甘肃省自然科学基金(0710RJZA088)
- 作品数：8 被引量：70H指数：5
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- 相关机构：甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 马铃薯sgt2基因启动子的克隆及其活性分析被引量：4
- 2014年
- 糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科和百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶葡糖基转移酶(SGT2)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.本研究采用染色体步移技术,克隆到马铃薯茄啶葡糖基转移酶基因(sgt2)起始密码子上游2 098bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC331038).构建该启动子驱动报告基因gfp∶∶gus的植物双元表达载体p1304sgt2p,采用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达,通过GUS组织化学染色分析sgt2p启动子的活性.结果表明:gus基因在转化烟草叶片中高效表达,克隆的启动子具有活性.
- 魏桂民张金文王蒂张俊莲陆艳梅高宜峰
- 关键词：马铃薯糖苷生物碱启动子克隆
- 不同光质对马铃薯块茎糖苷生物碱积累的诱导效应被引量：16
- 2010年
- 以2个光敏型马铃薯品种(庄薯3号和渭薯1号)和2个光不敏型马铃薯品种(大西洋和夏波蒂)为材料,研究了不同光质对马铃薯块茎糖苷生物碱(SGAs)积累的影响。结果表明:不同光质对马铃薯块茎SGAs积累的影响不同,其中红光(630 nm)的诱导效果最为明显,蓝光次之,橙光、黄光和绿光的作用不明显,紫光基本上无效;红光、白光诱导光敏型马铃薯块茎SGAs的积累量高于光不敏型马铃薯品种,而在橙光、黄光、绿光、蓝光和紫光诱导下2类马铃薯品种的块茎SGAs积累没有规律性。此外,同一光质对不同品种马铃薯块茎SGAs积累的影响不同,说明光诱导块茎SGAs的积累还与马铃薯品种的遗传组成有关。推测,红光是诱导马铃薯块茎SGAs积累的重要信号分子。
- 季彦林王旺田王蒂张金文王威李瑛张菲菲
- 关键词：马铃薯块茎糖苷生物碱光质
- 马铃薯sgt3基因启动子克隆及其功能鉴定被引量：2
- 2016年
- 【目的】克隆马铃薯茄啶鼠李糖基转移酶基因(sgt3)的启动子序列并对其进行功能鉴定.【方法】采用染色体步移技术(genome walking)进行启动子的克隆,构建了该启动子驱动报告基因gfp::gus的植物双元表达载体p1304sgt3p,以pCAMBIA1304为阳性对照表达载体,采用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达及稳定遗传转化,结合GUS组织化学染色对其进行功能鉴定.【结果】电泳图表明为1条长约2 500bp的特异扩增条带,瞬时表达和稳定遗传表达的烟草叶片的GUS组织化学染色结果均显示gus基因在转化烟草叶片中高效表达,并且低于阳性对照,非转化烟草叶片中无表达.【结论】成功克隆到sgt3基因起始密码子上游2392bp的启动子序列并且该启动子具有活性.
- 魏桂民李德文罗莉斯王少铭王军张金文王蒂
- 关键词：马铃薯启动子克隆
- 马铃薯Sgt1基因启动子的结构及功能分析被引量：10
- 2013年
- 糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloids,SGAs)是一类存在于茄科和某些百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶半乳糖基转移酶(solanidine galactosyltransferases,SGT1)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.研究采用染色体步移技术(Genome walking),首次克隆到马铃薯Sgt1基因起始密码子上游2 183 bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC759163).构建该启动子驱动融合报告基因gfp::gus的植物双元表达载体p1304Sgt1p,转化野生型烟草获得Sgt1p::gfp::gus转基因植株,通过GUS组织化学染色分析Sgt1p::gfp::gus转基因植株中Sgt1p启动子的活性.结果表明,gus基因在转基因烟草的根、茎和叶中均表达,在叶中Sgt1p启动子的活性低于CaMV35S启动子,而在根和茎中二者基本相同;光诱导结果显示,光照处理明显增强了Sgt1p::gfp::gus转基因烟草叶片中Sgt1p启动子的活性,表明庄薯3号马铃薯Sgt1p启动子是一种光诱导型启动子.
