵建永邓玲曾木圣宋立兵李满枝吴秋良
- 关键词：寡核苷酸芯片基因表达谱原代细胞培养
- 鼻咽癌患者血浆游离EBV/DNA的定量检测及其临床意义被引量：43
- 2004年
- 目的:探讨血浆EBV/DNA定量分析,在鼻咽癌早期诊断、临床分期、预后判断和监测放疗后转移复发中的临床意义。方法:采用荧光定量PCR方法定量检测经病理确诊为鼻咽癌的120例初治、90例放疗后随诊患者,其中包括60例放疗后持续缓解,30例远处转移和局部复发患者的血浆EBV/DNA含量。结果:初治、远处转移和局部复发的鼻咽癌患者血浆中游离的EBV/DNA检出率分别为96.0%、95.0%和100%,显著高于治疗后持续缓解鼻咽癌患者、健康对照者和非鼻咽癌的肿瘤患者;初治鼻咽癌患者各TNM分期之间血浆EBV/DNA拷贝数有显著统计学差异,晚期患者(Ⅲ+Ⅳ)期血浆EBV/DNA中位拷贝数显著高于早期患者(Ⅰ+Ⅱ)期;初治患者治疗后已出现局部和远处转移者,治疗前血浆EBV/DNA中位数显著高于尚未出现复发转移患者;初治患者治疗前血浆EBV/DNA≥40000拷贝/ml与<40000拷贝/ml两个水平,患者22个月无复发生存率分别为46.1%和92.9%,有显著统计学差异;放疗后复发、转移鼻咽癌患者血浆EBV/DNA的中位拷贝数显著高于治疗后持续缓解患者。结论:采用荧光定量PCR方法检测鼻咽癌患者血浆中游离的EBV/DNA是一种敏感可靠的方法,对于鼻咽癌早期诊断、鉴别诊断、分期、判断预后、监测治疗后复发和远处转移具有重要的临床意义,有可能成为鼻咽癌的血清肿瘤标记物。
- 李宇红邵建永冯惠霞郜红艺张力管忠震曾益新
- 关键词：鼻咽肿瘤荧光定量PCREB病毒DNA
- 肿瘤相关巨噬细胞对鼻咽癌进展和预后的影响被引量：20
- 2006年
- 背景与目的:有研究表明,在肺癌、乳腺癌等肿瘤组织中,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophages,TAMs)与肿瘤的预后呈负相关。然而在胃癌和部分结直肠癌的研究中得出了TAMs与预后呈正相关的结论。本研究旨在探讨TAMs对鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)进展和预后的影响。方法:应用免疫组化技术检测60例鼻咽癌组织中TAMs标记物CD68的表达;分别培养正常巨噬细胞、鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2以及肺癌细胞株95D,将同浓度的3种癌细胞株的上清液加入同量的巨噬细胞中共培养1天,6天及加入LPS活化后继续培养1天,应用ELISA技术检测共培养后TAMs释放的细胞因子TNF-α和IL-10的表达。以与肺癌细胞株95D上清液共培养后的巨噬细胞作为阳性对照;正常巨噬细胞作为阴性对照。结果:鼻咽癌组织中TAMs高密度表达者的3年无瘤生存率(85.7%)明显高于低密度表达者(56.3%)(P=0.017)。与阳性对照组比较,接受鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-2上清液刺激后的TAMs分泌TNF-α较少(73pg/ml,64pg/mlvs.7794pg/ml,P=0.001),经LPS活化后明显增多(6905pg/ml,6788pg/mlvs.137pg/ml,P=0.001);分泌IL-10很少(1pg/ml,1pg/mlvs.94pg/ml,P=0.002),经LPS活化后升高不明显(87pg/ml,99pg/mlvs.416pg/ml,P=0.015),与阴性对照组比较差异无显著性。结论:鼻咽癌组织中TAMs的密度与患者的预后呈正相关;与鼻咽癌细胞上清液共培养后TAMs分泌的细胞因子倾向于杀伤肿瘤细胞,促进机体的抗瘤免疫作用。
- 彭娟丁童郑利民邵建永
- 关键词：鼻咽肿瘤巨噬细胞抗瘤免疫预后
- 线粒体细胞色素C氧化酶RNAi慢病毒载体的构建被引量：2
- 2005年
- 目的:通过构建携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为下一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础。方法:根据线粒体细胞色素C氧化酶设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链,插入到pENTR/U6质粒缺口末端,连接在质粒上生成含RNAi盒的pENTR/U6载体;通过重组作用将pENTR/U6载体的RNAi盒重组到pLenti6/BLOCK-iT-Dest载体上,构建含U6启动子、靶序列和PolⅢ终止子表达框的MTCOX-IshRNA表达重组体;经脂质体导入293FT细胞,包装成慢病毒,收集病毒上清并检测其滴度。