国家重点基础研究发展计划(2004CB51880)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：邓洪新魏于全严飞赵新宇杨亚利更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院四川大学中山大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达被引量：10
- 2007年
- 为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究,为基因功能研究提供了便利。
- 严飞赵新宇邓洪新魏于全
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 用脂质体包裹重组survivin腺病毒治疗肿瘤的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的本实验拟用脂质体包裹重组survivin腺病毒治疗肿瘤,观察其抗肿瘤效应。方法在BALB/c小鼠建立CT26结肠癌模型,将小鼠随机分成用脂质体包裹重组survivin腺病毒组、重组survivin腺病毒组、用脂质体包裹空病毒组、脂质体组、PBS对照组5组,观察肿瘤的生长以及小鼠的存活情况和不良反应,并做细胞毒T淋巴细胞(CTL)分析。HE染色观察肿瘤组织及肿大淋巴结的病理改变。结果1用脂质体包裹重组survivin腺病毒对小鼠有免疫保护和治疗作用,小鼠肿瘤生长受到明显抑制,肿瘤大小和存活率与其它组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2肿瘤病理切片显示用脂质体包裹重组survivin腺病毒组肿瘤组织内有较多的淋巴细胞浸润,有大量的坏死灶。3CTL分析显示用脂质体包裹重组survivin腺病毒组免疫小鼠的T细胞具有较高的CT26细胞杀伤活性,并具有特异性及不依赖NK细胞活性。结论用脂质体包裹重组survivin腺病毒对CT26移植瘤有治疗作用。
- 杨亚利丁振宇李秋周行邓洪新田聆魏于全
- 关键词：SURVIVIN脂质体腺病毒结肠癌
- 抑癌基因PTEN在鼻咽癌中的突变及表达被引量：1
- 2009年
- 目的探讨抑癌基因PTEN在鼻咽癌细胞株及组织中的基因突变和蛋白表达缺失情况。方法收集鼻咽癌细胞株4种(CNE-1、CNE-2、HONE1、SUNE1)、经病理组织学确诊为未分化型非角化性鼻咽癌组织标本96例(其中71例同时取癌旁组织)和慢性鼻咽炎的组织标本5例。4种鼻咽癌细胞株、25例未分化型非角化性鼻咽癌组织和5例慢性鼻咽炎组织标本用于检测基因突变,其余71例未分化型非角化性鼻咽癌组织及癌旁组织进行免疫组化,检测PTEN的蛋白表达。采用RT-PCR和直接测序法分析PTEN编码序列基因突变;免疫组织化学SP法观察蜡块包埋的鼻咽癌组织和癌旁组织中PTEN蛋白的表达情况。免疫印迹法检测PTEN及相关蛋白在细胞株中的表达。结果仅1例鼻咽癌组织检测到PTEN基因第8外显子中存在点突变,但属于沉默突变。71例鼻咽癌组织中PTEN蛋白的表达率(30.9%)显著低于癌旁组织(52.1%,P=0.017)。Ⅲ-Ⅳ期肿瘤组织PTEN阳性表达率(25.5%)显著低于Ⅰ-Ⅱ期肿瘤组织(55%,P=0.026)。EB病毒阳性组PTEN蛋白表达率与EB病毒阴性组比较明显降低(P=0.03)。EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)可以下调PTEN蛋白的表达。结论PTEN蛋白的表达缺失在鼻咽癌的发生、发展过程中起着重要作用,其缺失可能与EB病毒有关。
- 杨时平马骏应小芳孟祥祺黄文林
- 关键词：鼻咽肿瘤突变基因表达