- 魏桂民张金文王蒂张俊莲陆艳梅高宜峰
- 关键词：马铃薯启动子报告基因
- 马铃薯中糖苷生物碱的提取研究被引量：9
- 2012年
- [目的]优选马铃薯中糖苷生物碱的提取方法和条件。[方法]以新鲜的马铃薯皮为样品,采用乙酸提取-氨水沉淀、超声波辅助酸水提取-氨水沉淀、甲醇提取-氨水沉淀、双溶剂法提取、多溶剂混合提取、酸醇提取-氨水沉淀及乙酸和亚硫酸钠提取-氨水沉淀7种方法对马铃薯中的糖苷生物碱进行提取,通过单因素试验考察提取温度、超声时间、酸浓度对提取效果的影响,优化马铃薯中糖苷生物碱的提取方法与条件。[结果]7种提取方法中,以超声波辅助酸水提取-氨水沉淀法的提取效果最好;最佳提取条件为温度30℃,超声时间20 min,酸度25%。[结论]不用有机溶剂而直接加一定浓度的酸并辅助以超声波振荡的提取方法具有操作简单、提取周期短、提取效果较好的特点。
- 薄丽丽孙晓彦林浩戴明婧牛继平张金文王蒂
- 关键词：马铃薯糖苷生物碱
- 光质与马铃薯块茎细胞信号分子和糖苷生物碱积累的关系被引量：26
- 2010年
- 马铃薯块茎糖苷生物碱(SGAs)含量如果超过20mg100g-1FW,人畜食用即可引起中毒。而马铃薯块茎中SGAs的积累受多种因素的影响,其中受温度与光照影响较大。为减少马铃薯块茎中SGAs的积累,了解SGAs在马铃薯块茎中的积累机制,研究了同一温度下不同光质对马铃薯块茎SGAs的积累的影响。结果表明红光照射后各品种SGAs平均含量比蓝光、白光、黑暗处理分别提高26.02%、55.50%和100.79%,且在α=0.01水平上差异极显著,说明不同光质对马铃薯块茎SGAs含量影响不同,红光影响最大,蓝光次之。同时,马铃薯块茎经不同光质处理后作为第二信使的G蛋白含量在红光下较蓝光、黑暗、白光下分别上升0.95%、2.01%、3.86%,钙调蛋白含量分别增加7.94%、37.41%和87.24%。由此可知,红光是SGAs积累的重要信号分子,其信号作用启动了红光受体PHYB,与第二信使G蛋白和CaM等共同参与马铃薯块茎SGAs的代谢积累。
- 王旺田张金文王蒂陶士珩季彦林吴兵
- 关键词：马铃薯光质信号转导分子糖苷生物碱
- 马铃薯块茎糖基转移酶基因的克隆及其RNAi载体的构建被引量：3
- 2011年
- 为探讨鼠李糖基转移酶(rhamnosyltransferase,sgt3)基因与类固醇糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloid,SGAs)合成关系,揭示sgt3基因在SGAs合成中的作用,本研究根据GenBank No:DQ266437保守区设计特异引物,通过RT-PCR技术获得马铃薯块茎sgt3相似基因;采用生物信息学相关软件分析,预测sgt3相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能,构建基于sgt3基因的植物干扰表达载体。结果表明,克隆的sgt3相似基因与报道的sgt3基因序列相似性达到99.54%,其ORF长为1500bp,编码505个氨基酸残基,具有UDPG糖基转移酶保守结构域及许多重要功能位点;三级结构预测表明,该氨基酸同糖基转移酶单体结构模型相似,为糖基转移酶家族成员,表明可能具有合成类固醇糖苷生物碱功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为HM188447。以此为靶序列,构建由Actin启动子和CIPP启动子驱动的与sgt1和sgt2基因相似度高的含有sgt3基因序列的干扰表达载体,将为糖苷生物碱的合成、代谢的进一步研究及低糖苷生物碱转基因马铃薯品种的培育奠定基础。
- 王旺田张金文王蒂张俊莲司怀军陶士珩
- 关键词：马铃薯基因克隆RNAI载体
- 马铃薯SGAs合成代谢途径末端SGT酶基因克隆及序列分析被引量：11
- 2012年
- 糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科植物和百合科植物的重要次生代谢物,与植物抗逆性和产品品质有密切关系,同时在医药上具有广泛的药理学活性。茄啶:糖基转移酶(SGT)为SGAs合成代谢途径末端关键酶,研究其基因结构及其编码的酶蛋白特性,对于调控植物体内SGAs合成及其通过微生物发酵生产SGTs有重要的作用和意义。通过生物信息学分析方法预测3个糖基转移酶cDNA编码的酶蛋白结构和特性。以马铃薯块茎表皮总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出3个糖基转移酶(SGT1、SGT2和SGT3)基因片段并克隆到pMDR19-T载体。阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,序列分析结果表明,克隆到的sgt1、sgt2和sgt3三个同源的序列片段(1 467～1 518bp),编码488～505个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的高等植物SGT酶基因核苷酸序列(U82367.2、DQ 218276.1和DQ 266437)的同源性均在99.12%以上,氨基酸同源性达到99%以上,3个基因都具有UDPG糖基转移酶保守结构域及许多重要功能位点;PI为5.52～5.62。三级结构预测表明,该氨基酸同糖基转移酶单体结构模型相似,都为糖基转移酶家族成员,具有合成类固醇糖苷生物碱的功能,基因序列已注册到Gen-Bank,序列注册号分别为:sgt1,JN695005;sgt2,JN695006;sgt3,HM188447。
- 牛继平张金文王旺田王蒂陆艳梅张俊莲
- 关键词：马铃薯糖苷生物碱