Westernblotting检测干扰后细胞内线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。结果:将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功;成功包装成高滴度的慢病毒。Westernblotting检测结果证实构建的MTCOX-IshRNA表达重组体可显著抑制线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。结论:成功构建了携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体。
- 陈艳邵建永吴秋良江高峰夏云飞陈忠平
- 关键词：基因线粒体慢病毒属细胞色素C氧化酶
- 乳腺癌差异表达的MicroRNA的筛选研究被引量：27
- 2009年
- 【目的】应用miRNA芯片技术筛选乳腺癌及癌旁组织差异表达的miRNA,发现与乳腺癌相关的miRNA,为进一步阐明其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。【方法】收集8例新鲜的乳腺癌及其癌旁组织,抽提总RNA并分离出小RNA进行Cy3荧光标记,将标记的小RNA在miRNA芯片上进行杂交反应,应用实时定量RT-PCR方法验证miRNAs芯片结果的可靠性。【结果】对芯片数据进行SAM分析,结果筛选获得16个乳腺癌相关miRNAs,相对于癌旁组织,在乳腺癌组织中9个miRNAs表达上调,7个miRNAs表达下调。其中显著上调的有miR-21,miR-365,显著下调的有miR-497,miR-31。【结论】筛选得到乳腺癌miRNA差异表达谱,其可能与乳腺癌的发生发展有关。
- 黄秀芳邵建永颜黎栩李晓霞杜紫明邓玲梁小曼
- 关键词：MIRNA乳腺癌MIRNA芯片实时定量RT-PCR
- 鼻咽癌病人血浆和外周血白细胞EB病毒DNA定量分析被引量：19
- 2004年
- 目的 比较鼻咽癌 (NPC)病人治疗前后血浆、外周血白细胞Epstein Barr病毒 (EBV)DNA水平的变化及癌组织EBV整合状况 ,探讨这些变化与NPC临床病理变化的关系。方法 对 15 0例初诊NPC病人治疗前后血浆和外周血白细胞、75名正常人血浆和外周血白细胞、4 9例NPC组织及 4 7例鼻咽慢性炎组织EBV DNA进行荧光定量聚合酶链反应 (RQ PCR)分析。结果 NPC病人治疗前血浆EBV DNA水平及检出率分别为 82 5 0 0拷贝 /ml(中位数 )和 92 % ,均显著高于治疗后 (0拷贝 /ml,19% )和正常人 (0拷贝 /ml,12 % ) (P <0 0 5 ) ,而NPC病人治疗后和正常人血浆EBV DNA水平和检出率差异均无显著意义 (P >0 0 5 )。NPC病人治疗前外周血白细胞EBV DNA水平及检出率 (0拷贝 /肌动蛋白 ,2 4 % )与治疗后 (0拷贝 /肌动蛋白 ,14 % )和正常人 (0拷贝 /肌动蛋白 ,16 % )三者间差异均无显著意义 (P >0 0 5 )。NPC病人治疗前、后及正常人血浆EBV DNA水平与对应外周血白细胞EBV DNA水平均无显著相关性 (P >0 0 5 )。EBV DNA(荧光定量PCR法 )和EBER1(原位杂交法 )在NPC组织检出率均为 10 0 % ,显著高于鼻咽慢性炎组织中EBV DNA和EBER1检出率 (分别为 4 0 %和 0 ) (P <0 0 5 )。NPC组织EBV DNA水平为 2 7 8拷贝 /肌动蛋白 (中位值 ) ,?
- 张玉郜红艺冯惠霞邓玲黄马燕胡斌程钢吴秋良崔念基邵建永
- 关键词：鼻咽癌血浆外周血白细胞EB病毒DNA定量
- VEGF在鼻咽癌中的表达及其与预后关系被引量：4
- 2006年
- [目的]研究血管内皮生长因子(VEGF)在鼻咽癌中的表达与鼻咽癌患者预后的关系。[方法]通过组织芯片技术与免疫组织化学方法回顾性研究1990￣2002年期间200例有临床随访资料的鼻咽癌组织中VEGF蛋白的表达情况,应用卡方检验分析鼻咽癌组织VEGF蛋白表达与临床病理参数之间的关系,并通过生存分析计算鼻咽癌组织内VEGF不同表达组的总生存率。[结果]VEGF在鼻咽癌组织中阳性表达主要位于肿瘤细胞胞浆内。VEGF在鼻咽癌组织中的表达与鼻咽癌患者的TNM分期、复发及远处转移呈正相关(P<0.05)。VEGF表达阳性及阴性患者5年生存率分别为40.11%和67.75%,两组生存率存在显著性差异(P<0.01)。[结论]VEGF的表达与鼻咽癌患者TNM分期、复发及远处转移呈明显正相关,其高表达提示预后不良。
- 胡春芳邵琼侯景辉邵建永
- 关键词：鼻咽肿瘤组织芯片血管内皮生长因子预后
